UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE AGRONOMÍA

TEMA:
PRÁCTICA N.º 1: DETERMINACIÓN DE LA NATURALEZA PROTÉICA DE LAS
ENZIMAS

DOCENTE:
VILCA GAVIDIA, MARLENY ELIZABETH

CURSO:
BIOQUÍMICA

ALUMNO:
MONTOYA DÁVILA ÁNGEL DENILSON

Cajamarca 5 de diciembre del 2022

 PRÁCTICA N.º 01
DETERMINACIÓN DE LA NATURALEZA PROTÉICA DE LAS ENZIMAS

Introducción:

La vida depende de una serie ordenada de reacciones químicas que son catalizadas por enzimas
formadas para este fin. Las enzimas son proteínas que contienen los mismos aminoácidos que
conforman la estructura primaria de las mismas, así mismo como sustancias proteicas que
tienen estructura tridimensional, son relativamente frágiles, con tendencia a sufrir
desnaturalización e inactivación, es decir alteraciones en su conformación, por efectos de
diversos agentes físicos y químicos como son: temperatura, ácidos y álcalis fuertes, sales
pesadas, pH, etc.

La finalidad, es de poner en evidencia las características proteicas de las enzimas que gozan de
propiedades comunes y que expuestas a la acción de diversos agentes físicos y químicos hacen
verificar su comportamiento y actividad catalítica.

Las Enzimas son llamados biocatalizadores

porque aumentan la velocidad de una reacción
enzimática; son PROTEÍNAS porque están
formados por residuos de aminoácidos, unidas
por enlaces peptídico formando así una
estructura primaria; también presentan una
estructura secundaria y terciaria, y
probablemente presentan una estructura
cuaternaria. Las enzimas son altamente
específicas porque solo degradan a un
determinado sustrato y son también
regulables.

Objetivos:

Utilizando una solución de tripsina como enzima y siguiendo las especificaciones del instructivo,
el practicante será capaz de determinar la naturaleza proteica de la enzima (tripsina) al ser
expuesta está a diversos agentes físicos y químicos comparando las variaciones de su
comportamiento con las propiedades generales de las proteínas.

Clasificación de proteínas:

Se clasifican tomando como criterio su composición, forma, estructura y solubilidad.

HOLOPROTEÍNAS

Son proteínas simples, compuestas únicamente por aminoácidos. Pueden ser:

1. Proteínas globulares: Son más o menos redondeadas, solubles en agua (coloides),

tienen estructura terciaria o cuaternaria y función dinámica. Las más importantes son:
 • Albúminas: Tienen función de reserva y transportadoras, como la ovoalbúmina
de la clara de huevo y la lactoalbúmina de la leche y la seroalbúmina de la sangre.
• Globulinas: α, β, γ globulinas.
• Protaminas e histonas: Asociadas a los ácidos nucleicos. Las primeras sólo en
espermatozoides.

2. Proteínas fibrilares, filamentosas o escleroproteínas: Son alargadas ya que carecen de

estructura terciaria y únicamente la poseen secundaria o cuaternaria. Son insolubles en
agua y generalmente estructurales. Destacan:

• Colágeno: Abunda en el tejido conjuntivo, cartilaginoso y óseo. Tiene función de

protección y soporte. Al cocerlo da gelatina.
• Queratina: Forma estructuras como pelo, lana, uñas, plumas,

HETEROPROTEÍNAS (proteínas conjugadas)

Formadas por dos moléculas:

1. Grupo proteico: una proteína

2. Grupo prostético: una molécula no proteica. Puede unirse mediante enlace débil o
covalente.

Si una heteroproteína pierde su grupo prostético recibe el nombre de apoproteína, Según la

naturaleza del grupo prostético se clasifican en:

Glucoproteínas, como las mucinas, los anticuerpos y las hormonas FSH y LH.

Lipoproteínas, como el LDL y HDL.

Fosfoproteínas, con ácido fosfórico, como la caseína de la leche.

Nucleoproteínas, como los cromosomas y la cromatina

Cromoproteínas, en las cuales el grupo prostético es una sustancia coloreada denominada

pigmento que puede ser de dos tipos:

Porfirínico: Derivados de la metalporfirina, que es una porfirina (anillo

tetrapirrólico) que lleva en su interior un catión metálico. Si lleva Fe2+, el metal se
llama grupo hemo. El más importante es la hemoglobina, que transporta el oxígeno
por la sangre. La mioglobina por el músculo y los citocromos que transportan
electrones.

No porfirínico: Por ejemplo la hemocianina, pigmento azul por presencia de cobre

que transporta oxígeno por la sangre de algunos crustáceos y moluscos.
Materiales y Métodos

Materiales:

- Gradilla
- tubos de ensayo
- Pipetas
- Incubadora para “Baño María” a 37°C

Cocina eléctrica Reactivos a utilizar:

- Solución de tripsina 0.25%

- Solución de NaOH 2.5%
- Solución de H2SO4 50%
- Solución de Acetato de plomo10%
- Alcohol Etílico
- Reactivo de Biuret
- Agua destilada

Procedimiento experimental:
Lea cuidadosamente.
Armar el siguiente sistema:

SISTEMA
COMPONENTE
I II III IV V VI VII
Solución de tripsina 0.25% 2.0ml 2.0ml 2.0ml 2.0ml 2.0ml 2.0ml 2.0ml
Agua destilada 2.0ml 2.0ml
Solución de NaOH 2.5% 2.0ml
Solución de H2SO4 50% 2.0ml
Soluc. Acetato de plomo10% 2.0ml
Alcohol Etílico 2.0ml
Reactivo de Biuret 2.0ml

- Mezclar por inversión los sistemas: I, II, IV y VII

- Dejar caer en zona los reactivos correspondiente para los sistemas: III y V (inclinar el
tubo de ensayo formando un ángulo de 45º, dejar caer el reactivo muy lentamente por
las paredes del tubo)
- El sistema VII, llevar a B.M. HIRVIENTE por espacio de 5 minutos.
- Observar el aspecto y color producidos en cada uno de de los sistemas e interpretar los
resultados obtenidos.
Cuestionario:

1. ¿Cuáles son las características de una proteína?

Las proteínas son biomoléculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y
nitrógeno. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas moléculas que reciben el nombre
de aminoácidos y serían, por tanto, los monómeros unidad. Los aminoácidos están unidos
mediante enlaces peptídicos. La unión de un bajo número de aminoácidos da lugar a un péptido;
si el número de aminoácidos que forma la molécula no es mayor de 10, se denomina
oligopéptido, si es superior a 10 se llama polipéptido y si el número es superior a 50 aminoácidos
se habla ya de proteína. Por tanto, las proteínas son cadenas de aminoácidos que se pliegan
adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo miles de funciones. Las
proteínas están codificadas en el material genético de cada organismo, donde se especifica su
secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los ribosomas.

2. ¿Fundamente en que se diferencia una enzima y una proteína?

Proteína: es una macromolécula biológica formada por una o varias cadenas de

aminoácidos.

Enzima: es una macromolécula biológica que cataliza reacciones biológicas.

3. ¿Cuáles son las estructuras y enlaces de las enzimas, fundamente?

Las enzimas son catalizadores. Generalmente son proteínas, aunque algunas moléculas de ARN
también actúan como enzimas.

Las enzimas disminuyen la energía de activación de una reacción, es decir, la cantidad de energía
necesaria para que ocurra una reacción. Logran esto al unirse a un sustrato y sostenerlo tal
manera que permite que la reacción ocurra más eficientemente.
Evaluación de Resultados:

SISTEMA I:

Observamos que las proteínas son solubles en agua al adoptar una conformación globular. La
solubilidad es debida a los radicales libres de los aminoácidos que cuando se ionizan establecen
enlaces débiles, con las moléculas de agua. En este caso cuando una proteína se solubiliza queda
recubierta de una capa de moléculas de agua, aparentemente no observamos nada en reacción
de tripsina, pero a nivel molecular si existe dicha reacción.

Sistema II

Observamos un aspecto incoloro, debido a que la tripsina es una enzima que se libera al nivel
del duodeno posee un pH de 7.5 a 8 aproximadamente y al agregarle el hidróxido de sodio que
también contiene un pH alcalino, la enzima no es afectada en su estructura porque no afecta
considerable mente en alguna degradación de la proteína enzimática.
Sistema III

El resultado de este sistema se presenta un anillo de color blanquecino, porque el ácido sulfúrico
tiene un pH ácido por lo tanto al exponer a la enzima que presenta cargas negativas, de los
grupos oxidrilos y al poner una solución acida estamos agregándole cargas positivas, y esto
cambia la carga de la proteína, eso da como consecuencia este tipo de reacción y la proteína
pierde su solubilidad, y afecta sus puentes que los mantiene es por ello que termina
precipitándose.

Sistema IV
Se nota una pequeña turbidez un poco precipitado, por lo que la solución de plomo los
desnaturaliza las proteínas debido a que pierden todas sus estructuras. El plomo actúa en los
puentes de disulfuro rompiendo así enlaces que le dan estabilidad estructural y funcionabilidad
a la proteína.
Sistema V
Al agregar el alcohol las proteínas ban a empezar a perder su estructura tridimensional y forman
redes por ello se forma un pequeño anillo y un precipitado, en este caso el alcohol etílico al ser
una molécula pequeña rompe los enlaces que mantienen a la estructura de la proteína. Se
produce una desnaturalización de la proteína por ende se genera un anillo y su precipitado.

Sistema VI
En este sistema agregamos el reactivo de Biuret está compuesto por hidróxido potásico y sulfato
cúprico. Este reactivo se usa para indicar la presencia de proteínas y otros compuestos con dos
o más enlaces peptídicos, el reactivo cambio a un color azul violeta por lo que decimos que se
encuentra la presencia de la proteína enzimática de la tripsina.
Sistema VII
Las proteínas enzimáticas tripsina, al llevarlo a hervir debido al baño maría, la estamos
desnaturalizando, debido a que el calor acelera y aumenta el movimiento de la molécula lo que
causa una destrucción de su estructura. Esto sucede a cuando elevamos la temperatura por
encima de su temperatura mayor 37 grados lo que genera que se desnaturalice la enzima.

Discusión:

Podemos interpretar de la siguiente manera que en cada uno de los sistemas tratados en la
práctica, la tripsina es una proteína enzimática que reacciona de acuerdo a los sistemas tratados,
y de acuerdo a lo que le agregamos ya sea ácidos o alcalinos, por ello determinamos que desde
que le agregamos agua hay un cambio aun que a simple vista no lo observamos pero
estructuralmente se pueden romper algunos enlaces ya sean peptídicos, puente de hidrogeno,
disulfuros y puente salinos de acuerdo a lo que agregamos a la enzima ello genera las reacciones
principales desnaturalizándolo o afectando su estructura y su sitio activo, Para que las
reacciones químicas puedan fracturar los enlaces de unas sustancias iniciales, requieren de una
fuerza de activación. Esto se les conoce como reactivos, los cuales permiten transformar las
sustancias iniciales, en sustancias finales o productos. Las enzimas, como buenas catalizadoras,
son encargadas de elevar la velocidad de las reacciones químicas, reduciendo la energía de
activación. Con ello podemos entender mejor ello lo que observamos en nuestra práctica.

Conclusiones:

La tripsina es una proteína enzimática que rompe los enlaces de

las proteínas mediante hidrólisis para formar péptidos o aminoácidos de menor tamaño. La
tripsina es producida en el páncreas y secretada en el duodeno , donde es esencial para
la digestión. El pH óptimo es 8 y la temperatura óptima es 37ºC.

La tripsina es una proteína que actúa de acuerdo al pH y a la temperatura ya que si cambia su

medio se desnaturaliza y empieza a cambiar estructuralmente, y genera los cambios que
observamos en los diferentes sistemas.

Referencias bibliográficas

PROF: PILAR CARBONERO, COMPLEMENTOS DE BIOQUIMICA INDUSTRIAS AGRICOLAS,

UNIVERSIDAD POLITECNICA MADRID.

https://powerexplosive.com/desnaturalizacion-proteica/