Continuacin Regulacin de la transcripcin

Silenciamiento gnico
Desarrollo de la clase
-Protenas reguladoras (dominio de unin- dominio de activacin)
-Los receptores de hormonas como ejemplo de protena reguladora.
-Diferentes formas de activacin de los factores de transcripcin.
-Otros ejemplos.
-Resumen de las caractersticas generales de la regulacin de la
transcripcin

Silenciamiento gnico
Metilacin del ADN
Modificaciones de histona
Complejos proteicos- Polycomb
ARN no codificantes.
INICIACIN DE LA TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTA- Activadores
Las protenas reguladores poseen una estructura separable:

Dominio de unin al ADN, se une a regiones del ADN especificas.
Dominio de activacin (o de represin) de la transcripcin,
interacciona con otras protenas o con la ARNpol.
Dominio flexible.

Se pueden construir factores funcionales a partir de combinaciones
de dominios de distintas fuentes

Los FT que estimulan o reprimen la transcripcin se unen
a elementos proximales del promotor o a secuencias amplificadoras.

Protenas reguladoras
Clasificacin de los dominios de unin
al DNA
Protenas con:
Homeodominio (hlice vuelta hlice)
Protenas con dedos de zinc
Con cremallera o zipper de leucina
Con hlice-bucle-hlice
Otros

PROTOONCOGEN
C-MYC
DOS HELICES UNIDAS
POR UN BUCLE
DMERO HELICE
BUCLE
HELICE
PROTOONCOGEN
C-FOS Y C-JUN
DMEROS FORMADOS A
TRAVS DE LA
INTERACCIN DE
REGIONES RICAS EN
LEUCINA
HOMODMERO
HETERODMERO
CIERRE DE LEUCINA
RECEPTOR
ESTEROIDEO
UNE Zn EN UNA REGIN
PROTENA RICA EN
HISTIDINAS O CISTEINAS
MONMERO DEDO DE Zn
PROTENAS
HOMOTICAS DE
DROSOPHILA
TRES HELICES:
H3 SE UNE AL ADN
H1 Y 2 SE UNEN A
OTRAS PROTENAS
MONMERO HELICE
VUELTA
HELICE
EJEMPLO CARACTERSTICAS MNOMERO O
DMERO
CLASE
Dominios de activacin
Secuencia polipeptdica que activa la transcripcin
cuando est fusionada a un dominio de fijacin del
DNA
Muchos dominios pueden activar la transcripcin.
Casi el 1% de las protenas de fusin resultantes (Gal4
y segmento al azar) activaron la transcripcin de un
gen con UASgal en 5.
Cmo comprobamos que una protena se une al ADN?
Cual es
el dominio
activador?
Un ejemplo. Cmo activan los genes los estrgenos
Hormona esteroidea
HRE (Hormone Receptor Elements)
Elementos de respuesta a Hormonas.
Sitios de Unin al ADN
Receptor de Hormonas Esteroideas
Interaccin del Receptor de Hormona con el ADN
Receptor es activado por la unin de la hormona que es
seguido por la unin a un activador
El dominio activador del receptor interacciona
con el complejo mediador y este con la ARNpol
en el promotor para activar la transcripcin
*La expresin de un gen depende de la concentracin y
actividad de los FTs en la clula.

*La expresin de los FT est finamente regulada y depende
de mltiples interacciones reguladoras.

*Los organismos multicelulares reciben seales externas mediante:

Molculas con receptores en la superficie celular
que desencadenan mecanismos de transduccin de seales.

Hormonas liposolubles que difunden por la membrana
e interactan con FT(receptores nucleares)
Regulacin de la actividad de los factores de transcripcin
Los factores que promueven las transcripcin se
pueden activar de distintas maneras
ALGUNOS OTROS EJEMPLOS DE REGULACIN:
ALGUNOS OTROS EJEMPLOS DE REGULACIN:
ALGUNOS OTROS EJEMPLOS DE REGULACIN:
HIF FACTOR DE TRANSCRIPCIN
REGULACIN EN EUCARIOTAS, FACTORES DE TRANSCRIPCIN:
REGULACIN DE LOS GENES DE MUCINAS
REGULACIN DE LOS GENES DE MUCINAS
Secuencias reguladoras ( a las que se unen factores de transcripcin):

Proximales (elementos proximales y promotor basal)
Distales ( potenciadores)


Factores de transcripcin

Generales (se unen a los elementos basales)
Activadores (inducibles) (se unen a proximales o distales)
Coactivadores (interaccin entre factores generales, activadores)



Activacin de la transcripcin

Para recordar
Factores de transcripcin : dominio de unin al ADN y dominio transactivador.
Monomeros o dmeros (homo o hetero)
Los heterodmeros permiten una combinacin para dar protenas diferentes que pueden reconocer
distintas secuencias.

Estimulo
entra
Dispara una cascada
Unin a un receptor
Activacin de Kinasa -Fosforilacin
Liberacin de un inhibidor
Otro modificacin
Desfosforilacin
Liberacin de la membrana
Intercambio de subunidades

Citoplasma
Ncleo
ADN
Unin al elemento de respuesta
Activacin de la transcripcin
Factor activo
Activacin de factores inducibles
Las regiones de control en muchos genes eucariotas poseen
sitios de unin para mltiples FT.

La transcripcin vara segn el repertorio particular de FT
que se expresan y activan en una clula dada en un momento
Particular.

Los dominios de activacin y represin en los FT presentan
una variedad de secuencias de aac y estructuras tridimensionales.
Interactan con coactivadores o corepresores.

Muchos FT se unen en forma cooperativa para activar la
transcripcin
Regulacin de la transcripcin en eucariotas
Las protenas reguladoras pueden actuar:

Interaccionan con protenas que remodelan la cromatina afectando
la capacidad de los FT y la ARNpol II de unirse a los
promotores e iniciar la transcripcion.

Interactan con un complejo multiproteico llamado mediador del
Complejo de transcripcin que se une a las ARN pol II y
regula el ensamblaje del complejo de preiniciacin.


Regulacin de la
expresin en eucariota

Silenciamiento 2014


REGULACIN: REPRESIN
METILACIN DEL ADN
MODIFICACIONES COVALENTES DE HISTONAS
COMPLEJOS PROTEICOS
REGULACIN MEDIADA POR ARN
METILACIN DEL ADN
La metilacin impide la unin de los factores de transcripcin
Favorece la unin de protenas que inhiben la transcripcin
Afecta a la accesibilidad que a su vez depende de:
Posicin del nucleosoma
Desensablado parcial de histonas
Metilan las islas CpG
1% del ADN
60 a 90% de las islas estn metiladas
70% de las islas estn en secuencias gnicas
Principalmente en el extremo 5

INHIBICIN DE LA TRANSCRIPCIN POR METILACIN
DEL ADN
ADN metilado recluta HDAc a travs de protenas con dominios de
unin a CpG metiladas.
MeCP2 disminuye la transcripcin reclutando Deacetilasas de Histonas
(HDAC)
Enzima: ADN (citosina 5) Metil transferasa.
EC 2.1.37 DNMT
DNMT 1 enzima de mantenimiento de metilacin
DNMT3A y 3B metilacin de novo
MODIFICACIONES DE HISTONAS
Las cadenas laterales de las histonas sufren modificaciones.
Modificaciones postraduccionales:
Acetilacin
Fosforilacin
Metilacin (ms estable)
Otras, ubiquitinacin...
Hiptesis del cdigo de histonas: combinacin de las modificaciones de
histonas Epigenoma.
Quines modifican?
SUR39H1: codifica una HMT (metilasa de histonas) que metila H3 en
posicin Lys9 a travs de un dominio comn SET
EZH2 Metila H3 en Lys 27 (silencia)
MLL metila H3 en Lys 4 (activa al inhibir la HDAC)
COMPLEJOS PROTEICOS

POLYCOMB TRITHORAX
A.Ac frente a polycomb en Drosophila
B.Grupo de ADN a travs de elemento PREs (Polycomb Response Elements)
POLYCOMB (PCG) Y TRITHORAX (TRXG)
GRUPO DE PROTEINAS: REGULADORES EPIGENETICOS

Originalmente descubiertas en Drosophila como reguladores de los genes
hometicos, tambin regulan otros blancos involucrados en la diferenciacion y
proliferacin.

PcG silencian genes, trxG activa genes.

Conservadas a travs de la evolucin.

En humanos ellas mantienen a las celulas indiferenciadas, pero tambien se
requieren para la proliferacion y el mantenimiento de varios tipos de stem cells.
Tambien regulan la X-inactivation en hembras asi como imprinting genomico.

Mutaciones en PcG y trxG inducen diferente cnceres.

PROTENAS PCG SE UNEN A ELEMENTOS DEL ADN
ESPECFICOS LLAMADOS PREs

Unin de protenas PcG en vivo (en cromosomas politcnicos y por
experimentos de entrecruzamiento crosslinking )
Unin lidera el mantenimiento de la represin de PcG en genes
reporteros.
Represin es potenciada por la presencia de muchas copias de PRE.
PCG Y TRXG ESTN ASOCIADAS A MLTIPLES LUGARES
EN EL GENOMA

Tincin de los cromosomas politcnicos muestran alrededor de 100 bandas para cada PcG.
DAPI
PH
Merge
OFF
ON
trxG
PRE
Target gene
PcG
Ac
Me K27 H3
Me K4 H3
Ub H2A
ACCIN DE LOS COMPLEJOS PcG Y trxG
SOBRE EL CROMOSOMA

Acetilacin y metilacin de
histonas (complejas TAC1 y
ASH1)
Remodelaje del
nucleosoma (complejo
BRM)
Mantenimiento del
estado activo
(cromatina abierta)
Desacetilacin y metilacin
de histonas [complejo ESC-E
(Z)]
Compactacin de la
cromatina. Ubiquitinacin
H2A (complejo PCR1)
Mantenimiento del
estado reprimido
(cromatina compacta)
Diversidad de complejos
de proteinas PcG
Composicin de PCR2 en Humanos y mosca
POLYCOMB

POLYCOMB

Datos extrados de: Francis et al. (2004), Science 306, 1574
El complejo puede condensar un arreglo de 12 nucleosomas in vitro.
La condensacin requiere protenas PSC (no PH) e involucra histonas pero no necesita la cola de las
histonas.
QU EFECTOS PRODUCE POLYCOMB SOBRE LA CROMATINA?
CONDENSACIN DE LA CROMATINA
INHIBICIN DE LA TRANSCRIPCIN POR COMPLEJO PC
TRITHORAX
Represin por
PcG una manera
esquematica


Reclutamiento de los complejos Pc sobre genes blancos de Drosophila
Potencial rol de la metilacin de la lisina 27 de la histona H3
Funciones moleculares de los complejos PRC1 y 2
Mecanismos
de represin
por PRC1
ARN NO CODIFICANTES
Y
COMPLEJOS PROTEICOS
Representacin esquemtica del silenciamiento por los complejos
PcR y otros
Los complejos proteicos de silenciamiento se unen a ARN no codificantes
Modelos de reclutamiento de PcG y TrG por ARN nc
www.annualreviews.org Polycomb Group Proteins

Bibliografia
Biologa Molecular del gen. Watson. 5ta edicin
Otras referencias estn en los pie de figuras, en las diapositivas

Si les interesa profundizar algunos de los artculos citados en la
presentacin sern subidos a EVA.







Sobre esta dos ltimas clase le recomendamos prestar especial
atencin a las diapositivas 33, 34, 35, 36, donde se resume lo
principal de la regulacin del inicio.


En cuanto a silenciamiento debera recordar quienes participan
para que este ocurra , las caractersticas generales de estos
actores y como se pueden relacionar entre ellos

Las imgenes incluidas en esta
presentacin
son del dominio pblico
y no se pretendi
violentar ningn derecho copyright
Dra. Estela Castillo
Seccin Bioqumica Biologa Molecular
Facultad de Ciencias - UDELAR