Objetivos

Preparacin de medios de
cultivo
Curso: Mtodos en fitopatologa

Conocer a que denominamos medio de

cultivo en el laboratorio de Fitopatologa.

Reconocer la existencia de diferentes tipos
de medio.
Reconocer la utilidad de los diferentes
medios de cultivo en el trabajo con
patgenos de plantas.

Dr. Pedro Mondino

24 de abril de 2009

Objetivos
El alumno debe:

1) ser capaz de elaborar medios de cultivo

con el fin de ser utilizados posteriormente
para el aislamiento de hongos, bacterias o
microorganismos epifticos.
2) Desenvolverse con soltura en la
utilizacin de protocolos.

Condiciones que debe reunir un Medio de

cultivo

Medios de cultivo
Los medios de cultivo de microorganismos

(hongos, bacterias, levaduras) son esenciales

en el Laboratorio de Fitopatologa por lo que
a diario se preparan y utilizan.
Los medios de cultivo son una mezcla de
nutrientes que, en concentraciones adecuadas
y en condiciones fsicas ptimas, permiten el
crecimiento de los microorganismos.

Disponibilidad de nutrientes en los

Medios de cultivo.

Para

que los microorganismos crezcan

adecuadamente, un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones:
contener los nutrientes y factores de crecimiento

necesarios
disponer de oxgeno
temperatura adecuada
humedad
pH.
exento de microorganismos contaminantes.

Un medio de cultivo para que permita el crecimiento

adecuado de microorganismos debe contener como

mnimo:
Carbono
Nitrgeno
Azufre
Fsforo
Sales inorgnicas que suplan iones (K, Mg, Fe,
Ca, etc.).

Disponibilidad de nutrientes en los Medios de

cultivo

Medios de cultivo segn su composicin

Medios Naturales. Consisten nicamente en un

Estos nutrientes generalmente se aportan con

Extracto de malta, Peptona, Papa, extracto de

levadura, etc.

Medios de cultivo segn su composicin

Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una

composicin qumica definida cuali y cuantitativamente.

Generalmente se usan en trabajos de investigacin.
Ej: Medio Czapek.
Nitrato de Sodio 2 g/l
Fosfato bipotsico 1 g/l
Cloruro de potasio 0,5 g/l
Sulfato de magnesio heptahidratado 0,5 g/l
Sulfato de hierro heptahidratado 0,01 g/l
Sacarosa 30 g/l
Agar-agar 15 g/l

Medios complejos
Agar Papa Dextrosa:
Medio para el cultivo y conteo de levaduras y

hongos en general.
Agar -15g
Dextrosa - 20g
Infusin papa - 4g
Agua destilada 1L

material vegetal. Ejemplos: un trozo de papa. Agar

jugo de manzana, Agar durazno, Agar y jugo de
vegetales.

Medios de cultivo segn su composicin

Medios complejos o de composicin

indefinida: Son medios cuya composicin no

se conoce con exactitud.
contienen nutrientes en abundancia pero sin
saber con exactitud la composicin cualitativa
ni cuantitativa de estos nutrientes.
Ej: Agar Papa; Agar Malta;

Medios de cultivo segn su estado fsico

Los medios de cultivo utilizados pueden ser de

diferentes tipos:
Medios slidos.
Medio semislidos.
Medios lquidos.

Medios de cultivo

Medios slidos de cultivo

Usualmente para preparar un medio slido se parte

de un medio lquido al que se le aade un agente

solidificante como el agar
El agar es un polisacrido extrado de algas.
En los medios slidos la proporcin de Agar es
siempre por encima del 15%

Medios de cultivo
El agar es el elemento solidificante ms

empleado en la preparacin de medios de

cultivo.
Sus caractersticas principales son:

Medios semi-slidos de cultivo

En los medios semi-slidos la proporcin de Agar es

de alrededor del 5%

Se licua completamente a temperaturas de 80 100

C y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
No afecta el crecimiento de hongos ni bacterias.
No es utilizado por los microorganismos que crecen
en l.

Medio Agar Agua

Medios de cultivo
En ocasiones se aaden al medio de cultivo sustancias

Se trata de un medio sin el agregado de nutriente

alguno.
Utilidad

indicadoras de actividades metablicas.

Tambin se pueden aadir sustancias que ejercen accin
inhibitoria selectiva de ciertos microorganismos.

Aislamiento de hongos a partir de tejido vegetal. Se

logra que el crecimiento sea el resultado de la
nutricin que posee el tejido vegetal.
Ensayos de evaluacin de actividad antifngica.

Medios de cultivo

Medios de cultivo segn su utilidad

prctica
Generales: Sirven para el cultivo de una gran variedad

La exactitud en los procedimientos de

fabricacin, preparacin, conservacin y uso,

de los medios de cultivo asegura la
exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de
los resultados obtenidos en los ensayos o
experimentos.

Medios de cultivo segn su utilidad

prctica
Medios diferenciales: Son aquellos destinados a

facilitar la discriminacin de microorganismos

de una mezcla por sus propiedades diferenciales
de crecimiento en dichos medios.

Temperaturas de incubacin
En general los microorganismos patgenos de

plantas crecen a temperaturas en el entorno de

24 a 28 C.
En ocasiones incubamos a temperaturas
diferentes:
A 37 C cuando queremos descartar el crecimiento
de agentes de control biolgico a la temperatura del
cuerpo humano.
A 5C o menos cuando buscamos microorganismos
adaptados a crecer en la cmara frigorfica.
Venturia inaequalis debe incubarse a temperaturas
de entre 16 y 20 C

de microorganismos.
Ej: Agar Papa destrosado (PDA); Agar Nutriente
(NA)
Selectivos: Son medios a los que se les agregan
sustancias para inhibir el crecimiento de otros
microorganismos.
Ej: Agar Malta acidificado y con antibitico para
inhibir el crecimiento de bacterias.
Diferenciales:

Medios de cultivo segn su utilidad

prctica
Medios selectivos: Son aquellos que

favorecen por su diseo el crecimiento

especfico de un microorganismo particular o
grupo de microorganismos. Es de gran
utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una poblacin
microbiana mixta

Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el

medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de
las clulas vegetativas de los cultivos
microbianos.
En las estufas de cultivo se debe
proporcionar una fuente adecuada de
humedad para evitar as que se deseque el
medio.

Presencia de oxgeno
Los microorganismos aerobios necesitan que el

oxgeno llegue en forma adecuada al medio.

En los medios lquidos se recurre a la agitacin, de

lo contrario solamente habr crecimiento en la
parte superior.

Preparacin de medio Agar Malta con

antibitico

Presencia de oxgeno
Los microorganismos aerobios necesitan que el oxgeno

llegue en forma adecuada al medio. Los anaerobios por

el contrario crecen en ausencia de oxgeno. Ej. Erwinia

Preparacin de medio Agar Nutriente

Receta del agar malta

Extracto

de malta 20 g/L.
20 g/L
pH = 5,4
Sulfato de estreptomicina al 0,02%
(0,1 ml de la solucin stock/100 ml de
medio).
Agar

Preparacin de medio Agar Nutriente

3 g de extracto de Carne de buey
5 g de peptona trpsica de gelatina
15 g de agar
de cloruro sdico y glucosa
agua destilada hasta 1000 ml

Receta NAD (Nutriente agar destrosa)

Agar

nutriente 23g
5g
Agua destilada 1000 ml.
Destrosa

Esterilidad de los Medios de cultivo

Los medios de cultivo han de estar perfectamente

estriles para evitar otros microorganismos puedan

interferir con el crecimiento del que queremos
cultivar.
Los medios de cultivo se esterilizan en el autoclave.

Medios de cultivo
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri,

comienza a utilizar placas de vidrio planas

Hoy existen de plstico.
Procedimiento seguido para dispensar el
medio en placas de Petri

Medios de cultivo
Los medios se pueden utilizar en frascos,

placas de Petri o tubos.