UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO

ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

BIOLOGÍA CELULAR
PROTOCOLO PARA EL ESTUDIOS DE CELULAS
ANIMALES

DOCENTE: M.Cs. Gustavo Quispe Montoya

ESTUDIANTES:
Malu Luana Jaramillo Pacheco 155499
Brasayra Danasel Gomez Mayhua 133359
Lilia Victoria Halanocca Yana 151135
Luz cielo Manrique Cordova 150491

Cusco-Perú
2018
RECONOCIMIENTO Y TINCION DE LOS HEPATOCITOS DEL HIGADO DE
POLLO (Gallus gallus)

INTRODUCCIÓN
En las aves se presenta un sistema diferente para almacenar comida y llevar a cabo la
digestión; la comida desciende al estómago a través del esófago y entra al estómago
verdadero.
El hígado es el órgano accesorio indispensable en el tracto intestinal desde el estómago y
el intestino delgado, la mayoría de nutrientes absorbidos viajan a través de la vena porta
a el hígado es así que es el responsable de la filtración de todas las toxinas en el cuerpo
de un pollo y realiza un papel importante en el metabolismo de nutrientes y también forma
la bilis, fluido esencial para la absorción de lípidos en el intestino delgado.
Las funciones fisiológicas del hígado: secreción de bilis decodificación de compuestos
peligrosos, nocivos. Metabolismo de proteínas, carbohidratos y lípidos. Almacenamiento
de vitaminas, almacenamiento de carbohidratos destrucción de células rojas de la sangre
formación de proteínas plasmáticas inactivación de hormonas poli peptídicas.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Los hepatocitos son células polarizadas, es decir, hay diferencias celulares entre las partes
en contacto con los canales sinusoidales y las que forman parte de los canalículos biliares.
Estos poseen abundantes depósitos de glucógeno, inclusiones lipídicas; uno de los
orgánulos que destaca por su abundancia es el retículo endoplasmático liso, aunque su
cantidad depende del estado metabólico. Donde hay depósitos de glucógeno suele haber
abundante retículo endoplasmático liso.
Para ello se realizó un protocolo para el estudio de las células del hígado hepatocitos del
hígado empleando el método de tinción con hematoxilina y eosina para poder visualizar
con la ayuda del microscopio electrónico dado su aumento más útil y su resolución mayor,
y comprender la micro-anatomía de las células del hígado del pollo.

OBJETIVO

 Identificar y reconocer mediante preparación post mortem los hepatocitos del hígado
de pollo
 El objetivo es conducir al estudiante a comprender la micro-anatomía de las células
del tejido los hepatocitos del hígado de (Gallus gallus) pollo.

FUNDAMENTO TEÓRICO

La organización celular del hígado es relativamente sencilla puesto que es la repetición

de una estructura básica denominada lobulillo hepático. Los lobulillos están formados por
el conjunto de hepatocitos y suelen estar separados entre sí por tejido conectivo. Tienen
forma de prisma poligonal. En secciones transversales tiene una forma aproximada de
hexágono con una vena central o centro lobulillar de gran diámetro
Los hepatocitos suponen más del 75 % del hígado y se organizan en láminas o
trabéculas con perforaciones, frecuentemente de una célula de espesor, que se fusionan
entre sí para formar un entramado complejo de forma parecida a una esponja.

Los hepatocitos son los responsables de la secreción endocrina de una gran cantidad
de proteínas plasmáticas como albúminas, lipoproteínas (transportan colesterol),
glicoproteínas como la transferrina, protrombina y fibrinógenos (responsables de la
coagulación sanguínea). También almacenan y modifican vitaminas tales como la A,
la D o la K, y hormonas tales como hormona del crecimiento. La insulina y el glucagón
son hormonas degradadas principalmente en el hígado. Son centros de detoxificación
de primer orden, participando en el catabolismo de toxinas y moléculas externas al
organismo .Son importantes en el metabolismo de carbohidratos (gluconeogénesis,
glucogenolisis y gluconeogénesis) y lípidos (síntesis de triglicéridos y colesterol. En
el hígado también se elimina por fagocitosis un 20 % de los glóbulos rojos envejecidos
(el 80 % restante se elimina en el bazo) por medio de macrófagos denominados células
de Kupffer. Los hepatocitos también producen la bilis.

El proceso de reconocimiento de los hepatocitos del hígado de pollo (Gallus gallus) sigue
ciertas pautas para su y observación correcta.

El primer paso para la preparación post mortem es la obtención del tejido a estudiar por
necropsia en este caso del hígado de pollo (Gallus gallus), el segundo es la fijación ya
que detiene estructuras celulares y tisulares manteniéndolas lo más parecido a lo que
fueron en vida. El tercer paso es la deshidratación que tiene por finalidad la extracción
del agua del tejido para que la parafina ocupe su lugar, para ello se emplea una serie de
alcoholes. El cuarto paso la inclusión procedimiento que se realiza para generar
consistencia, dureza a la muestrea para obtener cortes delgados. El quinto paso es la
congelación que le confiere al tejido endurecimiento uniforme. El sexto paso es el
aclaramiento donde el tejido se o pasa a una solución de una sustancia que es miscible
tanto con el alcohol (xilol) como el medio de inclusión a utilizar (parafina liquida). El
séptimo paso es la Inclusión en parafina a fin de obtener cortes suficientemente finos, los
tejidos tiene que ser incluidos y envueltos por la sustancia de parafina. Y por último es el
corte, el montaje y la observación.

Materiales:
 hígado de pollo
 mandil
 guantes
 barbijo
 bisturí
 porta objetos
  reactivos
- Hematoxilina
- eosina
 Microscopio óptico
Desarrollo:
1° Sacrificamos un pollo (Gallus gallus) para retirarle fracmentos de hígado, obteniendo
así una muestra fresca.
2° Obtenida la muestra procedemos a fijarla en liquido bouvin y formalina tamponada
de 10% y pH 7,4 por 36 horas
3° Luego procedemos a seguir el protocolo de deshidratación, aclaración e inclusiones
de muestra en paraplast ( parfina refinada).
4. Luego realizamos cortes de 5µm o 8 µm de grosor que serán adheridos a un
portaobjetos.

Inicio de la tinción de cortes histológicos desparafinados, hidratados y sometidos a coloración.

desparafinados, hidratados y sometidos a coloracióndesparafinados, hidratados y sometidos a

coloración

5. 7 min en xilol1 para desparafinar.

6. 5 min en etanol 100º

7. 3-5min en etanol 96º

hidratación
8. 5 min en etanol 80º

9. 3-5 min en etanol 50º

10. 5 min en H2O destilada

11. 5-10 min en Hematoxilina

12. 15 min en agua corriente.

Diferenciación: Para eliminar el exceso de hematoxilina.
13. 2x1 min en H2O destilada

1
El xileno, xilol o dimetilbenceno, C6H4(CH3)2 es un derivado dimetilado del benceno.
14. 0.5 a 2 min en Eosina al 0.2 % en H2O

15. 15s en etanol 80º

16. 30s en etanol 96º

Etanol ascendente Deshidratación
17. 3 min de etanol 100°

18. 5 min de etanol 100°

19. 3 min en xileno

Se pasa por xileno para aclarar los cortes
20. 3 min de xileno

21. Montado con medio de montaje,

22. observamos en el microscopio óptico.

BIBLIOGRAFIA
- https://mmegias.webs.uvigo.es/8-tipos-celulares/hepatocito.php
- http://media.axon.es/pdf/96124.pdf
- https://es.slideshare.net/anahi73/tcnica-histolgica-38075259
- http://www.redalyc.org/pdf/3731/373143367007.pdf
- http://media.axon.es/pdf/96124.pdf
- https://www.researchgate.net/publication/262616783_Descripcion_Histologica_
e_Histoquimica_del_Higado_de_Cobayo_Cavia_porcellus?enrichId=rgreq-
4a814fb5ef1f48a11f0874299a036de6-
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