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Cuestionario gentica 1era unidad

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1 Que aplicaciones tiene la DNasa?
R=En ingeniera gentica estas enzimas son usadas para cortar residuos en los
extremos de las molculas de ADN (exo-desoxirribonucleasa, un tipo de
exonucleasa.otras cortan en cualquier punto de la cadena (endo-
desoxiribonucleasas, un subconjunto de endonucleasas, En medicina se usas
para el tratamiento de los pacientes con fibrosis qustica,
2 Cmo funciona la transcriptasa reversa?
La transcriptasa inversa es una enzima multifuncional que sintetiza una
molcula de ADN a partir de ARN.
En primer lugar sintetiza una cadena de ADN a partir del ARN que le sirve de
patrn. A continuacin destruye la cadena original de ARN y por ltimo construye
una segunda cadena de ADN complementaria de la primera. De esta forma se
obtiene una doble cadena de ADN que puede ser integrada en un Cromosoma. en
los retrovirus les permite transformar su ARN en el ADN, con el objeto de integrar
su material hereditario al de la clula, para lograr de esta manera que cuando sta
se replique, el producto sea nuevos virus, llamados en su etapa temprana
"viriones". La transcriptasa inversa es una de las cuatro enzimas contenidas en el
interior del VIH que participan en la invasin y replicacin, las otras tres son la
ribonucleasa H, la integrasa y la proteasa.
3 Que es la actividad estrellas?
Es la actividad que presentan algunas enzimas de tipo II en condiciones no
ptimas (pH, fuerza inica, presencia de contaminantes), caracterizada por un
descenso en la especificad del sitio de reconocimiento.
4 Cual es el mecanismo de accin de las enzimas de restriccin?
Un enzima de restriccin (o endonucleasas de restriccin) posee un mecanismo
que puede reconocer una secuencia concreta de nucletidos en una molcula de
ADN y cortarla en ese punto preciso, llamado sitio o diana de restriccin. En
ocasiones, el enzima reconoce una secuencia concreta, pero no corta en ese sitio,
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sino en otro ms alejado. Las secuencias de restriccin restringen, por tanto, la
actividad del enzima a esas secuencias, que no corta en otras. Los sitios de
restriccin cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, cuya secuencia es
reconocida por el enzima. Otros enzimas son capaces de ligar molculas de ADN
cortadas por los enzimas de restriccin. Son las llamadas Ligasas.
5 Que consideraciones debes tomar en cuenta en una reaccin de
restriccin?
Las enzimas de restriccin son protenas cuya funcin es cortar las hebras de
ADN. Lo hacen en forma especfica por lo que se debe tener en cuenta que
cuando cortan lo hacen de la siguiente forma.
Enzimas que generan extremos romos (parejos)
Enzimas que generan extremos cohesivos (desparejos). Estos extremos
colgantes de simple cadena pueden pegarse con otros extremos de cadena
simple que tengan la secuencia complementaria. Las enzimas encargadas de
unir los extremos de ambas cadenas se denominan ligasas.
Tambin debe condirarse Pureza del DNA pues la reaccin de enzimas es muy
dependiente de la pureza, contaminantes como protenas, fenol, cloroformo,
etanol, EDTA, SDS, altas concentraciones de sal, etc. inhiben la endonucleasa.
2. Temperatura y pH las enzimas son muy sensitivas a temperatura y pH en
lo que respecta a su estabilidad y actividad.
3. DNAsas Las DNAsas degradan el DNA en presencia de Mg
++
.
4. Contaminantes con carga (-).
5. DNA contaminado con otro DNA.
6. Grados de metilacin algunas endonucleasas son inhibidas por metilacin.
7. Tipo de molcula de DNA si el DNA no tiene la secuencia que es
reconocida por la enzima accesible, esta no puede cortar el material gentico (ej.
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si el DNA est superenrrollado el lugar de restriccin no va a estar accesible para
la enzima).
8. Buffer adecuado este provee el ambiente que necesita la enzima para
trabajar en condiciones ptimas.

6 Como funciona la ADN polimerasa?
La ADN polimerasa es la principal enzima de la replicacin. Funciona de la forma
siguiente; Partiendo de una cadena inicial la ADN polimerasa aade nucletidos
complementarios a la cadena molde extendiendo la nueva cadena de ADN en
direccin 5- 3. La ADN polimerasa tambin se encarga de la reparacin del ADN
asociada a la replicacin.Hay 5 ADN polimerasas diferentes bien caracterizadas,
diferencindose en su localizacin, actividad y sensibilidad a los inhibidores: alfa,
beta, gamma, delta y psilon. Las ADN polimerasas delta y epsilon dirigen la
replicacin de la cadena conductora o leading strand que es la cadena que crece
de 5' a 3' en mismo sentido que crece la nueva copia de ADN. La ADN polimerasa
epsilon parece que tambin est involucrada en un tipo de reparacin del ADN.
Adems, las ADN polimerasas gamma, delta y epsilon tienen actividad
exonucleasa 3'-5' y, por tanto, son capaces de eliminar los nucletidos del extremo
3' que han sido incorporados incorrectamente en un proceso conocido como
correccin de pruebas. La ADN polimerasa alfa participa en el proceso de
replicacin del ADN dirigiendo la replicacin de la cadena retardada o lagging
strand que es la cadena que crece de 3' a 5' que es el sentido contrario al del
crecimiento global de la nueva copia de ADN. La ADN polimerasa beta se encarga
de los procesos de reparacin del ADN. La ADN polimerasa gamma realiza la
replicacin del ADN mitocondrial.
7 Cual es el fundamento de la PCR?
La reaccin en cadena de la polimerasa, o PCR, es una tcnica usada para
amplificar el ADN, permite replicar entre cientos de miles y millones de veces en el
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transcurrir de pocas horas en in vitro pequeas cantidades de ADN a travs del
termociclado, usando cambios de temperatura a intervalos de tiempo fijos. la PCR
puede crear numerosas copias de ADN a partir de bloques de construccin de
ADN llamados trifosfatos dinucleoside o dNTPs. La PCR est basada en tres
paso: desnaturalizacin, hibridacin y elongacin. La desnaturalizacin es el
primer paso en el ciclo y hace que el ADN para fundir mediante la interrupcin de
los enlaces de hidrgeno entre las bases resultantes en ADN de una sola hebra.
El recocido reduce la temperatura suficiente para permitir la unin de cebadores
de oligonucletido a la plantilla de ADN. Durante el alargamiento paso ADN
polimerasa sintetizar nuevo ADN de doble hebra. Estas reacciones se repiten
cclicamente entre veinte y cuarenta. La muestra se calienta, en el primer paso,
hasta lograr la separacin de las dos cadenas que constituyen el ADN, hecho que
se conoce como "desnaturalizacin". En el segundo paso, la temperatura se
reduce para permitir el "apareamiento" de cada una de dos cadenas cortas de
nucletidos (oligonucleridos) con cada una de las hebras separadas del ADN
molde. Se trata de segmentos de ADN de cadena simple, sintetizados en el
laboratorio y diseados de manera tal que permiten definir los lmites del tramo de
ADN que se desea replicar. Obviamente, para que se pueda producir el
apareamiento, cada uno de estos oligonucletidos, a los que se denomina
"iniciadores" o primers, debe ser complementario del tramo al que tienen que
unirse en las cadenas separadas del ADN molde. En tercer lugar, una enzima
ADN polimerasa extiende los primers, en el espacio comprendido entre ambos,
sintetizando las secuencias complementarias de las hebras del ADN molde. Para
ello, la ADN polimerasa usa desoxidonuclesidos trifosfato (dNTPs) agregados a
la mezcla de reaccin. La temperatura a la que se realiza el tercer paso est
condicionada por aqulla a la cual "trabaja" la enzima ADN polimerasa. Al cabo del
primer ciclo de tres reacciones (desnaturalizacin, apareamiento, extensin) el
tramo de ADN elegido se ha duplicado y el doble de su cantidad original se
encuentra disponible para ser nuevamente replicado en un segundo ciclo. El
resultado de la aplicacin de numerosos ciclos "en cadena" da lugar a la
amplificacin geomtrica del segmento de ADN delimitado por los primers.El
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producto que se obtiene al finalizar la reaccin -una gran cantidad de un fragmento
gnico con alto grado de pureza- favorece la tarea de los investigadores
empeados en ampliar nuestros conocimientos sobre la estructura y funcin de los
genes.
8 Cual es el mecanismo de accin de las ligasas?
Las ligasas son enzima que realizan la unin entre dos molculas de gran
tamao, dando lugar a un nuevo enlace qumico; generalmente, sucede junto con
la hidrlisis de un compuesto de alta energa, como el ATP,o NAD desdoblndose
en fragmentos que se liberan de forma sucesiva y utilizando su energa de enlace
para que dicha reaccin tenga lugar, utilizando nicamente .su energa de enlace
para realizar la soldadura de la hebra. Realizan enlaces C-C, C-S, C-O y C-N.
Tambin catalizan la formacin del enlace covalente fosfodister entre el grupo 3
OH de un extremo y el grupo fosfato 5 del otro.
9 Que consideraciones debemos tomar en cuenta en una reaccin en cadena
de la polimerasa?
Lo que debemos tomar en cuenta para una reaccin en cadena de la polimerasa
son los siguientes puntos:
Seccin de las concentraciones ptimas de reactivos, parmetros del protocolo y
equipamiento.
El segmento de ADN, (ADN molde).
Seleccin y concentracin de la enzima.
Diseo y concentracin de los cebadores.
Composicin del buffer de reaccin y aditivos.
Parmetros del programa de amplificacin.
Especificidad y sensibilidad analticas.
10 Describe el mecanismo de accin de 2 enzimas modificadores externos?
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1.Fosfatasa Alkalina (AP): Remueve el grupo fosfato presente en el extremo 5 de
la molcula de DNA.
.2. Kinasa Polinucleotdica: Agrega grupos Fosfatos en el extremo 5, transfiere -
PO4 desde ATP a 5-OH de ss o ds DNA o RNA
3. DNA Metilasa (dam & dcm) : Transfieren grupos metil en residuos internos de
A o C en secuencias especficas para producir DNA duplex metilado.
4. Transferasa Terminal deoxinucleotdica: Agrega 1 o ms deoxinucleotidos
sobre el extremo 3 de una molcula DNA.
5. DNA Metilasa: Transfiere grupos metil en residuos internos de A o C en
secuencias especficas para producir DNA duplex metilado.

Referencias
Rodriguez, R. S., Sosa, H., Selman, M., Nieto, G. G., Martinez, H., Fernndez
Mas, J. R., ... & Musacchio Lasa, A. (1997). European Patent No. EP 0474313.
Munich, Germany: European Patent Office.
Izquierdo Rojo, M. (1999). Ingeniera gentica y transferencia gnica. Madrid:
Pirmide, 335.