Objetivos
Preparación de medios de
cultivo
Curso: “Métodos en fitopatología”
Dr. Pedro Mondino
24 de abril de 2009
Objetivos
„ El alumno debe:
„ 1) ser capaz de elaborar medios de cultivo
con el fin de ser utilizados posteriormente
para el aislamiento de hongos, bacterias o
microorganismos epifíticos.
„ 2) Desenvolverse con soltura en la
utilización de protocolos.
Condiciones que debe reunir un Medio de
cultivo
„ Para que los microorganismos crezcan
adecuadamente, un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones:
„ contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios
„ disponer de oxígeno
„ temperatura adecuada
„ humedad
„ pH.
„ exento de microorganismos contaminantes.
„ Conocer a que denominamos medio de
cultivo en el laboratorio de Fitopatología.
„ Reconocer la existencia de diferentes tipos
de medio.
„ Reconocer la utilidad de los diferentes
medios de cultivo en el trabajo con
patógenos de plantas.
Medios de cultivo
„ Los medios de cultivo de microorganismos
(hongos, bacterias, levaduras) son esenciales
en el Laboratorio de Fitopatología por lo que
a diario se preparan y utilizan.
„ Los medios de cultivo son una mezcla de
nutrientes que, en concentraciones adecuadas
y en condiciones físicas óptimas, permiten el
crecimiento de los microorganismos.
Disponibilidad de nutrientes en los
Medios de cultivo.
„ Un medio de cultivo para que permita el crecimiento
adecuado de microorganismos debe contener como
mínimo:
„ Carbono
„ Nitrógeno
„ Azufre
„ Fósforo
„ Sales inorgánicas que suplan iones (K, Mg, Fe,
Ca, etc.).
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 Disponibilidad de nutrientes en los Medios de Medios de cultivo según su composición
cultivo
„ Medios Naturales. Consisten únicamente en un
„ Estos nutrientes generalmente se aportan con material vegetal. Ejemplos: un trozo de papa. Agar
Extracto de malta, Peptona, Papa, extracto de jugo de manzana, Agar durazno, Agar y jugo de
vegetales.
levadura, etc.

Medios de cultivo según su composición

Medios de cultivo según su composición

„ Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una

composición química definida cuali y cuantitativamente. „ Medios complejos o de composición
Generalmente se usan en trabajos de investigación. indefinida: Son medios cuya composición no
„ Ej: Medio Czapek. se conoce con exactitud.
„ Nitrato de Sodio 2 g/l „ contienen nutrientes en abundancia pero sin
„ Fosfato bipotásico 1 g/l
saber con exactitud la composición cualitativa
„ Cloruro de potasio 0,5 g/l
„ Sulfato de magnesio heptahidratado 0,5 g/l
ni cuantitativa de estos nutrientes.
„ Sulfato de hierro heptahidratado 0,01 g/l „ Ej: Agar Papa; Agar Malta;
„ Sacarosa 30 g/l
„ Agar-agar 15 g/l

Medios complejos Medios de cultivo según su estado físico

„ Agar Papa Dextrosa: „ Los medios de cultivo utilizados pueden ser de

„ Medio para el cultivo y conteo de levaduras y diferentes tipos:
hongos en general.
„ Medios sólidos.
„ Agar -15g
„ Medio semisólidos.
„ Dextrosa - 20g
„ Infusión papa - 4g „ Medios líquidos.

„ Agua destilada 1L

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Medios de cultivo Medios sólidos de cultivo

„ Usualmente para preparar un medio sólido se parte

de un medio líquido al que se le añade un agente
solidificante como el agar
„ El agar es un polisacárido extraído de algas.
„ En los medios sólidos la proporción de Agar es
siempre por encima del 15%

Medios de cultivo Medios semi-sólidos de cultivo

„ El agar es el elemento solidificante más „ En los medios semi-sólidos la proporción de Agar es

empleado en la preparación de medios de de alrededor del 5%
cultivo.
„ Sus características principales son:
„ Se licua completamente a temperaturas de 80 –100
ºC y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
„ No afecta el crecimiento de hongos ni bacterias.
„ No es utilizado por los microorganismos que crecen
en él.

Medios de cultivo
Medio Agar Agua
„ En ocasiones se añaden al medio de cultivo sustancias
„ Se trata de un medio sin el agregado de nutriente indicadoras de actividades metabólicas.
alguno. „ También se pueden añadir sustancias que ejercen acción
„ Utilidad inhibitoria selectiva de ciertos microorganismos.
„ Aislamiento de hongos a partir de tejido vegetal. Se
logra que el crecimiento sea el resultado de la
nutrición que posee el tejido vegetal.
„ Ensayos de evaluación de actividad antifúngica.

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Medios de cultivo
„ Generales: Sirven para el cultivo de una gran variedad
„ La exactitud en los procedimientos de
fabricación, preparación, conservación y uso,
de los medios de cultivo asegura la
„ Selectivos: Son medios a los que se les agregan
exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de
los resultados obtenidos en los ensayos o
experimentos.
„ Diferenciales:
Medios de cultivo según su utilidad
práctica
„ Medios diferenciales: Son aquellos destinados a
facilitar la discriminación de microorganismos
de una mezcla por sus propiedades diferenciales
de crecimiento en dichos medios.
Temperaturas de incubación
„ En general los microorganismos patógenos de
plantas crecen a temperaturas en el entorno de
24 a 28 ºC.
„ En ocasiones incubamos a temperaturas
diferentes:
„ A 37 ºC cuando queremos descartar el crecimiento
de agentes de control biológico a la temperatura del
cuerpo humano.
„ A 5ºC o menos cuando buscamos microorganismos
adaptados a crecer en la cámara frigorífica.
„ Venturia inaequalis debe incubarse a temperaturas
de entre 16 y 20 ºC
Medios de cultivo según su utilidad
práctica
de microorganismos.
„ Ej: Agar Papa destrosado (PDA); Agar Nutriente
(NA)
sustancias para inhibir el crecimiento de otros
microorganismos.
„ Ej: Agar Malta acidificado y con antibiótico para
inhibir el crecimiento de bacterias.
Medios de cultivo según su utilidad
práctica
„ Medios selectivos: Son aquellos que
favorecen por su diseño el crecimiento
específico de un microorganismo particular o
grupo de microorganismos. Es de gran
utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una población
microbiana mixta
Condiciones adecuadas de humedad
„ Un nivel mínimo de humedad, tanto en el
medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de
las células vegetativas de los cultivos
microbianos.
„ En las estufas de cultivo se debe
proporcionar una fuente adecuada de
humedad para evitar así que se deseque el
medio.
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Presencia de oxígeno Presencia de oxígeno

„ Los microorganismos aerobios necesitan que el
oxígeno llegue en forma adecuada al medio.
„ En los medios líquidos se recurre a la agitación, de
lo contrario solamente habrá crecimiento en la
parte superior.
„ Los microorganismos aerobios necesitan que el oxígeno
llegue en forma adecuada al medio. Los anaerobios por
el contrario crecen en ausencia de oxígeno. Ej. Erwinia

Preparación de medio Agar Malta con

Preparación de medio Agar Nutriente
antibiótico
„ Receta del agar malta
„ Extracto de malta 20 g/L. „ Receta NAD (Nutriente agar destrosa)
„ Agar 20 g/L „ Agarnutriente 23g
„ pH = 5,4 „ Destrosa5g
„ Sulfato de estreptomicina al 0,02% „ Agua destilada 1000 ml.
„ (0,1 ml de la solución stock/100 ml de
medio).

Preparación de medio Agar Nutriente Esterilidad de los Medios de cultivo

„ 3 g de extracto de Carne de buey

„ Los medios de cultivo han de estar perfectamente
„ 5 g de peptona trípsica de gelatina
estériles para evitar otros microorganismos puedan
„ 15 g de agar interferir con el crecimiento del que queremos
„ de cloruro sódico y glucosa cultivar.
„ agua destilada hasta 1000 ml „ Los medios de cultivo se esterilizan en el autoclave.

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Medios de cultivo
Medios de cultivo
„ En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, „ Los medios se pueden utilizar en frascos,
comienza a utilizar placas de vidrio planas placas de Petri o tubos.
„ Hoy existen de plástico.
„ Procedimiento seguido para dispensar el
medio en placas de Petri