UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS

ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA

GUÍA DE PRÁCTICAS

SEGUNDO AÑO

PRACTICA 8. DETERMINACIÓN DE
TRIGLICÉRIDOS EN PLASMA
 DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN PLASMA

I FUNDAMENTO

Los triglicéridos son compuestos de naturaleza lipídica que normalmente se

ingiere en la dieta. Aproximadamente el 90% de la grasa dietaria corresponde a
los triglicéridos y el 10% restante a colesterol, fosfolípidos, glucolípidos, etc.

El ser humano tiene la capacidad de sintetizar triglicéridos, proceso que se

realiza en el hígado principalmente a partir de carbohidratos, mientras que en el
tejido adiposo los triglicéridos se sintetizan a partir de los triglicéridos que son
conducidos por los quilomicrones y VLDL.

En el suero los triglicéridos endógenos (sintetizados en el hígado) son

transportados principalmente por los VLDL.

La importancia de la determinación de los niveles de triglicéridos en el plasma

radica en que estos compuestos están vinculados con diversas patologías
como: hipotiroidismo, nefrosis, diabetes mellitus, dislipidemias, etc.

Fundamento de la técnica

La determinación de triglicéridos en suero se fundamenta en la siguiente

secuencia de reacciones enzimáticas.

Triglicéridos glicerol + ácidos grasos

Glicerol + ATP glicerol-1-fosfato + ADP

Glicerol-1-fosfato H2O2 + dihidroxiacetona fosfato

H2O2 + 4-aminofenazona quinonimina (color rojo)

II OBJETIVO

Determinar el nivel de triglicéridos en plasma

III METODOLOGÍA
Muestra
Previo ayuno de 12 a 14 horas, obtener suero o plasma mediante la
centrifugación de la muestra de sangre utilizando una centrífuga clínica. Este
proceso debe realizarse en un tiempo no mayor a dos horas posteriores a la
extracción de la sangre. Los triglicéridos en suero son estables 3 días en
refrigerador (2-10ºC). No congelar.

Equipos

 Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
 Baño de agua a 37ºC.
 Reloj.

Materiales

 Kit de triglicéridos.
 Estándar: solución de glicerol 2,26 mmol (equivale a 2 g/L de troleìna).
 Gradilla.
 Tips amarillos (10 – 200 µL) y azules (100-1000 µL).
 Tubos de vidrio 13x100 mL.
 Contenedores de seguridad o bolsas rojas de bioseguridad.
 Micropipetas o pipetas para medir volúmenes indicados.
 Propipeta.
 Guantes.

Procedimiento

Para la determinación de triglicéridos en suero, deben de disponerse de tres

tubos de ensayo debidamente marcados:

Reactivos Blanco Estándar Problema

Suero (µL) _ _ 10

Estándar (µL) _ 10 _

Reactivo de
1 1 1
trabajo (mL)
Mezclar e incubar durante 5 minutos a 37ºC o 20 minutos a temperatura
ambiente (18-25ºC). Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm. El color de
la reacción final es estable 60 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída
dentro de este tiempo.

Cálculo de concentración de triglicéridos en suero o plasma

C estándar
Triglicéridos en plasma (mg/dL) = DO muestra x
DO estándar

Conversión de unidades

 Triglicéridos (g/L) = 0.01 x Triglicéridos (mg/dL)

 Triglicéridos (mg/dL) = 0.013 x Triglicéridos (mmol/L)

Valores de referencia

 Deseable: Menor 150 mg/dL.

 Moderadamente elevado: 150 – 199 mg/dL.
 Elevado: 200 – 499 mg/dL.
 Muy elevado: Mayor o igual 500 mg/dL.

Precauciones

 Los reactivos son para uso diagnostico “in vitro”.

 No ingerir. Evitar el contacto con la piel y los ojos. En caso de derrame o
salpicaduras, lavar con abundante agua la zona afectada.
 Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo
en el laboratorio de análisis clínicos.
 Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la
normativa local vigente.