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control 5 : Seminario PCR Y Seminario

Biocel Lab
Expresión Génica

El proceso de replicación

La replicación es el proceso a través del cual una célula duplica su material

genético, para distribuirlo a las dos células hijas, tras una división celular.
El producto de este proceso son dos moléculas idénticas de ADN, que pueden
ser traspasadas sin variación a la descendencia.
La duplicación ocurre a través de la polimerización de nuevas hebras,
utilizando como molde cada una de las cadenas de la doble hélice de ADN.
Durante este proceso, las dos cadenas son separadas por la enzima helicasa.
Junto a esto, la enzima primasa ubica cebadores, pequeñas secuencias de ARN
complementarias al ADN. La presencia del cebador permite que la ADN
polimerasa, enzima encargada de generar las cadenas nuevas de ADN, una los
nuevos nucleótidos complementarios a la hebra molde . Esto ocurre en las
dos cadenas de ADN molde simultáneamente, aunque el procedimiento varía
entre ambas.

PCR
El método de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) fue creado en
1986 por Kary Mullis, y entrega una alternativa rápida y de bajo costo para
clonar secuencias de ADN. Gracias a esta técnica, se pueden obtener muchas
copias de una secuencia específica. Actualmente, el método de PCR tiene
muchísimas aplicaciones en la biología.
En primer, se construye un cebador (o primer), que detectará una secuencia
específica que se desea buscar (ADN molde). El cebador se une por
complementariedad de bases a la secuencia deseada. En segundo lugar, la
ADN polimerasa reconoce el cebador como un lugar de inicio de la
replicación, y copia la secuencia de ADN. Para que la secuencia se replique
y amplifique muchas veces, se provocan numerosos ciclos de replicación,
guiados por cambios de temperatura.

M
La pcr se basa en el uso de la DNA polimerasa para copiar un molde de DNA en ciclos repetidos
de replicacion. La pcr es ahora muy utilizada para proporcionar grandes cantidades de cualquier
gen a partir de una pequeña muestra de ADN humano.

La polimerasa es guiada hasta la secuencia a ser copiada por cortos oligonucleotidos cebadores
que se agregan a la reacción y se híbridas al molde de ADN al comienzo y al final de la
secuencia de DNA deseada.
Los cebadores proporcionan los extremos 3’ para que la ADN polimerasa comience la replicacion
sobre cada cadena de ADN.

Los cebadores son creados por el investigador y sintetizados a pedido, de modo que la PCR
Pueda utilizarse solo para clonar ADN del que conocen sus secuencias de comienzo y
terminación

→
ciclo
de Amplificación

paso 1: El ADN de doble cadena y sometido a un tratamiento breve con calor para separar las dos
cadenas o hebras
paso 2: tras la separación de la cadena el enfriamiento del ADN ante la presencia de un gran
exceso de los cebador es de ADN permite que esto se híbrida con las secuencias complementarias
en las dos cadenas de ADN
paso 3: luego está mezclas en Cuba con ADN polimerasa y los cuatro desoxirribonucleosidos
trifosfatos de modo que se sintetiza el ADN que comienzas desde los dos cebadores
 La PCR se utiliza en muchos laboratorios de investigación,
y también tiene aplicaciones prácticas en medicina
forense, pruebas genéticas y diagnósticas. Por ejemplo, la
PCR se utiliza para amplificar genes asociados con
trastornos genéticos a partir del ADN de los pacientes (o
de ADN fetal, en el caso de pruebas prenatales). La PCR
también puede utilizarse para detectar el ADN de una
bacteria o un virus en el cuerpo de un paciente: si el
patógeno está presente, es posible amplificar regiones de su
ADN de una muestra de sangre o tejido.

• ¿Qué consecuencia podría traer que no se alcance una temperatura suficientemente alta al comienzo
de un ciclo de PCR?

No se podría separar las dos hebras de ADN por lo que el proceso no se llevaría a cabo

Una forma de detectar en una persona la presencia del virus SARS-coV-2, causante de la enfermedad
COVID-19, es a través de la técnica de PCR. ¿Cómo se explica un resultado positivo a través del uso de
esta técnica?

Ya que la prueba de PCR es altamente sensible, tomaremos una muestra y aunque sea
mínima la cantidad de ARN o ADN podremos amplificar esta hacer visible este virus y
hacerle detectable.
 La expresión génica
La expresión génica corresponde a la generación de un polipéptido
funcional, a partir de la información contenida en un gen. En
eucariontes , la célula traspasa la información contenida en el ADN a una
molécula de ARN, a través de los procesos de transcripción, maduración y
transporte de éste al citoplasma. En el citoplasma, este ARN participa en la
traducción o síntesis de proteínas. Las proteínas funcionales permiten a la
célula realizar sus actividades vitales, y mantener las estructuras para su
funcionamiento.

La regulación génica es el proceso que controla qué genes en el ADN de una célula se expresan (se utilizan para
hacer un producto funcional como una proteína).

En los eucariontes como los humanos, la expresión de los genes involucra muchos pasos y su regulación
puede ocurrir en cualquiera de ellos. Sin embargo, muchos genes se regulan principalmente en el nivel de la
transcripción.

La regulación génica es la forma como una célula controla qué genes, de los
muchos genes en su genoma, se "encienden" (expresan). Gracias a la regulación de
los genes, cada tipo de célula en tu cuerpo tiene un conjunto diferente de genes
activos, a pesar de que casi todas las células del cuerpo contienen exactamente el
mismo ADN.

Por ejemplo, una de las funciones del

hígado es eliminar las sustancias tóxicas
como el alcohol de la sangre. Para ello, las
células del hígado expresan genes que
codifican las subunidades (piezas) de una
enzima llamada alcohol deshidrogenasa.
Esta enzima descompone al alcohol en una
molécula no tóxica. Las neuronas en el
cerebro de una persona no eliminan las
toxinas del cuerpo, así que mantienen estos
genes sin expresar, o "apagados". Del mismo
modo, las células del hígado no envían
señales utilizando neurotransmisores, así
que mantienen los genes
neurotransmisores apagados
veremos cómo puede controlarse la expresión de genes en eucariontes (¡como
nosotros!) en varias etapas, desde la disponibilidad del ADN, hasta la producción de
ARNm, y la traducción y procesamiento de proteínas.

PASOS EN QUE PUEDE OCURRIR REGULACION GÉNICA.

1.Accesibilidad de la cromatina. La estructura de la cromatina (ADN y sus proteínas
de organización) puede regularse. La cromatina más abierta o “relajada” hace a un
gen más disponible para la transcripción.

2.Transcripción. La transcripción es un punto regulador clave para muchos genes.

Grupos de proteínas del factor de transcripción se fijan a secuencias específicas
del ADN en o cerca de un gen y promueven o reprimen su transcripción en un ARN.

3.Procesamiento del ARN. El proceso de corte y empalme, la adición del casquete y

la adición de una cola poli-A a una molécula de ARN pueden regularse, así como
la salida del núcleo. Se pueden producir diferentes ARNm del mismo pre-ARNm por
el proceso de empalme alternativo.

4.Estabilidad del ARN. El curso de vida de una molécula de ARNm en el citosol

afecta cuántas proteínas pueden hacerse de ella. Pequeños ARN reguladores
llamados miARN pueden unirse a ARNm objetivos y hacer que se corten en
pedacitos.

5.Traducción. La traducción de un ARNm puede aumentarse o inhibirse por los

reguladores. Por ejemplo, los miARN a veces bloquean la traducción de sus ARNm
objetivos (en lugar de hacer que se corten en pedacitos).

6.La actividad de la proteína. Las proteínas pueden someterse a una variedad de

modificaciones, tales como ser cortadas o etiquetadas con grupos químicos. Estas
modificaciones pueden ser reguladas y pueden afectar la actividad o el
comportamiento de la proteína.

La caja TATA
Tipos diferentes de células tienen patrones únicos de elementos
regulatorios que resultan en la transcripción de solo los genes necesarios. Es
por eso que una célula de piel y una célula nerviosa, por ejemplo, son tan
diferentes. Sin embargo, algunos patrones de elementos reguladores son
comunes en todos los genes, sin importar las células en las cuales ocurren.
Un ejemplo es la caja TATA, nombrada así porque tiene una secuencia
central de TATAAA. Este es un elemento regulador que es parte del
promotor de la mayoría de los genes de células eucariotas. Una cantidad de
proteínas reguladoras se unen a la caja TATA, formando un complejo
multiproteínico. Es solamente cuando todas las proteínas apropiadas están
unidas a la caja TATA que la ARN polimerasa reconoce el complejo y se une
al promotor. Una vez que la ARN polimerasa se une, comienza la
transcripción.
La caja TATA participa en la unión e iniciación de la transcripción.
como sabemos :
ya

Por ejemplo, en el experimento de Mendel, el gen del color de las

flores tiene las instrucciones para hacer una proteína que ayuda a
producir moléculas coloridas (pigmentos) en los pétalos de las
flores.

Muchos genes proporcionan instrucciones para producir polipéptidos. ¿Cómo

dirige exactamente el ADN la construcción de un polipéptido? Este proceso consta
de dos pasos: transcripción y traducción.

En la transcripción, la secuencia de ADN de un gen se copia para obtener una

molécula de ARN. Este proceso es llamado transcripción porque implica volver a
escribir, o trancribir, la secuencia de ADN en un "alfabeto" de ARN similar. En
eucariontes, la molécula de ARN debe someterse a un procesamiento para convertirse
en un ARN mensajero (ARNm) maduro.
En la traducción, la secuencia de ARNm se decodifica para especificar la secuencia de
aminoácidos de un polipéptido. El nombre traducción refleja que la secuencia de
nucleótidos del ARNm se debe traducir al "idioma", completamente diferente, de los
aminoácidos.

La transcripción eucarionte ocurre en el núcleo, donde se

almacena el ADN. Debido a esto, el ARNm eucarionte debe
ser exportado del núcleo antes de que pueda traducirse en
un polipéptido.
Traducción
Después de la transcripción (y de algunos pasos de procesamiento en eucariontes), la
molécula de ARNm está lista para dirigir la síntesis de proteínas. El proceso de usar
información de un ARNm para producir un polipéptido se llama traducción.

Durante la traducción, la secuencia de nucleótidos de un ARNm se traduce

en la secuencia de aminoácidos de un polipéptido.

Durante la traducción, los

nucleótidos del ARNm se
leen en grupos de tres
llamados codones. Cada
codón especifica un
aminoácido en particular o
una señal de alto. Este
conjunto de relaciones se
conoce como código
genético.

La traducción ocurre dentro de estructuras conocidas como ribosomas. Los ribosomas son
máquinas moleculares cuya función es construir polipéptidos. Una vez que un ribosoma se monta
sobre un ARNm y encuentra el codón de "inicio", se desplazará rápidamente por el ARNm un
codón a la vez. Al avanzar, construirá poco a poco una cadena de aminoácidos que refleja
exactamente la secuencia de codones en el ARNm.

¿Qué sucede después?

Una vez terminado el polipéptido, este puede ser procesado, modificado, combinado con otros
polipéptidos o enviado a algún destino en específico dentro o fuera de la célula. En última instancia, este
polipéptido realizará un trabajo específico para la célula o el organismo, tal vez como molécula de
señalización, algún elemento estructural o una enzima.