UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE

APURÍMAC
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL INGENIERÍA
DE MINAS

TEMA : METODOLOGÍA CROMATOGRÁFICA

DOCENTE: Percy Leonidas CORTEZ MIRANDA

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL INGENIERÍA DE MINAS
INTEGRANTES:
 Nehemías A. ALLCCA OSCCO cod:191124
 Nieves María COAQUIRA ROSALES cód.: 191144
 Mileydi MAMANI PANIURA cód.: 192147
 Nicolas LLICAHUA CASTAÑEDA cód.: 182151
 Milder LIMA GUILLERMO cód.: 191160
 Jefferson A. ZUÑIGA PALOMINO cód.: 151094
La cromatografía es un método físico de separación en el cual los componentes a
separar se distribuyen en dos fases; una estacionaria y una móvil. La clave de la
separación en cromatografía es la velocidad con la que se mueve cada sustancia
dependiente de su afinidad relativa por ambas fases. Los componentes que
presentan mayor afinidad por la fase estacionaria van a interaccionar por más
tiempo con la misma por lo cual se retienen con mayor facilidad, por otro lado,
aquellos que tengan mayor afinidad por la fase móvil van a retener menos, esto se
debe a la polaridad de cada molécula entendiéndose esta como una característica
de cada enlace y se debe a la diferencia de electronegatividad entre los átomos
enlazados
Clasificación

En función de la disposición de agregación de la fase móvil se

habla de la cromatografía líquida clásica, que se utiliza como
fase estacionario un líquido absorbido por un sólido.
(cromatografía líquido – líquido), es en lo que pueden ocurrir
los mecanismos de reparto y filtración sobre un gel o un sólido.
(cromatografía líquido – sólido), en la que ocurren los
fenómenos de adsorción o intercambio de iones.
(cromatografía gas - líquido), que emplea como fase
estacionaria un líquido que no es volátil que recubre en el
interior de una columna (reparto).
(cromatografía gas - sólido), es utilizada como fase estacionaria
de partículas sólidas sobre un soluto que puede absorberse.
 Mecanismos de separación cromatográfica.
1 Cromatografía de absorción.
La fuerza con la que los absorbentes retienen a los componentes de la muestra son
de Vander Walls de interacciones dipolo-dipolo. Mientras mayor sea la superficie
especificada de un sólido, mayor será su poder de absorción.

2 Cromatografía de reparto o partición.

Un ejemplo si se separan
. 2 solutos de diferentes polaridades empleando como fase
estacionaria el agua y como fase móvil el éter de petróleo, aquel soluto que tenga
menos polar viajará en la fase estacionaria a mayor velocidad que será fácilmente
arrastrado por la fase móvil en tanto el otro soluto se moverá más lentamente por su
polaridad en la fase estacionaria.
3 Cromatografía intercambio de iones.

Las resinas intercambiadoras pueden ser catiónicas o aniónicas, que dependen de su carga y de los solutos que intercambian.

Las resinas catiónicas poseen cargas negativamente y se emplean para separar iones de carga positiva que son atraídos por la resina y se
intercambian con los contraiones lábiles. Las resinas aniónicas están cargadas positivamente y se emplean para separar iones de carga
negativa que se intercambian de igual forma con los contraiones lábiles.

a) Equilibrar la resina
b) Aplicación de la muestra
c) Separación de los componentes
d) Regeneración de la resina

4 Cromatografía de filtración sobre gel.

consiste en la separación de una solución de la muestra se hace pasar a través del gel que posee un tamaño de un poro determinado. Las moléculas de alto
peso molecular con tamaño superior al de los poros de las partículas del gel no pueden penetrar y se mueven libremente con el disolvente exterior de los
gránulos, entre los espacios inteparticular a una velocidad de elución y salen antes de la columna, mientras que las de tamaño inferior se introducen a los poros
de las partículas de gel, por lo que necesitan más tiempo para salir al final de la columna se retrasa.
 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Este tipo de cromatografía se realiza en tubos largos y estrechos
dentro de los cuales está contenida la fase estacionaria.
ETAPAS DE TRABAJO DE LA CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN COLUMNA

CONVENCIONAL.
Las etapas generales de este proceso son: selección y preparación de la fase móvil y la fase
estacionaria

SELECCIÓN Y PREPARACION DE LA FASE MOVIL Y

LA FASE ESTACINARIA.
Esta dependerá de la estructura y las características de los compuestos a separar, lo que
condiciona el mecanismo de separación que tendrá lugar en la columna cromatografica.
APLICACIÓN DE LA MUESTRA.
La aplicación de la muestra en la columna cromatografica tiene
también importancia sobre la calidad del resultado final.

CORRIDA CROMATOGRAFICA Y ELUCION DE LOS

COMPONENTES.
Consiste en hacer pasar la fase móvil a través de la columna cromatografica. Existen diferentes
modos de eluir los componentes de la mezcla, ellos son:
• Elución isocratica.
• Elución por etapas.
• Elución con gradiente o gradiente de elución.
RECOGIDA DE LOS ELUATOS Y DETECCION DE LOS
COMPONENTES.
En la cromatografía en columnas convencional más ortodoxa los componentes separados se
recogen disueltos en la fase móvil a la salida de la columna cromatografica.
IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DE LOS
COMPUESTOS SEPARADOS.
En la actualidad las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de la cromatografía en columna clásica o
convencional son muy limitadas

EFICIENCIA DE UNA COLUMAN CROMATOGRAFICA

La eficiencia de una columna cromatografica está dada por su capacidad para lograr la separación de
dos o más solutos en un tiempo relativamente corto
 CROMATOGRAFIA GASEOSA
La cromatografía gaseosa es una técnica empleada para separar físicamente
sustancias presentes en mezclas complejas de compuestos fácilmente
volatilizables. La muestra se volatiliza en el inyector y luego se introduce en la
columna capilar dentro del horno. La columna contiene recubrimientos en la
pared que cumple la función de la fase estacionaria.
 COLUMNAS
COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS EMPACADAS:

Se construye con un tubo de acero

inoxidable, níquel o vidrio .
Se rellenan de un material adsorbente adecuado a
las sustancias que se quiere separar,
Este relleno puede ser un relleno finamente
dividido

Se utiliza comúnmente tierra de diatomáceas que

se trituraban
Y calcinaban obteniendo de partículas optimas si
un tamaño
COLUMNAS CROMATOGRFICA CAPILARES
La columna se encuentra acoplada a la salida de la cámara de vaporización
por un extremo y por el otro a la entrada del cuerpo del detector. El
acoplamiento de la columna depende del tipo de ésta y del fabricante del
equipo.
 CROMATOGRAFIA DE CAPA DELGADA

¿Qué es la cromatografía de capa delgada?

La cromatografía de capa delgada o también conocido como capa fina es una técnica analítica
rápida y sencilla, muy utilizada en el laboratorio de la química orgánica.
Que Consiste en la separación de los componentes de una muestra, a través de una capa delgada.

Esta técnica permite determinar.

 El grado de pureza

 Comparar muestras

 Separación en corto tiempo

 Fácil comprensión y ejecución

 Etapas de aplicación

A. Elección del absorbente

Los absorbentes o fase estacionaria los más
utilizados son el gel de sílice (SiO2) y la alunita
(Al2O3) que ambos son de carácter polar.
El gel de sílice es altamente poroso y uno de los
absorbentes más utilizados en cromatografía de
capa delgada luego la alunita que es otro de los
absorbentes que también se utiliza bastante Figura: Interacciones intermoleculares
debido que se presenta de carácter alcano. entre soluto y adsorbente.
 B.-Elección de la fase móvil

• hay muchos tipos de solventes

La elección de la fase móvil
-benceno
(denominada también eluyente o
solvente) depende del tipo de -éterdietílico

sustancias que se desean separar. -cicloexano

cuando una fase móvil pura no -Acetato de etilo

separa bien los componentes de una -etanol
mezcla, se utilizan mezclas de
-Acido acético
solventes de diferentes polaridades.
 Preparación de las placas cromatografícas

Limpiar las placas con disolución de

mezcla crónica, o con disolución

jabonosa esto a fin de eliminar

residuos grasos de la superficie luego

enjuagar minuciosamente con agua

destilada y secar.

Figura: Placas de vidrio y de aluminio, con gel de

sílice como adsorbente, para cromatografía en
capa fina.
 Aplicación de la muestra

 la muestra o muestras a cromatificar se aplican a 1.5

cm de uno de los bordes de la placa, conjuntamente
con soluciones de patrones conocidos con vista su
posterior identificación

 Se introduce a un frasco generalmente

cerrado
 Se llena de eluyentes por de bajo de
las líneas
 Se tiene paciencia hasta que los
resultados salgan
 desarrollo de cromatografia.

consiste en hacer pasar la fase móvil

(solvente de corrida) a través de la fase
estacionaria
La profundidad del solvente no debe ser
superior a 1 cm de manera que nunca los
puntos de aplicación se sumerjan en la fase
móvil para evitar su disolución en ella.
Una vez colocado la placa dentro de la
cámara cromatografía, el solvente asciende
por capilaridad arrastrando los solutos que
comenzaran a separarse en función de las
diferencias de afinidad de la fase móvil y la
fase estacionaria.
Figura: desarrollo ascendente
 Revelado de las placas.

la detección de los compuestos separados se

realiza mediante físicos o químicos que
permitan visualizar la posición de los mismos
en la superficie de la capa. Los componentes
separados aparecen inmovilizados en la
placa como manchas.
La identificación se realiza de modo
sencillo comparando las distancias de
recorrido.
El factor de retención(Fr) es igual a la
distancia del compuesto (Dc) entre la
distancia del eluyente(De)
Ejemplo previo del factor de retención
 6 Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)

Es una de las técnicas de cromatografía más utilizadas

debido a su capacidad de separar analitos en general
los compuestos no volátiles (alto peso molecular, iones
metálicos) o termolábiles, hace determinaciones
cuantitativas exactas y es de gran sensibilidad. Su
aplicación industrial abarca la farmacéutica, la
bioquímica, los alimentos, los productos de la industria
química, la medicina clínica y la química forense.
 Principios de la cromatografía liquida de alto rendimiento.
 

Básicamente, en este método participan la fase móvil y

estacionaría (inmiscibles entre sí) y la muestra de interés.
La fase móvil es líquida y su función es llevar la muestra a
través de la fase estacionaría, que puede ser sólida o una película
líquida soportada en un sólido inerte. Las distintas fuerzas
químicas y físicas que actúan entre la mezcla a analizar y las dos
fases determinan la retención y separación de cada uno de los
componentes de la mezcla.
un cromatógrafo líquido de alto rendimiento opera generalmente con cinco instrumentos,
reservorio (fase móvil), bomba, inyector, horno (columna), detector y registrador.
  
Métodos
“Teniendo claras las nociones básicas del funcionamiento y
principios de la cromatografía líquida de alto rendimiento se
pueden revisar aquellos criterios indispensables para realizar
la separación de una mezcla de analitos” (Suarez, 2018).
• Evaluar la composición de la muestra.
• Pretratamiento de la muestra.
• Selección del modo de operación y el tipo de HPLC.
• Selección del detector.
Además los detectores se clasifican en:
Detectores de propiedades intensivas.
Detectores específicos.
Detectores de modificación de la fase móvil.
 cromatografía en papel

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios

para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no
requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un
extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el
disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender
por capilaridad. La separación se realiza en función de la afinidad de los
solutos con las dos fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del
punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más
solubles en el disolvente llegarán más lejos. Las sustancias separadas se
identifican mediante diversos procedimientos físicos o químicos
La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánico cualitativo, permite llevar a
cabo la separación e identificación de iones, trabajando con cantidades mínimas de sustancia. Pertenece al
tipo de “Cromatografía de partición” se fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener
diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la
superficie del papel “fase estacionaria” generalmente en agua, la fase móvil constituida generalmente por
una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de cromatografía, la ascendente
(papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separación de zonas y sectores
GRACIAS