PRCTICA # 10

STREPTOCOCCUS
OBJETIVOS

Identificar al genero Streptococcus

META: Aislar, identificar, cuantificacin UFC de streptococcus

INTRODUCCIN
GENERO STREPTOCOCCUS
El gnero Streptococcus es un grupo formado por diversos cocos grampositivos que normalmente se disponen en
parejas o en cadenas. La mayora de las especies son anaerobios facultativos, y algunos crecen nicamente en una
atmsfera enriquecida con dixido de carbono. Sus exigencias nutricionales son complejas, y su aislamiento requiere
el uso de medios enriquecidos con sangre o suero. Son capaces de fermentar hidratos de carbono, proceso que
produce cido lctico, y son catalasa-negativos, a diferencia de las especies del gnero Staphylococcus.
Un gran nmero de especies estreptoccicas destacan pos su papel como patgenos humanos. Lamentablemente,
la diferenciacin de las especies que componen este gnero es complicada debido a que se utilizan los tres sistemas
diferentes parcialmente coincidentes enumerados a continuacin para clasificar a estos microorganismos: 1)
propiedades serolgicas: grupo de Lancefield; 2) patrones hemolticos: hemlisis completa (beta), hemlisis
incompleta (alfa) y ausencia de hemlisis, y 3) propiedades bioqumicas (fisiolgicas).
Rebeca Lancefield desarroll en 1933 el sistema de clasificacin serolgica para diferenciar las cepas betahemolticas. La mayora de estas cepas y algunas de las alfa-hemolticas y no hemolticas poseen antgenos
especficos de grupo, la mayora de los cuales son hidratos de carbono de la pared celular. Estos antgenos se
pueden detectar fcilmente con pruebas inmunolgicas, y han sido tiles para identificacin rpida de algunos
patgenos estreptoccicos. Por ejemplo, Streptococcus pyogenes (clasificado como Streptococcus de grupo A)
causa faringitis estreptoccica. El antgeno de grupo de este microorganismo se puede detectar en los exudados
farngeos mediante inmunoanlisis rpido.
La mayora (pero no todos) de los estreptococos alfa-hemolticos y no hemolticos carecen de los antgenos de la
pared celular especficos de grupo. Estos microorganismos se deben identificar a travs de pruebas bioqumicas. No
obstante, estos sistemas de clasificacin no son mutuamente excluyentes.
ESPECIES DE STREPTOCOCCUS
Streptococcus pyogenes.
La especie ms importante de los estreptococos del grupo A es S. pyogenes originan diversas enfermedades
supurativas y no supurativas. Aunque este microorganismo constituye la causa ms frecuente de faringitis bacteriana,
la fama de estos microorganismos se debe a las llamativas enfermedades potencialmente mortales provocadas por
bacterias necrosantes, como evidencia las publicaciones que han inundado tanto la literatura cientfica como la
prensa sensacionalista.
Fisiologa y Estructura.- Las cepas de S. pyogenes son cocos esfricos de dimetro comprendido entre 1 y 2 m que
forman cadenas cortas en las muestras clnicas y cadenas de mayor longitud cuando crecen en medios de cultivos.
Su crecimiento es ptimo en el medio agar sangre enriquecido, pero se inhibe cuando contiene una concentracin
elevada de glucosa. Despus de 24 horas de incubacin se observan colonias blancas de 1 a 2 mm con grandes
zonas de -hemlisis.
Se ha estudiado detalladamente la estructura antgenica de S. pyogenes. El marco estructural bsico de la pared
celular, es la capa de peptidoglucano, la cual tiene una composicin parecida a la de otras bacterias grampositivas.
En el interior de la pared celular se encuentran los antgenos especficos de grupo y de tipo.
Hidratos de carbono especficos de grupo.- El hidrato de carbono especfico de grupo, el cual constituye
aproximadamente el 10% del peso seco de la clula (antgeno del grupo A), es un dmero de N-acetilglucosamina y
de ramosa. Este antgeno se usa para clasificar a los streptococcos del grupo A y distinguirlos de otros grupos de
estreptococos.
Protenas especficas de tipo.- La protena M es la principal especfica de tipo que se asocia a los streptococos
virulentos. Se compone de dos cadenas polipetdicas que forman una hlice alfa. La protena se ancla a la
membrana citoplsmica, se extiende a travs de la pared celular y sobresale por encima de la superficie celular. El

extremo carboxilo est anclado en la membrana citoplsmica y la porcin de la molcula incluida en la pared celular,
origina la variedad antignica observada entre los ms de cien serotipos de protena M. Las protenas M se
subdividen en molculas de clase I y de clase II. Las protenas de clase I comparten los antgenos expuestos,
mientras que las protenas M de clase II carecen de antgenos expuestos comunes. A pesar de que las cepas
portadoras de ambas clases de antgenos pueden provocar infecciones supurativas y glomerulonefritis, tan slo las
bacterias que contienen protenas M de clase I producen fiebre reumtica.
Una protena secundaria especfica de tipo que constituye un marcador epidemiolgico til en las cepas bacterianas
que no expresan la protena M es la protena T (resistente a la tripsina). Se ignora cul es la funcin estructural de
esta protena. Aunque la clasificacin epidemiolgica de S. pyogenes se ha basado tradicionalmente en la
identificacin de los tipos especficos M o T mediante la aglutinacin con anticuerpos especficos frente M o T, es
posible que este procedimiento se sustituya por la secuenciacin del gen emm que codifica la protena M.
Otros componentes de la superficie celular.- Otros componentes importantes de la pared de S. pyogenes son las
protenas tipo M, el cido teicoico y la protena F. Las protenas de tipo M estn codificadas por un complejo de ms
de 20 genes que componen la superfamilia de genes emm. Estos genes codifican las protenas M, las protenas de
tipo M y otras protenas que se unen a las inmunoglobulinas (Ig). El cido teicoico y la protena F facilitan la unin a
las clulas del organismo anfitrin, al formar un complejo con la fibronectina que se encuentra presente en la
superficie de las clulas del organismo anfitrin.
Cpsula.- Algunas cepas de S. pyogenes forman una cpsula externa de cido hialurnico que contiene molculas
repetidas de cido glucurnico y N-acetilglucosamina. La cpsula no se diferencia a nivel antignico del cido
hialurnico presente en los tejidos conjuntivos de mamfero, de modo que permite evitar la fagocitosis bacteriana. Es
probable que las cepas encapsuladas de esta especie originen infecciones sistemticas graves.
Patogenia e inmunidad.- La virulencia de los estreptococos del grupo A est determinada por la capacidad de las
bacterias de adherirse a la superficie de las clulas del organismo anfitrin, invadir las clulas epiteliales, evitar la
opsonizacin y la fagocitosis y producir una variedad de toxinas y de enzimas. Se ha demostrado que en la
adherencia a las clulas del organismo anfitrin, median ms de 10 antgenos bacterianos distintos, siendo los ms
importantes el cido teicoico, las protenas M y la protena F. La adherencia inicial es una interaccin dbil entre el
cido teicoico y los sitios de unin de los cidos grasos en la fibronectina y las clulas epiteliales. La adherencia
posterior implica a la protena M, la protena F y otras adhesinas que interaccionan con los receptores especficos de
las clulas del organismo anfitrin.
S. pyogenes puede invadir las clulas epiteliales, un proceso mediado por la protena M y la protena F, as como por
otros antgenos bacterianos. Se considera que esta internalizacin es importante tanto para el mantenimiento de las
infecciones persistentes (por ejemplo: la faringitis estreptococica recurrente) como para la invasin de los tejidos
profundos.
S. pyogenes dispone adems, de otros mecanismos para evitar la opsonizacin y la fagocitosis. La regin
conservada de la protena M se puede unir a una betaglobulina srica, el factor H, la cual constituye una protena
reguladora de la ruta alternativa del complemento. El componente C3b del complemento, un importante mediador de
la fagocitosis, se ve desestabilizado por el factor H. Por ello, cuando C3b se une a la superficie celular en la regin de
la protena M es degradado por el factor H, con lo que se evita la fagocitosis. El efecto slo se ve superado cuando el
paciente produce anticuerpos opsnicos especficos de tipo frente a la protena M especfica. La unin de fibringeno
a la superficie de la protena M inhibe tambin la activacin del complemento por la ruta alternativa y reduce la
cantidad de C3b unido. Las protenas M interfieren en el proceso de fagocitosis. Por ltimo, todas las cepas de S.
pyogenes son capaces de producir una peptidasa de C5a, una serina proteasa que inactiva este componente. C5a
es una molcula quimioatrayente de neutrfilos y fagocitos mononucleares; de este modo se inhibe la formacin de
abscesos hasta que el paciente logra neutralizar la peptidasa por medio de anticuerpos especficos.
Adems, diversas enzimas y toxinas pueden intervenir en la patologa observada por S. pyogenes.
ESTEPTOCOCOS IMPORTANTES.
Microorganismo Origen histrico
Streptococcus
streptus, flexible; coccus, grano o baya (un grano o baya flexible; en referencia al aspecto de
las largas y flexibles cadenas de cocos)
S. agalactie
agalactia, necesidad de leche (la cepa inicial [bautizada como S. mastitidis] originaba
mastitis bovina)
S. anginosus
anginosus, relativo a la angina
S. bovis
bovis, bovino (asociado inicialmente a enfermedad en ganado bovino)
S. constellatus
constellatus, tachonado de estrellas (la cepa aislada inicialmente se encontraba inmersa en
agar y la colonia de mayor tamao estaba rodeada de otras colonias ms pequeas; la
formacin en satlite no tiene lugar alrededor de las colonias situadas sobre la superpie de
una placa de agar)
S. dysgalactiae
dis, enfermo, duro; galactia, relativo de la leche (prdida de la secrecin de leche; las cepas
causaban mastitis bovina)
S. intermedius
intermedius, intermedio (confusin inicial acerca de si se trataba de una bacteria aerobia o
anaerobia)

S. mitis
S. mutans
S. pneunomiae
S. pyogenes
S. salivarius

mitis, leve (se pens, errneamente, que producia infecciones leves)

mutans, cambiante (cocos que pueden adoptar un aspecto bacilar, en especial cuando se
aslan inicialmente de un cultivo)
pneumon, los pulmones (causa neumona)
pyus, pus; gennaio, engendrar o producir (productos de pus; se asocia habitualmente a la
formacin de pus en heridas)
salivarius, salivar (se detecta en la saliva de la boca)

CLASIFICACIN DE LOS PATGENOS ESTREPTOCCICOS MS FRECUENTES.

Clasificacin bioqumica
Clasificacin serolgica
Patrn de hemlisis
S. pyogenes
A

S. agalactiae
B
; ocasionalmente no hemoltico
S. dysgalactiae
C, G

Grupo S. anginosus
A, C, F, G, no agrupables
; ocasionalmente o no hemoltico
S. bovis
D
; no hemoltico; ocasionalmente
Grupo viridans
No agrupable
o no hemoltico
S. pneumoniae
No agrupable

ENFERMEDADES POR ESTREPTOCOCOS: RESUMENES CLNICOS.

Steptococcus pyogenes (grupo A)
Infecciones supurativas

Faringitis: faringe enrojecida con presencia frecuente de exudados; la linfadenopata cervical puede ser
prominente.

Escarlatina: exantema eritematoso difuso que comienza en el trax y se extiende posteriormente a las
extremidades; complicacin de faringitis estreptoccica.

Pioderma: infeccin cutnea localizada con vesculas que avanzan a pstulas; sin indicios de enfermedad
sistmica.

Erisipela: infeccin cutnea localizada con dolor, inflamacin, adenopata y sntomas sistemticos.

Celulitis: infeccin cutnea que afecta a los tejidos subcutneos.

Fascitis necrosante: infeccin profunda de la piel que provoca la destruccin de capas musculares y de
tejido adiposo.

Sndrome del shock txico: infeccin multiorgnica que remeda el sndrome del shock txico estafiloccico;
no obstante, la mayor parte de los pacientes presentan bacteremia e indicios de fascitis.

Otras enfermedades supurativas: se han reconocido otras infecciones, como la septicemia puerperal, la
linfangitis y la neumona.
Infecciones no supurativas

Fiebre reumtica: caracterizada por alteraciones inflamatorias del corazn, articulaciones, vasos sanguneos
y tejidos subcutneos.

Glomerulonefritis aguda: inflamacin aguda de los glomrulos renales con edema, hipertensin, hematuria y
proteinuria.
Streptococcus agalactiae (grupo B)

Enfermedad neonatal de comienzo precoz: en el transcurso de los 7 das siguientes al nacimiento, los
neonatos infectados desarrollan signos y sntomas de neumona, meningitis y septicemia.
Enfermedad neonatal de comienzo tardo: ms de 1 semana despus del nacimiento, los neonatos
presentan signos y sntomas de bacteriemia con meningitis.
Infecciones en mujeres gestantes: ms a menudo, se manifiestan con infecciones del aparato urinario;
pueden provocar bacteriemia y complicaciones diseminadas.
Infecciones en otros pacientes adultos: las enfermedades ms frecuentes son la bacteriemia, la neumona,
las infecciones seas y articulares y las infecciones cutneas y de partes blandas.

Otros estreptococos -hemolticos.

Formacin de abscesos en tejidos profundos: asociada al grupo de S. anginosus.

Faringitis: asociada a S. dysgalactiae; la enfermedad remeda la causada por S. pyogenes; pueden

complicarse con glomerulonefritis aguda.

Estreptococos del grupo viridans

Formacin de abscesos en tejidos profundos: asociada al grupo S. anginosus.

Steptococcus pneumoniae

Neumona: inicio agudo con escalofros intensos y fiebre mantenida, tos productiva con esputo teido de
sangre; consolidacin lobular.

Meningitis: infeccin grave que afecta a las meniges y cursa con cefalea, fiebre y septicemia; elevada
mortalidad y graves deficiencias neurolgicas en los supervivientes.

Bacteriemia: ms frecuente en pacientes aquejados de meningitis que en aquellos con neumona, otitis
media o sinusitis; septicemia fulminante en pacientes asplnicos. 1
Streptococcus agalactiae
CARACTERSTICAS GENERALES
Streptococcus agalactiae, o estreptococo -hemoltico del grupo B (EGB), es un coco grampositivo, catalasa y
oxidasa negativo, anaerobio facultativo, que se presenta formando cadenas de longitud variable. El EGB puede
crecer en medios simples, aunque los medios suplementados con sangre o suero favorecen su crecimiento. Tras 1824 h de incubacin en agar sangre, las colonias son de unos 2 mm de dimetro, lisas y rodeadas por un halo de hemlisis, aunque existen algunas cepas no hemolticas. El empleo de medios selectivos favorece la recuperacin
del EGB. Como agentes selectivos se emplean, gentamicina, cido nalidxico, colistina o cristal violeta.
El EGB presenta, adems del antgeno polisacrido comn que le caracteriza como perteneciente al grupo B de
Lancefield, antgenos polisacridos especficos y antgenos proteicos, que permiten su clasificacin en serotipos.
IDENTIFICACIN
Las pruebas bioqumicas ms utilizadas son el CAMP-test, la hidrlisis del hipurato y la resistencia a discos de
bacitracina y cotrimoxazol, aunque ninguna de ellas es especfica. En medios de cultivo especiales, el EGB produce
un pigmento de color rojo naranja, que es caracterstico, y que permite su identificacin directa, sin necesidad de
otras pruebas. Las cepas no hemolticas no producen pigmento. La identificacin definitiva de EGB requiere la
demostracin del antgeno especfico de grupo, por ejemplo mediante la aglutinacin con partculas de ltex.
EPIDEMIOLOGA Y TRANSMISIN
El EGB forma parte de la flora normal del tracto gastrointestinal desde donde coloniza la vagina y, a veces, el tracto
urinario. La colonizacin del tracto genital puede ser intermitente y es un hecho importante en las gestantes, por la
posibilidad de transmisin del EGB al recin nacido. Las tasas de colonizacin en las gestantes oscilan entre el 5 y el
35 %, dependiendo de la poblacin en estudio, de los medios y tcnicas de cultivo y de las reas anatmicas de las
que se toma la muestra. En nuestro medio, del 11 al 13% de las gestantes son portadoras vaginales o rectales del
EGB.
La colonizacin por el EGB en los recin nacidos se produce durante el parto, a partir del tracto genital materno
colonizado, o en el tero, por va ascendente, siendo la tasa de transmisin vertical del 50%. Hay varios factores
obsttricos que se asocian con un mayor riesgo de infeccin del recin nacido, fundamentalmente: prematuridad
(<37 semanas), la rotura prolongada de las membranas (>18 horas), la existencia de fiebre intraparto (>38 C), haber
tenido un hijo anterior con infeccin por el EGB y la presencia de bacteriuria durante el embarazo causada por este
microorganismo. Tambin las tasas de colonizacin por EGB son mayores en los recin nacidos de madres que
presentan una alta densidad de colonizacin vaginal, y en los nacidos de gestantes que presentan un bajo ttulo de
anticuerpos frente a la cepa colonizante de EGB.
En los ltimos aos se ha producido un notable incremento de las infecciones por EGB en adultos, fuera del periodo
postparto, pero las causas que determinan esta mayor incidencia no estn claras.
MANIFESTACIONES CLNICAS
Actualmente, el EGB es la principal causa de sepsis neonatal; sin medidas de prevencin, su incidencia es de,
aproximadamente, 3 casos por mil nacidos vivos (entre el 1 y el 2% de los recin nacidos colonizados por el EGB).
En ste, la infeccin suele manifestarse, en las primeras horas de vida, bajo la forma de neumona, sepsis o
meningitis, con una mortalidad prxima al 10% (0,2-0,5 casos por mil nacidos vivos).
Aunque la existencia de factores obsttricos de riesgo aumenta la probabilidad de infeccin en el recin nacido, slo
en la mitad aproximada de los que presentan una sepsis neonatal se identifica algn factor de riesgo.
El EGB es, tambin, una causa importante de infecciones en gestantes y purperas: corioamnionitis, endometritis
postparto, infeccin de la herida quirrgica tras cesrea e infeccin del tracto urinario. La bacteriuria por el EGB
1

Microbiologa Mdica. Quinta Edicin. Murray, Rosenthal, Pfaller. Pag:238-242.

durante el embarazo se asocia con un mayor riesgo de parto pretrmino y rotura prematura de membranas,
probablemente reflejo de un mayor inculo vaginal.
En adultos, fuera del perodo postparto, las infecciones por el EGB se presentan, generalmente, como formas que
complican otras patologas; en particular, la diabetes, las hepatopatas, el cncer, las alteraciones neurolgicas y la
insuficiencia cardaca o renal. Las manifestaciones clnicas ms frecuentes son las infecciones de piel y tejidos
blandos, la bacteriemia sin foco sptico evidente, la endocarditis, las infecciones del tracto urinario, la meningitis y las
infecciones osteoarticulares.
DIAGNSTICO MICROBIOLGICO
El diagnstico requiere la demostracin del microorganismo en sangre, lquido cefalorraqudeo (LCR) u otras
muestras significativas, mediante cultivo. Las muestras de sangre pueden inocularse en cualquiera de los sistemas
de hemocultivo habituales.
En los recin nacidos, el aislamiento del EGB en las mucosas, aspirado gstrico, orina o superficies cutneas, por s
solo, no tiene significado diagnstico, ya que no permite distinguir entre colonizacin e infeccin. La deteccin de
antgeno en la sangre, LCR u orina, se ha empleado en el diagnstico precoz de la sepsis neonatal pero, en general,
con poca especificidad, lo que no permite su empleo como nica prueba para el diagnstico etiolgico de este cuadro
clnico. Sin embargo, el valor predictivo negativo de estas pruebas, prximo al 100%, las hace tiles, en algunos
casos, para excluir a este microorganismo.
Para el estudio de las gestantes portadoras del EGB, se recomienda la toma conjunta de muestra vaginal y
anorrectal en la 35-37 semana de gestacin. Como tcnica de cultivo, tradicionalmente, se ha recomendado el
empleo de caldos de enriquecimiento selectivos (por ejemplo, el caldo Todd-Hewitt con colistina y cido nalidxico, o
gentamicina y cido nalidxico), con posterior subcultivo en agar sangre e identificacin del EGB, a partir de las
colonias aisladas, mediante la deteccin de antgeno o por la prueba CAMP.
En el Documento de Consenso Espaol para la prevencin de la infeccin neonatal por el EGB, como alternativa al
cultivo tras enriquecimiento, se recomienda el empleo del medio Granada (Biomedics, Alcobendas, Madrid), que es
un medio especfico, selectivo y diferencial basado en la deteccin del pigmento. Este medio permite la identificacin
directa del EGB y presenta una sensibilidad igual a la del cultivo tras enriquecimiento. Se ha desaconsejado
expresamente, para determinar la colonizacin por el EGB en las gestantes, el empleo de tcnicas de deteccin de
antgeno directamente sobre exudados vaginales o rectales, por la elevada frecuencia de resultados falsos negativos.
El diagnstico de la bacteriuria causada por el EGB en las gestantes, tiene inters por las complicaciones perinatales
que puede ocasionar. El cribado para detectarla debe realizarse por cultivo de la orina. Las pruebas rpidas, salvo la
tincin de Gram, carecen de suficiente sensibilidad. En medios como el agar CLED (Cistina-Lactosa-ElectrolitoDeficiente), el EGB se desarrolla, tras 18 horas de incubacin, en la forma de colonias puntiformes, transparentes,
que pueden pasar fcilmente desapercibidas, sobre todo cuando se encuentra formando parte de un cultivo
polimicrobiano. Por esto, para mejorar la eficacia del diagnstico de la bacteriuria del embarazo, se recomienda el
empleo sistemtico de un medio de cultivo adicional, agar sangre o medio Granada. Independientemente del nmero
de colonias aisladas, el hallazgo del EGB en la orina de las embarazadas refleja un fuerte grado de colonizacin
vaginal que obliga a hacer profilaxis intraparto para la prevencin de la sepsis neonatal precoz.
PROFILAXIS
La administracin endovenosa de antibiticos intraparto a las gestantes portadoras de EGB, iniciada cuatro horas
antes o ms antes del nacimiento, es la nica medida eficaz actualmente aceptada para interrumpir la transmisin
vertical del EGB y evitar la sepsis neonatal. La administracin de antibiticos durante la gestacin resulta ineficaz
para erradicar la colonizacin vaginal, ya que, al suprimir el tratamiento, la vagina vuelve a colonizarse a partir del
recto.
Basado en los datos epidemiolgicos existentes en Espaa, en el documento de Consenso Espaol, para la
prevencin de la infeccin neonatal por el EGB, se recomienda la administracin de profilaxis intraparto en las
siguientes circunstancias: a) en todas las mujeres identificadas como portadoras vaginales o rectales de EGB
durante la gestacin, b) en todos los partos de menos de 37 semanas en los que se desconozca si la gestante es o
no portadora del EGB, c) en todas las embarazadas que hayan presentado bacteriuria por el EGB en la gestacin, d)
en las mujeres que previamente hayan tenido un hijo con enfermedad perinatal por EGB demostrada,
independientemente del resultado de los cultivos de seguimiento, y e) cuando no se disponga de los resultados del
cultivo, pero existan factores de riesgo tales como la rotura prolongada de membranas (>18 h), o la presencia de
fiebre intraparto (>38 C).
Se recomienda administrar, al comienzo del trabajo de parto, una de las dos pautas siguientes: a) 2 g de ampicilina
i.v., seguidos de 1 g cada 4 h hasta su finalizacin, y b) 5 MU de penicilina G i.v., seguidos de 2.5 MU cada 4 h, hasta
el fin del parto. En caso de alergia a los -lactmicos, puede utilizarse la clindamicina i.v. 900 mg/8 h, o la
eritromicina i.v. 500 mg/6h hasta la conclusin del parto.
En los recin nacidos, la infeccin por el EGB se relaciona con un ttulo bajo de anticuerpos frente al antgeno
especfico de tipo de la cepa colonizante. Actualmente, se encuentran en fase experimental el desarrollo de vacunas

dirigidas a prevenir la infeccin neonatal causada por el EGB, mediante la inmunizacin activa de las gestantes.
Aunque los resultados de alguna de estas vacunas han sido prometedores en estudios realizados en voluntarias, de
momento no se encuentran disponibles, y su eficacia en la prevencin de la infeccin en adultos no se conoce.
TRATAMIENTO
La penicilina G es el antibitico de eleccin para el tratamiento de las infecciones por este microorganismo. Tambin
se utiliza habitualmente la combinacin de penicilina ms un aminoglucsido, generalmente la gentamicina, en el
tratamiento de las infecciones graves, dada la sinergia que estos antibiticos presentan in vitro. La duracin del
tratamiento es variable, segn la edad, gravedad, localizacin de la infeccin y respuesta clnica inicial.
Algunos estudios recientes ponen de manifiesto un aumento de la resistencia del EGB a la eritromicina y la
clindamicina (16 y 15% respectivamente), lo que puede plantear problemas a la hora de elegir la profilaxis antibitica
ms adecuada en las gestantes alrgicas a los -lactmicos. En el tratamiento de la bacteriuria del embarazo,
tambin suelen emplearse antibiticos de este grupo, manteniendo el tratamiento durante tres a siete das.2
Streptococcus pneumoniae
Reino: Eubacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Lactobacillales
Familia: Streptococcaceae
Gnero: Streptococcus
Especie: S. pneumoniae
El Steptococus pneumoniae fue identificado como causa de neumona entre los aos 1880-1890. En 1926 se le
asigno el nombre de diplococus pneumoniae basndose en al tincin de Gram. Recin en 1974 se le dio el nombre
de Streptococus pneumoniae debido a que crece en el medio liquido. Desde ah en adelante tambin se han
identificado 90 serotipos lo cual se da ya que cada uno se estos serotipos posee una capa de polisacrido especifico.
Streptococcus pneumoniae, es un microorganismo patgeno capaz de causar diversas infecciones y procesos
invasivos severos. Se trata de una bacteria Gram. Positiva que presenta una forma oval y el extremo distal
lanceolado. Es inmvil, no forma endosporas, y es un miembro alfa hemoltico del gnero Streptococcus.
Generalmente, se presenta en forma de diplococo, aunque existen algunos factores que pueden inducir la formacin
de cadenas. Neumococo es un patgeno casi exclusivamente humano causante de un gran nmero de infecciones
como neumona, endocarditis y de procesos invasivos severos como meningitis, septicemia, etc. particularmente en
ancianos, nios y personas inmunodeprimidas. El hbitat natural de neumococo es la faringe.
Concepto y clasificacin.
Son cocos gram positivos, lanceolados o dispuestos en cadenas y con una capsula de polisacrido que permite su
tipificacin con antisueros especficos. Estos son caractersticos por ser solubles en las sales biliares, esto se debe a
la accin de los agentes tensoactivos, los cuales probablemente retiran o inactivan los inhibidores de las autolisinas
de la pared celular, dando paso a la lisis.
El estreptococo pneumoniae se puede diferenciar del estreptococo viridans en que solo el primero es soluble en bilis,
el viridans no. Y la otra diferencia es que el estreptococo pneumoniae se inhibe en la presencia de optoquina. El
estreptococo viridans no se inhibe con la optoquina.
(A)

(B)
2

http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/agalac.htm

En la imagen (A) tenemos un estreptococo viridans resistente a la optoquina, en la imagen (B) hay estreptococo
pneumonae sensible a la optoquina.
Estos microorganismos son muy difciles de cultivar ya que presentan una gran sensibilidad a agentes externos.
Tipos de neumococos
En los adultos los tipos 1 a 8 causan casi el 75% de los casos de neumona neumoccica y ms de la mitad de todas
las muertes por bacteriemia neumoccica; en los nios, los tipos 6, 14, 19 y 23 son la causa ms frecuente.
Microbiologa
En el laboratorio se le identifica como cocos gram positivos que crecen en cadenas y ademas que son catalasanegativos.
El Streptococus pneumoniae sintetiza la toxina neumolisina la cual degrada la hemoglobina a un producto verdoso de
degeneracion y causa hemolis en agar de sangre, por lo que se le clasifica como -hemolitico.
Estas cepas de neumococos en su mayoria (98%) son sensibles a etilhidrocupeina (optoquina) y ademas casi todas
se disuelven por accion de sales biliares.
Los principales componentes de su pared celular son el peptidoglican y el acido teicoico y la integridad de la pared
esta dado por la prescencia de cadenas laterales peptidicas entrelazadas entre si por accion de enzimas como las
transpeptidasas y carboxipeptidasas. Estas enzimas son inactivadas por los antibioticos -lactamicos.
El S. pneumoniae contiene una sustancia especifica, la sustancia C y esta presente en todas las cepas.
Su virulencia esta dada entre otros por proteinas de union a colina como la PspA que impide la fagocitosis, ademas
que todas las cepas poseen una capsula polisacarida.
Respecto a las cepas que producen mayor incidencia son las primeras descubiertas por lo que estas tiene un numero
mas bajo, esto segn el sistema norteamericano.
Pero el sistema danes que es el mas aceptado lo agrupo basandose en sus similitudes antigenicas.
Epidemiologa
S. pneumoniae coloniza al nasofaringe y se aisla entre el 5-10% de los adultos sanos y del 20-40% de los nios.
Luego de su colonizacin pueden persistir de 2-4 semanas y an algunos casos hasta 6 meses. El contagio se
produce por contacto proximo prolongado y este aumenta si se da en espacios cerrados. Tambien las salas cuna son
lugares de diseminacin para los nios y para los adultos, las aglomeraciones como albergues, prisiones hogares de
ancianos, entre otros.
El riesgo no aumenta en colegios, lugares de trabajo e incluso hospitales. La insidencia es elevada en lactantes de
hasta 2 aos y baja en adolescentes y adultos jvenes y asi la tasa se eleva luego de los 55 aos.
La mayoria de los casos de neumona se debe al S.pneumoniae. aproximadamente 20/1000000 de los casos en
adultos jvenes y 280/100000 en adultos mayores.Esta insidencia alcanza el maximo en invierno y desciende en
verano
Mecanismos Patognicos.
S. pneumoniae se une a las clulas nasofaringeas humanas por la interaccin especfica de las adhesinas de la
superficie bacteriana, como el antgeno A de la superficie neumococica o las protenas de unin a colina, con los
receptores de las clulas epiteliales.
Los posibles sitios de unin pueden ser: glucoconjugados de clulas epiteliales o el glucolipido aislado. A esta
adherencia tambin contribuye la variacin de la fase neumococica, los organismos pasan de ser transparentes a
opacos.
En los cultivos se encuentran colonias transparentes y opacos. Los opacos tienen peptidoglicano y capsulas grandes

y los transparentes mayor cantidad de fosforicolina, lo que le da adherencia a clulas de mamferos y menos
polisacrido capsular.
Luego de la colonizacin de la nasofaringe se produce una infeccion si los microorganismos pasan a zonas
adyacentes como: senos paranasales, trompa de Eustaquio y su eliminacin se dificulata por edema de la mucosa
que se produce por el mismo microorganismo.
Tambin aparece neumona si los microorganismo se inhalan por los bronquiolos o los alvolos y no son eliminados.
Que no se eliminen puede ser por la presencia de infeccion vrica, humo de cigarrillo u otra sustancia toxica que
incrementan la cantidad de mucus y la disminucin de la accin ciliar.
Adems se ha demostrado que los neumococos se unen a los neumocitos luego de la infeccion vrica, y los
neumocitos activados por citoquinas expresan el receptor del factor activador de plaquetas. As el receptor se une a
residuo de fosforilcolina de la sustancia C y eso aumenta la adherencia de los neumococos.
Luego que estos alcanzan una zona no habitual activan el complemento por la va clsica y alterna, as se producen
citocinas y la atraccin de neutrofilos y as de fagocitosis., pero la capsula es resistente a ella. Y como no puede ser
fagocitada comienza la infeccion, la cual se puede diseminar a espacios articulares, meninges, cavidad peritoneal,
etc.
La patogenicidad de este microorganismo esta dada por la evolucin de la fagocitosis y el potencial de estimular
inflamacin y lesin de tejidos, todo dado por su encapsulacion, ya que los neumococos no encapsulados casi nunca
causan enfermedad invasora.
Los sntomas de la enfermedad que causan se debe a la inflamacin de los tejidos que producen, lo que aumenta la
presin intracavitaria (otitis, meningitis y neumona).
Cuando invade el SNC en la meningitis produce lesin neuronal.
Tambin en la patogenicidad acta la autolisina que al producir la lisis de la bacteria esta vierte sus contenidos y
aumenta la reaccin de inflamacin. Tambin en la meningitis se liberan aminocidos excitadores por el tejido
neuronal lo que contribuye a las lesiones de esta enfermedad.3
TIPOS DE HALOS DE INHIBICIN (EN DISCOS CON ANTIBITICO)
Cuando el disco impregnado con el antibiotico toma contacto con la superficie humeda del agar, el agua se absorbe en
el papel filtro y el antibiotico se difunde en el medio que lo rodea .La velocidad de extraccin del antibiotico fuera del
disco es mayor que su difusin modo que la concentracin inmediatamente adyacente al disco puede exceder a la del
disco mismo. No obstante a medida que aumenta la distancia , hay una reduccion logaritmica de la concentracin del
antibiotico .Cuando se alcanza una masa celular critica de bacterias, se sobrepsa la actividad inhibitoria y aparece el
crecimiento bacteriano .La concentracin del antibiotico que se difundio en esta interfase de crecimiento y las bacterias
inhibidas se conoce como concentracin critica y se aproxima a la CIM obtenida en las pruebas .Esto coincide con el
desarrollo de una prueba practicable de difucion de discos ,se ha intentado simplificar la prueba . En la placa se
presenta el disco de antibiotico en un antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de
agar inoculada con el grmen. Es una medida de la potencia del antibiotico frente al grmen. Los diferentes tipos de
inhibicin son los siguientes:
1 . Pruebas de sensibilidad antimicrobiana por difusin en disco.
2. Pruebas de concentracin mnima inhibitoria (MIC) en caldo. Esta prueba cuantitativa es muy til para
microorganismos anaerobios, para determinar la actividad bactericida o evidenciar el sinergismo o antagonismo entre
agentes antimicrobianos.
3. Pruebas para produccin de beta-lactamasa. Los procedimientos comnmente utilizados para determinar la
produccin de beta-lactamasas en laboratorios clnicos incluyen el mtodo cromognico de
cefalosporina, el acidimtrico y el iodomtrico. Todas estas pruebas estn basadas en la deteccin de
los productos finales de la hidrlisis de beta-lactamasas por colorimetra.
4. Pruebas para la detectar la resistencia a oxacilina (metacilina) en Staphylococcus. Esta prueba es importante
considerando que algunas cepas de Staphylococcus pueden dar falsos negativos para metacilina en pruebas de
difusin debido a la rpida inactivacin de este medicamento en refrigeracin.
Se utiliza una oxacilina ms estable que permite detectar adems de las oxacilina resistentes, la mayora de las
cepas metacilina resistentes.
5. Pruebas de sensibilidad por microdilucin en caldo para bacterias anaerobias. Para anaerobios se recomienda
utilizar dilucin en agar, microdilucin en caldo y macrodilucin en caldo. Se deben utilizar medios suplementados
3

http://s-pneumoniae.blogspot.com/

que favorezcan el crecimiento de anaerobios, en particular la microdilucin en caldo es til para microorganismos
como Clostridium.
ENZIMA ESTAFILOCOCIDA PARA PRUEBA DE CAMP
Proteinasas. Destruyen protenas.
Coagulasa. Coagula el plasma, forma una mallafibrina = Antifagocitaria.
Nucleasas. Clivaje de ADN y ARN.
Estafiloquinasas (fibrinolisina). Fibrinolisis.
Hialuronidasa. Despolimeriza cido hialurnico.
Catalasa. Convierte H2O2 en agua y oxgeno
B-lactamasas. Destruyen penicilinas y cefalosporinas (antibiticos B-lactmicos).
Gelatinasas. Licuan la gelatina.
Sangre de carnero desfibrinada
La sangre desfibrinada de carnero sangre es completamente procesada, sin uso alguno de aditivos o preservantes
para remover la fibrina, factor que estimula la coagulacin de la sangre que interfiere con la preparacin y utilizacin
en el medio de cultivo. Est libre de citratos u otros anticoagulantes y libre de agentes complejantes que puedan
interferir con el desarrollo microbiano. Adems, esta libre de factores inmunolgicos que comnmente se encuentran
en la sangre humana interfiriendo con el diagnstico. La sangre de carnero es la ms adecuada para la preparacin
de Agar Sangre y Agar Chocolate. Comnmente se utiliza la sangre de carnero entre 5 - 10% como un medio de
enriquecimiento nutritivo en la preparacin de medios de cultivo. ste es utilizado principalmente para el crecimiento,
identificacin y observacin de las reacciones hemolticas causadas por algunas bacterias con importancia clnica.4
TINCIN DE GRAM
La tcnica de la tincin de Gram fue desarrollada por el bacterilogo dans Christian Gram en 1884. Esta tincin
clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. La tcnica incluye tincin primaria, decoloracin
y tincin de contraste:
1. Se tie el espcimen con el primer colorante, cristal violeta, que tie de violeta.
2. Se aade el mordiente, iodo.
3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solucin de acetona o etanol. En este momento, las bacterias
Gram negativas pierden su tincin violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.
4. Como colorante de contraste se aade safranina, que tie de rosa las bacterias Gram negativas, previamente
decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta ms intenso.
El distinto comportamiento frente a los colorantes de las bacterias Gram positivas y Gram negativas se debe a las
diferencias existentes en sus superficies externas. Las clulas Gram negativas poseen una capa de peptidoglicano
delgada y una membrana ex-terna. Las bacterias Gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicano v carecen
de membrana externa.
La tincin de Gram es extraordinariamente til en clnica. Esta tcnica es, casi siempre, la primera prueba que se lleva a
cabo en la identificacin de un microorganismo causante de una enfermedad, aislado de un paciente. Con slo un
microscopio y unos cuantos botes de colorante podemos averiguar si un organismo es Gram positivo o Gram negativo,
su morfologa celular y su agrupacin tpica. Esto, a veces, es suficiente para determinar con qu tipo de bacteria
estamos trabajando. Es ms, el tratamiento de una infeccin depende de que el agente sea Gram positivo o Gram
negativo, ya que algunos antibiticos actan Slo sobre los primeros, y otros sobre los segundos. La penicilina, por
ejemplo, es ms efectiva contra bacterias Gram positivas; mientras que la estreptomicina v la tetraciclina acta sobre
ambas.5

Brock, biologa de los Microorganismos, Madigan, Michael y Martinko, Pearson educacin, Madrid Espaa, 7
edicin p.p 160-163
5
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap305.htm

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

El tipo de medio que utiliza un microbilogo depende del microorganismo que est cultivando y el porqu de dicho
cultivo. Los microorganismos presentan una enorme variedad de requerimientos nutricionales. Se utiliza un medio
mnimo para determinar los requerimientos nutricionales de un organismo y un medio rico si se desea obtener masa
celular de una forma rpida. Los medios se pueden formular para el desarrollo de una especie o para distinguir entre
especies o cepas. Por tanto, los medios se clasifican en definidos, complejos o indefinidos, selectivos, diferenciales,
selectivos-diferenciales y de enriquecimiento, dependiendo de su composicin y uso.
Medios definidos: es aquel del cual conocemos su composicin qumica exacta, porque ha sido preparado a partir de
compuestos qumicos puros. Los medios definidos se usan generalmente para realizar estudios genticos, pero sus
inconvenientes a menudo sobrepasan sus ventajas. As, se requiere un tiempo considerable para preparar un medio
definido y las bacterias crecen ms despacio en ellos. Adems, no conocemos los requerimientos nutricionales de todas
las bacterias y, por tanto, no siempre pueden utilizarse.
Medios complejos: Se desconoce la composicin qumica exacta de un medio complejo. Estos medios se preparan a
partir de extractos de productos naturales tales como carne, sangre, casena (la protena de la leche), levaduras o soja.
Un medio lquido complejo se denomina caldo. La casena u otras protenas que se aaden a los medios son
usualmente hidrolizadas con enzimas o en medio cido, para hacerlas ms solubles y, por tanto, ms fciles de utilizar
nutricionalmente. Una hidrlisis parcial rompe las protenas en pptidos. Una hidrlisis total las degrada hasta
aminocidos. A las protenas parcialmente hidrolizadas se les denomina peptonas. Entre las peptonas comerciales se
encuentra la proteosa-peptona, la triptona y la triptosa. A la casena totalmente hidrolizada se le denomina hidrolizado de
casena.
Los diversos componentes de un medio complejo se venden como polvos deshidratados. Tambin existen ya cientos de
mezclas complejas que se comercializan como medios complejos especficos. Uno de estos medios es el caldo nutritivo,
probablemente el medio complejo que ms se utiliza. Cuando este medio se solidifica con agar, se denomina agar
nutritivo. Generalmente se prefiere la utilizacin de los medios complejos, ya que son fciles de preparar y permiten un
crecimiento rpido de los microorganismos.
El uso de estos medios es universal y est orientado especialmente a obtener buen desarrollo de cualquier tipo de
bacteria, se utilizan en primera instancia en el aislamiento bacteriano, ya sea a partir de otros cultivos o de productos
patolgicos. Los medios de este tipo de uso ms frecuente son: Agar tripticasa-sangre, caldo tripticasa, Agar chocolate,
medio de Mueller-Hinton.
Medios selectivos: favorece el crecimiento de ciertos microorganismos, mientras suprime el crecimiento de otros. Los
medios selectivos se utilizan para aislar especies particulares a partir de una mezcla compleja. Algunos medios son
selectivos porque contienen un producto qumico, como la azida sdca, el telurito potsico o el cristal violeta, que
inhiben el desarrollo de algunos microorganismos pero no de otros. Ejemplo: agar SPS (denominado de esta forma
porque contiene sulfadiacina y sulfato de polimixina). Otros medios de cultivo selectivos utilizan un valor extremo de pH
o una fuente de carbono poco comun.
Son medios que contienen sustancias que impiden o limitan el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten
el desarrollo de otras. consiste en aislar un microorganismo de un sustrato que contiene numerosas otras especies.Se
incluyen en este grupo el agar cristal violeta para el aislamiento de bacterias Gram(-) y el agar telurito de potasio para el
aislamiento de bacterias Gram(+).
Medios diferenciales Se utilizan para identificar las colonias de un determinado microorganismo. Por ejemplo, para
identificar Streptococcus pyogenes, la bacteria que causa la escarlatina, se utiliza el medio de agar sangre es un agar
que contiene hemates. Las colonias de esta bacteria muestran a su alrededor una zona transparente debido a que
producen hemlisis (muerte y lisis de los hemates). Algunas bacterias se identifican en medios con un indicador de pH
porque originan productos metablicos cidos, que cambian el color del indicador y por tanto de sus colonias.
Se emplean para demostrar alguna propiedad bioqumica de la bacteria como degradacin de hidratos de carbono,
protenas, hidrlisis de la urea, etc., contienen indicadores de cido base, redox o sustancias que detectan cambios en

10

el medio o en las caractersticas tpicas de las colonias el estudio en estos medios debe realizarse empleando cepas
bacterianas puras. Existen numerosos medios de este tipo, de uso preferencial en la bioidentificacin de bacilos Gram(-)
ya que ellos no tienen caractersticas muy distintivas en las colonias o cultivos en general. Entre los de uso ms
corriente se encuentran: Agar fierro-triple-azcar (TSI agar Medio de SIM, Caldo glucosado fosfatado, VogesProskauer o del rojo de metilo, Medio agar-citrato de sodio (Medio de Simmons- Medio caldo urea, etc.6
Medios selectivos-diferenciales Algunos medios son selectivos y diferenciales al mismo tiempo. El agar MacConkey es
un ejemplo de medio selectivo-diferencial, utilizado para detectar bacterias entricas (del intestino) que causan
disenteras. Cualquier muestra de heces enviada al laboratorio esta plagada de bacterias pertenecientes a muchas
especies. El agente selectivo del MacConkey acta como una especie de tamiz grosero que disminuye el campo de
identificacin. El cristal violeta y las sales del medio inhiben el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram
positivas.
Medios de enriquecimiento: Se utiliza para aislar un tipo particular de microorganismo a partir de una poblacin mixta de
gran tamao. Por ejemplo, las bacterias formadoras de endosporas pueden aislarse hirviendo una muestra de suelo y
cultivando los supervivientes. Solamente las endosporas resistirn el tratamiento y podrn crecer. Las bacterias lijadoras
de nitrgeno pueden seleccionarse cultivando el inculo de suelo en un medio libre de nitrgeno, donde slo ellas
podrn crecer porque obtienen el nitrgeno de la atmsfera. Los eclogos microbianos usan frecuentemente medios de
enriquecimiento. Por ejemplo, para encontrar un microorganismo que degrade un determinado compuesto qumico
txico, se puede inocular la muestra de suelo en un medio en el cual la nica fuente de carbono sea dicho compuesto.
El microorganismo que prospere en l podr ser utilizado en biorremediacin7
PRUEBAS Y MEDIOS DE CULTIVO
PRUEBA DE HEMOLISIS POR PICADURA
En esta prueba se corrobora la hemlisis producida por los Streptococcus que pueden ser de tres tipos: la alfa, beta y
gamma.
La hemlisis alfa es color verdoso caf por que tiene estreptolisinas O, S que degrada el potasio dentro del eritrocito
Hemlisis beta es un halo transparente por que se expresa una estreptolisina
Hemlisis gamma es ninguna hemlisis, ni verde ni transparente
PRUEBA DE QUELLUNG
La prueba de Quellung consiste en mezclar un antisuero anticapsular con el esputo o cualquier otra muestra
problema, lo que provoca la hinchazn de la cpsula bacteriana, puede verse al microscopio. Es una de las
pruebas de identificacin para los Streptococcus.
PRUEBA DE CAMP
Principio:
A.- Sirve para determinar la capacidad de un microorganismo para producir y elaborar el dfactor CAMP que acta de
manera sinrgica con la -hemolisina estafiloccica ( -lisina) sobre eritrocitos ovinos o bovinos para producir un
fenmeno ltico en la unin de los 2 microorganismos.
B.- Alternativas:

Determinar el fenmeno de hemlisis sinrgica con el factor CAMP y la -hemolisina ( -toxina) de

Clostridium perfringens.
Determinar la produccin de fosfolipasa D, la que inhibe la reaccin de la prueba de CAMP.
El fenmeno ltico se denomina prueba o reaccin de CAMP por las iniciales de los apellidos de los autores originales:
Christie, Atkins y Munich-Petersen. Con posterioridad, el trmino se utiliz para otros procedimientos. Murphy y col.
Denominaron fenmeno ltico a la reaccin CAMP y definieron la prueba CAMP como manera de determinar la
capacidad de los estreptococos de producir un agente ltico (Factor CAMP) que se manifiesta como una zona hemoltica
con la -lisina estafiloccica; de ah la sigla CAMP.
Objetivo:
A.- Prueba de CAMP

http://209.85.173.104/search?
q=cache:sp3LvVkZIIMJ:www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/archivos/microbiologia.doc+gelosa+san
gre&hl=es&ct=clnk&cd=11&gl=mx
7
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap310.htm

11

1) Diferenciar e identificar de manera presuntiva cepas humanas o animales cepas de Streptococcus agalactiae del
grupo B (+) de otras especies de Streptococcus (-) cuando se incuban en aerobiosis o condiciones reducidas de oxgeno
(jarra para extincin de la vela).
2) Verificar o identificar especies patgenas hemolticas de Listeria junto con la produccin de cido a partir de D-Xilosa,
L- ramnsido y -metil-D-mansido.
a) Con Staphylococcus aureus subes. Aureus
Determinar reacciones -hemolticas dudosas o dbiles (+d) de Listeria monocytogenes (+) y Listeria seeligeri (+d)
Ayuda a distinguir Actinomyces neuii subes. Anitratus (+) y A. neuii subesp. Neuii (+) de otras especies
Actinomyces(-)
Ayuda a distinguir Corynebacterium Boris, Corynebacterium coylae (fuertemente+) y Corynebacterium
glucoronolyticum de otras especies de Corynebacterium (-). Corynebacterium subesp. Afermentans
y
Corynebacterium striatum son variables en la prueba CAMP.
La positividad CAMP es una caracterstica importante para Turicella otitidis.
Mycobacterium arborescens es CAMP variable.
b) Con Rodhococcus equi para identificar Listeria inanovii (+)
B.- Prueba CAMP inversa
1) Para distinguir de manera presuntiva C. perfirgens (+) de otras especies de Clostridium formadoras de esporas y
reductoras de sulfitos (-): altamente especfica para C. perfringens.
2) Para ayudar a distinguir Arcanobacterium haemolyticum (+) de Arcanobacterium pyogenes (-) y Arcanobacterium
bernardiae (-)
C.- Produccin de fosfolipasa D (PLD): Para distinguir Corynebacterium pseudotuberculosis (+) y Corynebacterium
ulcerans (+) de otras especies Corynebacterium (-).
Bioqumica:
La prueba (reaccin) CAMP se basa en el hecho de que los estreptococos del grupo B producen un factor (CAMP) que
acta de manera sinrgica con la -hemolisina de S. aureus subesp. Aureus en un medio agar con sangre ovina o
bovina. El sinergismo es una accin coordinada o correlacionada por 2 o ms microorganismos; el sinergista, factor
CAMP, es un adyuvante de la accin de otro microorganismo. (Macfaddin 33-34)
Los estreptococos producen una protena termoestable difusible (factor CAMP) que aumenta la hemlisis de S. aureus
produciendo esfingomielasa C que se une a las membranas del eritrocito por que el K+ que se extraiga (si se exponen al
factor como el grupo B) sufra hemlisis en forma de flecha.
Se produce en el grupo B 8estimula la hemlisis) y tambin a veces en los grupos C, F y G.
PRUEBA DE CATALASA
Principio: Probar la presencia de la enzima Catalasa
Objetivo: (H2O2 al 3%)
Principalmente para diferenciar entre los gneros
Streptococcus (-) de Micrococcus (+) o de Staphylococcus (V+) o de ambos.
Bacillus (+) de Clostridium (V-)
Listeria monocytogenes (+) de Khurthia (+), Corynebacterium (+) de otros microorganismos que pueden ser
similares morfologicamente: Erysipelothrix (-) de Lactobacillus (V-), espcies de Enterococcus (-) y Streptococcus
del grupo B(-)
Microorganismos grampositivos
- Aerococcus urinae(+) de Aerococcus viridans (-)
- Staphylococcus aureus subesp. Anaerobius (-); por lo general solo crece em anaerobiosis y S. saccharolytica (-) de
otras espcies de Staphylococcus (+). (Macfaddin 74)
Prueba de - LACTAMASA
Principio: Establecer la sensibilidad de microorgansimos especficos a penicilinas sensibles a penicilinasa o a
cefalosporinasa, determinada por su capacesidad de elaborar una enzima -lactamasa que hidroliza el anillo lactmico para producir cido penicilonico o cido cefalosporoico.
Objetivo: Las -lactamasas se encuentran em uma variedad de gram+ y gram-. La importancia de las enzimas
producidas por muchas bacterias entricas (Enterobacteriaceae) es menos clara y estas bacterias no deben probarse

12

para la produccin de - lactamasa; su escaso valor se debe a la diversidad de enzimas con especifidades de sustrato
diferentes que pueden producirse dentro de las especies o incluso por una sola cepa. (Macfaddin 236)
Prueba del disco de OPTOQUINA
Principio: Determinar la sensibilidad de un microorganismo a la optoquina probando la fragilidad de la membrana celular
bacteriana.
Objetivo: El disco de optoquina se utiliza de manera especfica para diferenciar entre Streptococcus pneumoniae
(sensible; S) y otras especies de Streptococcus -hemolticos (viridans) (resistente; R); Mtodo fenotpico.
Bioqumica: La optoquina es una sustancia qumica, clorhidrato de etilhidrocuprena. La etilhidrocuprena, base del disco
de optoquina es completamente insoluble en agua. Sin embargo, el clorhidrato de etilhidrocuprena es completamente
hidrosoluble. La optoquina es un derivado del alcaloide hidroquinina.
Cuando el disco est impregnado con alrededor de 0.2ml de una disolucin acuosa 1:4.000 de la sustancia qumica,
secada a 37C sirve para la diferenciacin de S. pneumoniae (las clulas se lisan debido a los cambios en la tensin
superficial y se produce una zona de inhibicin por contacto con la optoquinona) y es bacteriosttica a una
concentracin 1:500.000 a 1:100.000. Las otras especies de -Streptococcus requieren una concentracin 1:500 (o
mayor) para inhibir el crecimiento. (Macfaddin 339)
Prueba de la OXIDASA:
Principio: Determinar la presencia de las enzimas oxidasas. (Ej de Reactivo: Clorhidrato de tetrametil fenilendiamina)
Objetivo:
A.- Diseada originalmente para identificar Neisseria; posteriormente para distinguir la familia Pseudomonadaceae de la
familia Enterobacteriaceae oxidasa negativos (Slo Plesiomonas shigelloides es +).
B.- La mayora de las bacterias gram+ son oxidasa negativas.
Bioqumica: Se basa en la produccin bacteriana de una enzima oxidasa intracelular que se debe a un sistema de
citocromo oxidasa (transporte de electrones y fijacin del N) que activa la oxidacin del citocromo reducido por el
oxgeno molecular, el que a su vez acta como aceptor de electrones en la fase Terminal del sistema de transferencia
de electrones. (Macfaddin 344-345)
Prueba de OXIDACIN FERMENTACIN (HUGH Y LEIFSON) O/F
Principio: Determinar el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono o su falta de utilizacin.
Objetivo:
A.- Ayuda a la identificacin de bacterias anaerobias y aerobias facultativas.
Para diferenciar bacilos gram- entricos y no entricos, aerobios a anaerobios facultativos de la familia
Enterobacteriaceae, cuyos miembros son todos los fermentadores (F).
Ayudar a la diferenciacin de los gneros Staphylococcus y Micrococcus.
Especies de Staphylococcus: fermentadores de glucosa; excepto S. saprophyticus, fermentador dbil o no reactivo.
Espcies de micrococcus; por lo comn oxidadoras de glucosa.
Determinar movilidad y produccin de gas (CO2 y H2) debido al medio semislido.
Bioqumica: Las bacterias utilizan carbohidratos ya sea por fermentacin u oxidacin. Algunas pueden metabolizar un
hidrato de carbono (como se muestra por la produccin de cido) slo en condiciones aerobias; mientras que otras
producen cido en ambos casos. La mayora de importancia mdica son anaerobias facultativas. (Macfaddin 354-355)
Con
sello
+
-

Sin
sello
+
+
-

Identificacin
Metabolismo
Fermentativo
Oxidativo (Ej. Pseudomona)
Ni F ni O (Ej. Streptococos)

El medio de HUGH Y LEIFSON es un medio diferencial: la

glucosa lo vuelve enriquecido ya que esta se desdobla y
produce cido lctico acidificando el medio) que contiene azul
de bromotimol (en medio cido vira a amarillo).
AGAR MUELLER HINTON

Pruebas de sensibilidad a antibiticos y cultivo de Neisseria

13

En un medio muy rico en nutrientes que se recomienda para el aislamiento y desarrollo de gonococos y meningococos.
Tambin se emplea, sobre todo, en las pruebas de sensibilidad (antibiogramas)
Si se desea, pueden prepararse placas o tubos de agar chocolote, previa adiccin de sangre de carnero o humana,
preferiblemente la primera, calentando en bao Mara a 80C 10 minutos. No sobrecalentar el medio en ningn
momento.
Usos: Es un medio til para el desarrollo de bacterias del genero Neisseria. Se recomienda incubar las cajas a 35C, en
atmsfera de CO2. El medio deber mantenerse hmedo en su superficie; esto puede lograrse si dentro de la jarra,
envases de hojalata, frasco de vidrio de boca ancha, etc., se coloca una esponja o algodn hmedo y una vela
encendida, cerrando luego hermticamente.
Para realizar las pruebas de sensibilidad con sulfonamidas, las cajas deben examinarse despus de 12 a 18 horas de
incubacin. Despus de este tiempo se tendrn que revisar peridicamente las zonas de inhibicin ya que el
microorganismo puede desarrollar cuando la concentracin del agente antimicrobiano comienza a disminuir.
Se obtiene mejores resultados para aislar Neisserias patgenas preparando un agar chocolate con el Mueller Hinton
adicionndole a cada 100 ml del medio terminado y fluido 1.0 ml de la suspensin VCN, mas 1.0 ml del
polienriquecimiento. (MANUAL BIOXON 28)
BASE DE AGAR GC
La Base de Agar Gelosa Chocolate es un medio utilizado con varios suplementos para el aislamiento y cultivo de
Neisseria gonorrhoeae y otros microorganismos fastidiosos. Este medio tambin es conocido como Base de Agar GC.
Diseada especialmente para aislar Neisserias patgenas, gonococo y meningococo cuando se le agrega hemoglobina,
antimicrobianos y factores de crecimiento.
En 1945 Jhonston describi un medio adecuado para observar las colonias de Neisseria gonrrhoeae en 24 horas en
lugar de las 48 horas generalmente requeridas. El crecimiento acelerado fue debido a una reduccin en la concentracin
de agar. Investigando el crecimiento de algunas cepas de neumococcos se observ que el medio conteniendo los
factores de crecimiento glutamina y cocarboxilasa permiti una mejor recuperacin. A partir de esta observacin se
desarrollaron suplementos de enriquecimiento que junto con la hemoglobina hacen a la Base de Agar GC un medio
superior.
La Base de Agar GC es utilizada para preparar Agar Gelosa Chocolate cuando es suplementada con hemoglobina al 2%
que provee la hemina (Factor X) requerida para el crecimiento de Haemophilus y mejorar el desarrollo de Neisseria, as
como suplementos (disponibles comercialmente) que proveen glutamina, cocarboxilasa, levadura, glutamina,
coenzimas, hemina, vitaminas, aminocidos, dextrosa y otros factores de crecimiento, todos ellos necesarios para el
mejor desarrollo de Haemophilus y Neisseria.
Cuando a esta base se le adiciona adems inhibidores selectivos como el VCN o VCNT se prepara el Agar Thayer
Martn y Thayer Martn Modificado.
Tanto el polienriquecimiento como la mezcla VCN (Vancomicina, Colistin y Nistatina) son preparados liofilizadamente.
Usos: El espcimen se debe estriar en la superficie de la placa, de tal manera que una zona relativamente pequea se
inocule masivamente. A partir de esta, continuar estriando suavemente y ligera a fin de lograr colonias aisladas. Se
pueden identificar colonias de N. gonorrhoeae (blanco-grisceas opacas de 1-2mm) (BIOXON 38-39)
Composicin:
Mezcla de Peptonas 15.0
Fosfato Dipotsico 4.0
Almidn de Maz 1.0
Fosfato Monopotsico 1.0
Cloruro de Sodio 5.0
Agar Bacteriolgico 10.0
pH 7.2 0.2
La morfologa tpica colonia se describe:
Haemophilus influenzae Colonias pequeas, hmedas, perladas con caracterstico olor hmedo
Neisseria gonorrhoeae Colonias pequeas grisceas o incoloras, mucoides
Neisseria meningitidis Colonias medianas a grandes, de color azul grisceo, mucoides.

14

Streptococcus pneumoniae Colonias pequeas, planas, pueden aparecer verdes por la decoloracin del medio8

BASE DE AGAR SANGRE

Aislamiento, cultivo y actividad hemoltica de grmenes difciles
La base de Agar Sangre es adecuada para aislar y cultivar diversos microorganismos de difcil crecimiento. Al aadir
sangre es adecuada para aislar bacilos tuberculosis. De preferencia utilice sangre de cordero o de conejo.
Usos: Para el aislamiento del Mycobacterium tuberculosis, la base de agar sangre con 0.1% de glicerol, 2.5% de sangre
humana de banco de sangre y 100 unidades de penicilina por mililitro ha dado resultados comparables con los del
medio de Lowenstein-Jensen.
La base de agar Sangre tambin puede usarse para la preparacin de antgenos.(BIOXON 39)
Para el aislamiento, cultivo y deteccin de actividad hemoltica de Staphylococcus, Streptococcus y otros
microorganismos fastidiosos. Se observan colonias blancas casi grises, Grandes, convexas de consistencia butircea,
Presentan bordes regulares. Se observa que Presenta hemlisis. Las colonias en medio slido son redondeadas,
uniformes, Estos crecen rpidamente a 37 C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente (20 C).
MEDIO CTA
El medio Cistina-Tripticasena es empleado para conservar cepas, deteccin de movilidad y adicionado con
carbohidratos para estudios de fermentacin de microorganismos muy exigentes y desarrollo difcil, tanto aerobios como
anaerobios. Ideal para estudios bioqumicos de Neisserias patgenas.
Usos:
Repicado y mantenimiento de cepas: Los microorganismos exigentes y de cultivo difcil como Neisserias patgenas,
Neumococcos, Estreptococos, Brucillas, Pasteurella, Corynebacterium, Vibrios y algunos otros, se reproducen
fcilmente en el medio TCA sin que sea necesario agregarles suero o cualquier otro factor de crecimiento, ni colocar
los cultivos en atmsfera de CO2. Es preferible usar este medio para anaerobios esporulados. Las cepas repicadas
sin azcar duran bastante tiempo. La mayor parte de las veces se recomienda inocular el tercio superior de la
columna del medio.
Determinacin de la movilidad: Sembrar el medio semislido por picadura central sin llegar al fondo del tubo. Los
microorganismos mviles, crecen a lo largo de la puncin y se difunden a todo lo largo de la masa del medio
adquiriendo este un aspecto turbio. En cambio si el germen es mvil, el desarrollo slo se observa a lo largo y en el
sitio de picadura, permaneciendo el resto del medio claro y transparente.
Empleo en las reacciones de fermentacin y degradacin: Este medio carece de azcares y como es rico en
nutrientes no es necesario agregarle suero sanguneo, suprimiendo as una fuente de carbohidratos indeseables.
Los azcares pueden agregarse en polvo o impregnados en disco de papel.
El medio CTA no siempre da reacciones de fermentacin bien definidas con las enterobacterias ni con los clostridios.
Estos grmenes tienden a reducir la Cistina presente en el mismo, dando a veces reacciones de interpretacin dudosa.
(BIOXON 54)
POLIENRIQUECIMIENTO
La accin de VCN se refuerza decididamente al agregar al medio polienriquecimiento que se prepara de forma
liofilizada, por lo que su estabilidad es indefinida, sobretodo en refrigeracin.
Se reconstruye agregando el contenido (10ml) de un vial de lquido diluyente a un vial de producto liofilizado. Agitar en
seguida unos cuantos minutos hasta que el material slido se disuelva.
Agregar 1.0ml en la solucin de polienriquecimiento a 100ml de medio de cultivo, slido o lquido, que se desee
enriquecer. Si se trata de un medio slido, por ejemplo Agar chocolate , base de agar Casman, este deber an estar
fluido a una temperatura entre 45 y 50C.
En general se utiliza para enriquecer con sus 12 factores y cofactores de desarrollo, a determinados medios de cultivo
especialmente a aquellos diseados para aislar y multiplicar grmenes exigentes y delicados. Es indispensable para
aislamiento de gonococos y meningococos.(BIOXON 71)
Frmula aproximada en g/L
8

http://www.mcd.com.mx/pdfs/BASE%20DE%20AGAR%20GC.pdf

15

Vitamina B-120.010
L-Glutamina...10.00
Adenina..1.000
Clorhidrato de Guanina0.030
cido p-aminobenzico0.013
L-Cstina.1.100
Glucosa..100.0
Nucletido de difosforitridina..
Oxidasa (Coenzima 1) 0.250
Cocarboxilasa0.100
Nitrato frrico.0.020
Clorhidrato de tiamina..0.003
Clorhidrato de cistena.25.90
BASE DE AGAR CASMAN
Medio de enriquecimiento para el cultivo de Neisseria Gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Haemophilus vaginalis y
estreptococos patgenos; Microorganismos exigentes.
Casman describi un medio enriquecido con sangre para microorganismos exigentes incubados en un ambiente
anaerobio. Casman ajust el medio despus de que varios experimentos revelaran que la nicotinamida interrumpa la
accin de una enzima sanguinea que inactivaba el factor V (NAD). Con posterioridad, la concentracin de nicotinamida
se rebaj para favorecer el crecimiento de Neisseria.
La proteosa peptona n 3, triptona y extracto de carne proporcionan nitrgeno, vitaminas y aminocidos. La nicotinamida
favorece el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae y Haemophilus influenzae impidiendo la liberacin de la coenzima
(factor V) por medio de nucleotidasas procendentes del enriquecimiento con sangre. La dextrosa se aade para
favorecer el crecimiento de cocos patgenos. El Cloruro sdico mantiene el balance osmtico en el medio. El almidn
tiene como funcin asegurar que cualquier metabolito txico producido sea absorbido, neutralizar la inhibicin de betahemlisis por la glucosa y favorecer el crecimientode Neisseria. El agar bacteriolgico es el agente gelificante.
Por su alto contenido en peptonas y otros factores nutritivos, da excelentes resultados para cultivar microorganismos
exigentes; siendo especialmente empleado para aislar Haemophilus vaginalis del tracto urogenital.
El medio base de agar casman funciona perfectamente tanto como GS y GC. Los resultados mejoran notablemente si
se incuban en atmsfera de CO2 (tcnica de la vela). El almidn de maz y el uso de agar muy purificado incrementa
notablemente el crecimiento de N. gonorrhoeae.
La morfologa colonial tpica se describe as:
Neisseria Gonorrhoeae: Crecimiento satisfactorio.
Haemophilus influenzae: Crecimiento satisfactorio.
Streptococcus pneumoniae: Crecimiento con alfa hemlisis.
Streptococcus pyogenes: Crecimiento con beta hemlisis.9
Perxido de hidrgeno al 3%
Uso de la sustancia o preparado: Para usos de laboratorio, anlisis, investigacin y qumica fina.
Propiedades fsicas y qumicas
Aspecto: Lquido transparente e incoloro.
Olor: Caracterstico.
Discos de penicilina
La actividad delos discos de la penicilina primaria incluye no productores de -lactamasa, grampositivos y algunos
bacterias gramnegativas fastidiosas, y. Las acilamina penicilinas (ampicilina y amoxicilina) tienen actividad especfica
contra ms especies de gramnegativos, incluyendo miembros de la familia Enterobacteriaceae no productoras de Lactamasa. Carboxi- penicilinas (carbenicilina y ticarcilina) y ureido-penicilinas (mezlocilina y piperacilina) tienen un
amplio y considerable espectro contra gramnegativos, incluyendo actividad contra Pseudomonas spp.y Burkholderia
spp. Penicilinas penicilinasa resistentes (cloxacilina, dicloxacilina, meticilina, nafcilina y oxacilina) que tienen un
espectro
predominantemente grampositivo, incluyendo Staphylococcus spp. productor de penicilinasas.El mtodo de difusin
con un disco de penicilina no es un mtodo fiable para la deteccin de la resistencia a dicho antibitico, debido a la
ausencia de correlacin entre los halos de inhibicin del disco de penicilina y la CMI correspondiente. As, las cepas
9

http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_casman.pdf

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con resistencia intermedia o de bajo nivel a la penicilina (CIM entre 0,12 g/ml y 1 g/ml) pueden presentar halos de
inhibicin con el disco de penicilina relativamente grandes.
Reactivo para oxidasa (Clorhidrato de tetrametil fenilendiamina)
El reactivo de la oxidasa ms recomendado es la solucin acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-pfenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos txico y mucho ms sensible que el correspondiente compuesto
dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es ms caro. Este reactivo tie las colonias oxidasa positivas de color
lavanda que vira gradualmente a prpura-negruzco intenso.
Sacarosa
Sacarosa est regulada principalmente en tres pasos, los catalizados por la fructosa-1,6-bisfosfatasa, sacarosa-6fosfato sintasa y sacarosa fosfato fosfatasa. Cuando la luz incide por primera vez sobre la hoja por la maana,
aumentan los niveles de triosa fosfato en el citosol (provenientes de la fijacin de carbono en el cloroplasto). Las
triosas fosfato inhiben la actividad de la fosfofructoquinasa-2 disminuyendo los niveles de fructosa-2,6-bisfosfato.
Esto libera la inhibicin de la fructosa-1,6-bisfosfatasa, lo que permite la sntesis de fructosa-6-fosfato y as de otras
hexosas fosfato, incluida la glucosa-6-fosfato. La glucosa-6-fosfato es un activador alostrico de la sacarosa-6-fosfato
sintasa. La sacarosa fosfato fosfatasa cataliza el paso final en la sntesis de sacarosa a medida que dispone de
sustrato.10
MATERIAL
40 cajas petri estriles
2 mecheros fisher
1 pizeta
1 agitador magntico
30 tubos de tapa de rosca chicos
2 gradillas
4 matraces Erlenmeyer 1L
1 esptula
4 asa y portasa
1 probeta 500ml
Papel craft
Papel encerado
2 pipetas estriles 5 y 10ml
Gasa
Algodn

REACTIVOS
Base de agar Casman
Perxido de hidrgeno al 3%
Discos de penicilina
Discos de optoquina
Reactivo para oxidasa (Clorhidrato de tetrametil fenilendiamina)
Medio de Hugh y Leifson
Agar Mueller Hinton
Base de agar Sangre
Base de agar GC
Polienriquecimiento liofilizado y su diluyente
Sorbitol 70%
sacarosa
EQUIPO
Autoclave
Refrigerador
Parrilla
Balanza semianaltica
10

Microbiologa de Prescott, L.M y Harley, J.P y Klein, D.A, Mac Graw Hill, Madrid Espaa 4 edicin (2001) p.p
39, 198-201)

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Estufa
Microscopio
MATERIAL BIOLGICO
S. agalactiae
S. pyogenes
Sangre de carnero desfibrinada
PROCEDIMIENTO
Primera sesin
1. Se procede a preparar los medios que se van a utilizar para la identificacin de posibles microorganismos.
Como son:
Base de Agar Sangre
Preparacin:
Suspender 40 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Remojar entre 5 y 10 minutos. Hervir durante un
minuto. Los matraces pueden taparse y colocarse directamente en autoclave. Esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Despus de esto enfriar a 4 50C y aadir de 5 a 10% de sangre desfibrinada estril, homogenizar y vaciar en cajas de
petri estriles. No es recomendable emplear sangre humana. De preferencia utilice sangre de cordero o de conejo.

Tambin es posible inocular el fondo de una caja petri estril con un pequeo inculo, y vaciar posteriormente el medio
fundido a unos 50C; la caja se hace girar suavemente para homogenizar la muestra.
En algunos laboratorios se emplea el medio de cultivo preparado en tubos con tapn de rosca que se pueden inocular y
posteriormente vaciar en cajas de petri estriles

Base de agar chocolate

Suspender 7.2 g del medio en 100 mL de agua purificada para obtener una base de doble concentracin, mezclar y
dejar reposar durante 5 minutos, calentar con agitacin frecuente hasta completar la disolucin del polvo y hervir
durante un minuto. Por otro lado, preparar 100 mL de una solucin de hemoglobina al 2% adicionando gradualmente
agua a 2 g de hemoglobina seca para obtener una solucin uniforme.
Esterilizar ambas soluciones en autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfriar las soluciones a una temperatura de 4550 C, mezclar y agregar los dems ingredientes dependiendo del medio que se desee preparar. Homogenizar y vaciar
en placas Petri estriles.
Procedimiento:
1. Procesar las muestras y sembrar las placas inicialmente en forma de Z y posteriormente estriando.
2. Incubar en atmsfera aerbica enriquecida con CO2 a 35 2C por 18 a 24 y hasta 48 horas y observar el
crecimiento.
Agar Mueller Hinton
Preparacin:
Suspender 38 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Remojar de 10 a 15 minutos. Mezclar bien
agitando frecuentemente. Hervir durante un minuto, y esterilizar a 121C por un tiempo no mayor de 15 minutos.

Enfriar a 40-45C y vaciar en cajas de petri. Si se desea, pueden prepararse placas o tubos de agar chocolote, previa
adiccin de sangre de carnero o humana, preferiblemente la primera, calentando en bao maria a 80C 10 minutos. No
sobrecalentar el medio en ningun momento.
Segunda sesin
2. Se siembra los medios de GS y GC inoculando por estra cruzada las cepas de S. pyogenes y S. agalactiae
3. En el medio de CASMAN se hace la prueba de CAMP haciendo una estra de S. aureus vertical e inocular
perpendicular S. pyogenes y S. agalactiae.
4. En el medio de Muller-Hinton se realiza la prueba de sensibilidad de Optoquina despus de la estra masiva de la
bacteria.
5. Incubacin de las placas a 35C, durante 24 a 48 hrs.
Tercera sesin:

18

6. Observacin de las caractersticas macroscpicas en cada medio sembrado

7. Realizacin de frotis al Gram de colonias. Observacin a inmesrsin
8. Medir el halo de inhibin (si se present) con un regla y determinar posible tratamiento.
9. Realizacin y lectura de la prueba de coagulasa, oxidasa y catalasa.
10. Identificacin de microorganismo a partir de los resultados obtenidos.
RESULTADOS
MEDIO DE CULTIVO
Y/O BACTERIA
O/F
Streptococcus
agalactiae

MUELLER- HINTON
(2 discos de penicilina
Y
2 discos de optoquina)

CARACTERSTICAS

IMAGEN

Con sello: negativo

Sin sello: negativo
Por lo tanto: Ni oxidativo
ni fermentativo
Observaciones:
Se observ crecimiento
turbio en ambos tubos
por lo que se deduce
que es anaerobio facultativo

No hubo
crecimiento en el medio

Streptococcus
agalactiae

MUELLER- HINTON
(1 disco de penicilina
Y
1 disco de optoquina)
Streptococcus
pyogenes

Prueba de CAMP
Streptococcus
agalactiae
Y
Streptococcus
pyogenes

Slo hubo crecimiento

en la optoquina
Por lo tanto es:
resistente a la optoquina
Y sensible a la penicilina
Halo de inhibicin: 1cm.

Formacin de hemlisis en forma

De flecha para: S. agalactiae
Hemlisis para: S. pyogenes

(en medio S. aureus

ATCC 25923)

GELOSA SANGRE
(Por picadura)
Streptococcus
pyogenes

Hemlisis
Colonias pequeas, en puntillos
Entre blancas y grises

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GELOSA SANGRE
Streptococcus
agalactiae

GELOSA CHOCOLATE
Streptococcus
pyogenes

GELOSA CHOCOLATE
Streptococcus
agalactiae

Hemlisis
Colonias muy pequeas
Entre blancas y transparentes

Hemlisis
Colonias muy pequeas
redondeadas y uniformes
transparentes

Hemlisis
Colonias muy grandes, convexas
y abundantes; de consistencia
butircea, con bordes regulares,
cremosas y blancasgrisceas

DISCUSIN DE RESULTADOS
La primer prueba que se realiz fue en el medio O/F con S. agalactie en el cul la prueba nos dio que su
metabolismo no es ni oxidativo ni fermentativo ya que esta es una caracterstica de este gnero en este medio.
Tambin se logr comprobar la forma de respiracin de aporte de oxgeno de esta bacteria que es anaerobia
facultativa ya que hubo crecimiento en ambos tubos.
La segunda prueba que se realiz fue en el medio Mueller Hinton ( con 2 discos de penicilina y 2 discos de
optoquina) con Streptococcus agalactiae en el cul no hubo crecimiento; para la penicilina este gnero es sensible
debido a que no tiene la enzima -lactamasa; sin embargo debi de haber dado crecimiento para la optoquina ya que
es resistente a este antibitico, por lo cual se deduce que no se realiz adecuadamente la siembra del
microorganismo en el medio.
La tercer prueba se realiz tambin en el medio Mueller Hinton ( con 1 disco de penicilina y 1 disco de optoquina) con
Streptococcus pyogenes en el cul no hubo crecimiento a un halo de 1cm de halo del disco de penicilina debido a
que es sensible a este antibitico debido a que no tiene la capacidad de elaborar la enzima -lactamasa que hidroliza
el anillo -lactmico para producir cido penicilonico, razn por la cul la bacteria es inhibida; sin embargo si hubo
crecimiento en la prueba del disco de optoquina demostrando as su resistencia a esta sustancia qumica ya que el
nico streptococo que da positivo es Streptococcus pneumoniae.
En la prueba de CAMP se observ que dio positivo para S. agalactiae dando una hemlisis en forma de flecha (ya
que tiene la capacidad de producir y elaborar el factor CAMP que acta de manera sinrgica con la -hemolisina
estafiloccica ( -lisina o esfingomielinasa C de S. aureus ATCC 25923) sobre eritrocitos para producir un fenmeno
ltico en la unin de los 2 microorganismos que se observa con la flecha amarilla que se produce; esta es una
reaccin comn de los streptococos del grupo B, con lo que se puede deducir que si se trata de este microorganismo
ya que por ejemplo para S. pyogenes nos dio la prueba negativa ya que no produce el factor de CAMP que es una
protena termoestable difusible que aumenta la hemlisis de S. aureus.
En la siembra de GS por picadura de S. pyogenes se puede observar la actividad hemoltica ms clara de este
microorganismo ya que se observ una hemlisis caracterstica de este grupo ya que normalmente posee los 3
tipos de hemlisis.
Para S. agalactiae se observ una hemlisis tambin la cual siempre es su patrn hemoltico.

20

 En GC para S. pyogenes, se observ crecimiento y hemlisis ; hubo crecimiento de las colonias; para S. agalactiae
tambin se observ crecimiento pero ms abundante y con hemlisis ; en este medio al agregar el
polienriquecimiento se asegur el crecimiento de los microorganismos ya que este contiene 12 factores y cofactores
de desarrollo que sirven para aislar y multiplicar microorganismos exigentes como es el caso de estos 2
microorganismos.
CONCLUSIONES
En esta practica se realizaron diferentes prueba para poder identificarlos al genero Streptococcus. Pruebas como fueron
la de CAMP, de Optoquina y hemlisis por picadura.
En la prueba de CAMP se coloco una estra de S. aureus vertical, inoculando perpendicularmente a S. agalactiae y S.
pyogenes, dando positivo (formacin de una hemlisis en forma de flecha) S. agalactiae esto demuestra la produccin
de la protena termoestable (factor K) que aumento la hemlisis de S.aureus que produce la esfingomilasa que ayuda a
la estreptolisina que ayuda a la estreptolisina a que sea di fusible a travs del medio.
En la prueba de Optoquina que se utiliza para poder descartar la presencia de S. pneumoniae y demostrar la presencia
de los grupo A y B, ya que ambos grupos son resistentes a este. Sin embargo al hacer esta prueba tambin se utilizo
Penicilina donde se demostr sensibilidad (de un halo de 1 cm) en S. pyogenes, lo que no ocurri con S. agalactiae.
Se realizo tambin la hemlisis por picadura en esta prueba se inocularon S. pyogenes y S. agalactiae donde
efectivamente se formaron hemlisis en las picaduras realizadas al medio. Donde S. pyogenes realiza su actividad
hemoltica caracterstica de ella ya que normalmente posee los 3 tipos de hemlisis ( , y ). Y en S. agalactiae la
hemlisis presentada es su patrn hemoltico.
En las caractersticas culturales del desarrollo de las bacterias se observa que en S. agalactiae se efectu una hemlisis
dada por que se expresa una estreptolisina y crecimiento abundante. En S. pyogenes se observo un crecimiento muy
abundante y hemlisis en agar GS y en GC se produjo una hemlisis lo cual se da por que no tiene estreptolisina
O,S, degradando el potasio que se encuentra dentro de los eritrocitos.
Demostrando con esto las diferencias para identificarlos entre S. pyogenes y S. agalactiae que cada uno tiene. Aunque
se relacionan mucho existen este tipo de pruebas las cuales nos ayudan mucho en la diferenciacin y no son las nicas
existen muchas mas.
REFERENCIAS
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap305.htm
http://209.85.173.104/search?
q=cache:sp3LvVkZIIMJ:www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/archivos/microbiologia.doc+gelosa+sangr
e&hl=es&ct=clnk&cd=11&gl=mx
Mac Faddin J. F. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica. ED Panamericana
3ra edicin 2003, Buenos Ares Argentina. Pp. 33, 34, 74, 236, 339, 344, 345, 354 y 355
Manual BIOXON pp. 28, 38, 39, 54 y 71
http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_casman.pdf
http://www.mcd.com.mx/pdfs/BASE%20DE%20AGAR%20GC.pdf
Microbiologa Mdica. Quinta Edicin. Murray, Rosenthal, Pfaller. Pag:238-242.
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/agalac.htm
http://s-pneumoniae.blogspot.com/
Brock, Biologa de los Microorganismos. Sptima edicin. Madigan, et al. ED. Pearson educacin. Madrid, Espaa.
P.p. 160-163
Microbiologia. Cuarta edicin. Prescott, L.M et al. ED. Mac Graw Hill. Madrid, Espaa. P.p 39, 198-201.

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