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Este documento presenta preguntas y respuestas sobre cromatografía. 1) Los pigmentos pertenecen al grupo de los carotenoides y xantofilas. 2) Estos compuestos son coloridos debido a que los carotenoides son responsables de los colores amarillos, anaranjados y rojos en plantas, y las xantofilas contienen oxígeno y proporcionan tonos amarillentos a las hojas secas. 3) La cromatografía de partición separa compuestos basándose en su solubilidad diferencial en dos
Este documento presenta preguntas y respuestas sobre cromatografía. 1) Los pigmentos pertenecen al grupo de los carotenoides y xantofilas. 2) Estos compuestos son coloridos debido a que los carotenoides son responsables de los colores amarillos, anaranjados y rojos en plantas, y las xantofilas contienen oxígeno y proporcionan tonos amarillentos a las hojas secas. 3) La cromatografía de partición separa compuestos basándose en su solubilidad diferencial en dos
Este documento presenta preguntas y respuestas sobre cromatografía. 1) Los pigmentos pertenecen al grupo de los carotenoides y xantofilas. 2) Estos compuestos son coloridos debido a que los carotenoides son responsables de los colores amarillos, anaranjados y rojos en plantas, y las xantofilas contienen oxígeno y proporcionan tonos amarillentos a las hojas secas. 3) La cromatografía de partición separa compuestos basándose en su solubilidad diferencial en dos
1. A qu grupo de compuestos pertenecen los pigmentos?
R= Carotenoides y xantofilas. 2. A qu se debe que estos compuestos sean coloridos? R= Carotenoides: son los responsables de la gran mayora de los colores amarillos, anaranjados y rojos presentes en los alimentos vegetales. Entre mayor sea la intensidad del color, mayor ser el contenido de carotenoides. Xantofilas: son compuestos qumicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o ms tomos de oxgeno en su estructura. Se encuentran de forma natural en muchas plantas y presentan tambin accin fotosinttica. Estos pigmentos, ms resistentes a la oxidacin que las clorofilas, proporcionan sus tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas. 3. Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin. R= Cromatografa de particin: La mayora de las sustancias tendrn distinta solubilidad en diferentes solventes. Si una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre s, se distribuir entre los dos solventes en relacin a su solubilidad en cada uno. Se llama efecto de particin a la distribucin de un soluto entre dos o ms solventes que no se mezclan. El solvente o el lquido que es atrapado por el medio del sostn sea este papel, gel, slice o almina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelador se le llama fase mvil. Cromatografa de adsorcin: La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de cromatografa de lquidos. La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la superficie de un slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de una sustancia a la superficie de otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografa son el carbn mineral, el gel de slice, y la almina. 4. Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin con la cromatografa en columna? R= Cromatografa en columna: Las separaciones en la cromatografa en columna pueden realizarse por reparto, adsorcin o intercambio inico. El estado fsico del adsorbente ha de ser de tal manera que permita el empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a travs de ella. Cromatografa en capa fina: Cromatografa en papel y electro cromatografa. En todos los casos se emplea una capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre una superficie de vidrio, plstico o metlica. La fase mvil se mueve a travs de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la actualidad la cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es ms rpida, tiene mejor resolucin y es ms sensible que su alternativa en papel. 5. Explique la diferencia que existe entre el adsorbente utilizado en cromatografa en capa delgada y el de columna. Hacer una lista en orden creciente de actividad. R= En columna: Puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los ms generales la celulosa, gel de slice, almina oxido de magnesio, oxido de clcico y carbn activo (para separaciones por adsorcin y de intercambio inico). Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin (cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente. Capa delgada: Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) xido de Aluminio o Almina (cida, neutra o bsica) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) Poliamidas Estos adsorbentes deben tener las siguientes caractersticas: Tamao de partcula pequeo Dimetro de poro grande rea superficial grande Homogeneidad Alta pureza
6. Hacer una lista de los eluyentes usados comnmente en cromatografa en columna y capa delgada en orden creciente de polaridad. Hexano ter de petrleo Benceno Tolueno ter etlico Cloroformo Acetato de etilo Cloruro de metilo Dicloroetano Acetona Etanol Metanol
7. Lista de la capacidad de adsorcin de los grps. funcionales de los compuestos orgnicos. R= 7.1. Qu compuesto es ms retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en una capa cromatogrfica? R= Un alqueno, por su polaridad. 8. Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca? R= Se le aplica calor para as poder romperlo cuidando que quede un orificio no muy grande. 9. Por qu es necesario que la cmara de elusin est saturada con los vapores del eluyente? R= Por que as ser ms fcil el arrastre de los pigmentos y no se secar la placa. 10. Explique cada uno de los siguientes trminos: Eluyente: solvente que se usa en tcnicas de cromatografa para extraer un compuesto que se quiere separar de otra fase. Eluato: la sustancia que se separa o sale de la columna despus de cada extraccin. Elucin fraccionada: Aparato de elucin fraccionada electrofortico tiene una columna con una rotacin conjunta de sello en el que un delgado chorro de elucin bfer es dirigido a travs de la luz de la columna electrofortica en una direccin perpendicular a la de migracin electrofortica. El contenido de la columna se gira en relacin con el jet estacionario o se gira el jet con respecto a la columna. El sistema puede emplear electroforesis en solucin libre o en columnas empaquetadas. Adsorcin: Es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o retenidos en la superficie de otra sustancia o material. Particin: La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil. Elucin: se produce por el flujo de una fase mvil a travs de la fase estacionaria. Adsorbente: es un slido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie un componente presente en corrientes lquidas o gaseosas. Se caracteriza por una alta superficie especfica y por su inercia qumica frente al medio en el que se va a utilizar. Actividad del adsorbente: El nivel de actividad de la adsorcin depende de la concentracin de la sustancia en la solucin, la temperatura y la polaridad de la sustancia. Afinidad por el adsorbente: es que la sustancia ceda a la capacidad de capilaridad del adsorbente y eluya a travs de l.
11. Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?
Naturaleza de fase estacionaria Clasificacin Naturaleza de fase mvil Lquido Lquido-lquido: particin Lquido-slido: adsorcin, cambio inico, exclusin, afinidad. Gas Gas-lquido (CGL) Gas-slido (CGS)
12. Cul es la funcin de la fase mvil y como se lleva a cabo la separacin en la cromatografa de adsorcin? R= Su funcin es eluir los componentes de la mezcla a separar a travs de la fase estacionaria. La cromatografa de adsorcin se lleva a cabo mediante el uso de una fase estacionaria donde se observar la elucin de los componentes de la mezcla, los cuales sern eluidos por el disolvente, que es la fase mvil. 13. Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?, por lo menos dos mtodos. R= Se machaca con ayuda de un mortero y pistilo hasta hacer polvo la slica, luego se aade el disolvente. Tambin se puede hacer en un vaso de precipitados y con una varilla de vidrio, agitando constantemente hasta formar la papilla. 14. Cundo es conveniente activar una placa y cmo se activa? R= Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua que acta como una impureza y evita una buena separacin. La magnitud de calor depende del tipo de separacin que se requiere para compuestos hidrfilos o polares, el secado al aire o con un secador de pelo son generalmente suficiente; para los compuestos hidrofbicos o no polares es necesario un calentamiento ms intenso. Las placas de xido de aluminio y de gel de slice con adhesivo requieren ser secadas al aire durante aproximadamente 30 min. Y despus ser activadas en un horno a 100C alrededor de 30 min. Las placas de celulosa debern secarse al aire libre durante 30 min. y activarse al horno durante 10 min. a 105C. 15. Qu espesor debe tener la fase estacionaria en una C.C.D.? R= No debe ser espesa ni muy aguada, debe deslizarse solo por la placa al momento de prepararla. 16. Al comparar los R F de dos componentes se encontr que eran iguales, podra pensarse que se trata del mismo compuesto? Explique brevemente. R= Si, esto se concluye debido a que si ambos componentes eluyen de la misma manera, significa que tienen una polaridad muy semejante, por lo tanto podra inferirse que se trata del mismo componente. 17. Explique brevemente si existe una relacin entre la cantidad de adsorbente y las dimensiones de la columna para una mezcla. R= Entre ms grande sea una columna, ms adsorbente se necesitar, esto para observar mejor la separacin de los componentes; adems de necesitar ms disolvente para continuar la elucin y evitar la sequedad del sistema. 18. Cmo debe de ser la polaridad del eluyente al empacar una columna? R= La polaridad del eluyente debe ser mayor 19. Con relacin al R x : 19.1 Cundo se usa el R x en cromatografa en capa delgada? R= Cuando no se cuenta con un compuesto con polaridad conocida, y por lo tanto elusin conocida, que se pueda usar como referencia en la C.C.D. 19.2 Qu significa la obtencin de R x igual a uno? R= Que el compuesto y el eluyente tienen la misma polaridad, incluso hasta mayor la de este ltimo. 19. Cul es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografa en columna? R= En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula A tiene ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A. Hexano ter de petrleo Benceno Tolueno ter etlico Cloroformo Acetato de etilo Cloruro de metilo Dicloroetano Acetona Etanol Metanol 20. A qu se le llama frente del eluyente en cromatografa en capa delgada? Demustrelo en una placa. R= Es la lnea donde acaba la elusin, si se rebasa dicha lnea se corre el riesgo de que los componentes separados se esparzan a lo largo de la parte posterior de la placa.
21. Cmo se controla la salida de los componentes en una cromatografa en columna? R= Se controla con la llave de la bureta, se va colocando los distintos pigmentos en tubos de ensayo, a los que se les denominar como fracciones. 22. Por qu no debe dejarse secar la columna cromatografa? En caso de que se fracture qu se recomienda hacer? R= Porque de no ser as la fase estacionaria se contraera y agrietara. Se debe rehidratar con ms eluyente si esto ocurre. 23. Por qu es importante que las muestras a separar por cromatografa deban estar lo ms secas posible? R= Para que no interfiera el agua con la elucin, por medio del disolvente, de los componentes de la muestra. 24. Por qu al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la mnima cantidad de disolvente? R= Las cantidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es de 3 a 4mL/min. en una columna de 40 cm de altura aprox. 25. Qu pH presenta la almina? Mencione los tres casos. R= Presenta tres pH: almina cida pH de 4.5, almina bsica pH de 10.0 y almina neutra pH de 8.0. 26. Por qu cuando se usa almina como adsorbente no se recomienda usar acetona como eluyente? R= Porque se desnaturaliza y queda pegada en las paredes de la columna. 27. Cules son los pasos a seguir para la preparacin de una placa preparativa? R= Las separaciones en capa fina caractersticas se realizan en placas de vidrio o plstico que se recubren con una capa delgada y adherente de partculas finamente divididas, esta capa constituye Ia fase estacionaria. Las partculas son semejantes a Ias de Ia cromatografa en columna. Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas simplemente. 28. Cul es la aplicacin de la cromatografa en placa preparativa? R= La eleccin de un eluyente ideal para cromatografa en columna. 29. Qu diferencia existe entre cromatografa en capa delgada analtica y cromatografa en placa preparativa? R= La preparativa se emplea generalmente para elegir un eluyente o mezcla de eluyentes ideal para cromatografa en columna. La analtica ya cuenta con un eluyente ideal y registra R x , es decir, se analiza la elusin de los componentes para arrojar un valor numrico final. 30. Cmo se clasifican los reveladores en forma general? R= Qumicos y fsicos. 31. Cuando una sustancia orgnica no se revela con I 2 o luz UV, qu otros reveladores pueden usarse para observar la sustancia? R= Con reveladores qumicos especficos para los componentes separados.