La polaridad qumica o solo polaridad es una propiedad de las molculas que representa la separacin de las cargas elctricas en la misma.

ANALITO: Es la sustancia que se va a separar

durante la cromatografa. CROMATGRAFO: Es el equipo que permite una separacin sofisticada. Por ejemplo, un cromatgrafo de gases o un cromatgrafo de lquidos. CROMATOGRAMA: es el resultado grfico de la cromatografa. En el caso de separacin ptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla separada.

TIEMPO DE RETENCIN: Es el tiempo

caracterstico que tarda un analito en particular en pasar a travs del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) DISOLVENTE: Es toda sustancia capaz de solubilizar a otra, y especialmente la fases lquida mvil en cromatografa de lquidos. En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la absorcin.

ABSORCIN: es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma. ADSORCIN: es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un slido, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial. Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza de la substancia adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del adsorbente, y de la concentracin.

a) En el caso de la cromatografa en columna, stos son: i. Tiempo muerto (to). Tiempo que tarda un soluto idealmente no retenido, en salir del sistema cromatogrfico. ii. Tiempo de retencin (tr). Tiempo que tarda el 50 % de un soluto en eluir y corresponde a la posicin de mxima concentracin en un cromatograma. iii. Velocidad de flujo del disolvente ( F). iv. Volumen de retencin (Vr): Volumen en el que eluye el 50 % de un soluto. Se calcula con la ecuacin:

Vr= trF

b) En el caso de la cromatografa en capa fina, los parmetros ms usuales son: i. Frente del disolvente (fd). ii. Centro del soluto (fs). iii. Relacin de frentes (Rf): Cociente de la divisin fs/fd. Se utiliza con fines de identificacin de compuestos cuando se tienen patrones de referencia. iv. Diferencia de Rfs. Medida cuantitativa del grado de separacin.

Serie de mtodos que sirven para la separacin de una mezcla de solutos.

Se basa en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a travs de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento.

Mtodo usado principalmente para la separacin de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido soportado en un slido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa , distribuida como una pelcula etc.

Entre otras cosas permite: *Determinar el grado de pureza de un compuesto. *Comparar muestras. *Realizar el seguimiento de una reaccin. *Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografa de columna. *Es la herramienta inicial para la caracterizacin y la separacin de muchos compuestos orgnicos. *Esta tcnica analtica es esencial para la identificacin, separacin y purificacin de sustancias con actividad biolgica til.

La cromatografa es un mtodo en el cual los componentes de una mezcla son separados en compuestos y se distribuyen en dos fases
fase fija o estacionaria slidos y lquidos fase mvil o eluyente lquido o gas (para poder fluir)

Fase estacionaria: en la cual estn retenidos los componentes de la muestra, y a travs de la cual fluye la fase mvil arrastrando a los mismos. Se trata de un slido o un liquido fijado en un solido que acta como soporte, de gran rea superficial.

Fase mvil: que fluye a travs de una fase estacionaria, arrastrando con ella a los compuestos de la mezcla. Consiste en la muestra que esta siendo separada (analizada) y el disolvente que se mueven por el interior de la columna. - Es un disolvente no-polar como el hexano (fase normal). - Algn disolvente polar (cromatografa de fase reversa) y la muestra que va a ser separada.

FASE NORMAL:
La Fase Mvil es No-Polar (Hexano, Tetracloruro de Carbono, Benceno, etc.) La Fase Estacionaria es Polar (Generalmente Slica).

FASE INVERSA:
La Fase Mvil es Polar (Agua, Soluciones "Amortiguadoras de pH", Acetonitrilo, Metanol, etc.) La Fase Estacionaria es No-Polar (Generalmente Slica injertada con cadenas de grupos orgnicos de 8 y 18 tomos de Carbn (C8 y C18).

TIPO
Adsorcin INTERCAMBIO IONICO EXCLUSION AFINNIDAD PARTICION

F.ESTACIONRIA
SOLIDO SOLIDO(RESINAS)

F. MOVIL
LIQUIDO- GAS LIQUIDO

INTERACIONES
VAN DER WALLS FUERZAS ELECTROSTATICA S INTERACIONES MOLECULARES SOLUBILIDAD

GEL SOLIDO LIQUIDO

LIQUIDO LIQUIDO LIQUIDO-GAS

Mtodo Abreviatura Mecanismo predominante Lquido, slido o LSC Adsorcin sobre la superficie de adsorcin Reparto entre fases lquidas, una mvil y la Lquido LLC otra estacionaria. Fase enlazada Pares de iones Intercambio inico BPC IPC Reparto y / o adsorcin entre las fases mvil y enlazada. Separacin de pares de iones entre las fases mvil y enlazada. Uso de la carga por adsorcin sobre un sitio inico fijo por medio de intercambio de cationes o de aniones. Aprovechamiento del tamao de las molculas por su difusin dentro de poros de tamao adecuado. Uso de la estructura de ligantes inmovilizados para unir bioselectivamente la protena deseada.

IEC

Exclusin estrica EC

Afinidad

--

En sta, la fase mvil es un gas y la estacionaria puede ser un lquido o un slido, por lo que existen dos variantes: a) Cromatografa slido-gas (CSG) b) Cromatografa lquido-gas (CLG)

En sta, la fase mvil es un lquido y la estacionaria puede ser un slido o un lquido, por lo que existen dos variantes: Cromatografa slido-lquido (CSL) Cromatografa lquido-lquido (CLL)

Cuando la fase estacionaria es slida, la cromatografa puede ser en columna y en placa, tambin llamada cromatografa de capa fina (TLC), (Thin-Layer Chromatography) por sus siglas en ingles.

En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancas depende tanto de su profia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado' El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte rgido, qu pueoen ser placas de vidrio, aluminio o polister. Los tamaos de la placa para ccf convencional son: 20 x 20; 't0 x20 y 5x2 cm.

ADSORBENTES (fase estacionaria) ADSORBENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA. a) Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas

Para la seleccin de los adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamao de partcula a. Dimetro b. rea Superficial c) Homogeneidad d) Pureza

SILICAGEL El gel de slice o cido silcico es uno de los ms utilizados, es dbilmente cido, su pH oscila entre 4-5. Con lo cual no se deber utilizar con sustancias que se corrompan con los cidos. Los geles de slice normales suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este factor tambin se debe tener en cuentas respecto al uso de componentes. El tamao del grano suele ser de 10 a 40 micras () y el tamao de poro vara de 20 a 150. Generalmente lleva incorporado un agente aglomerante, yeso (sulfato de clcico semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente. Tambin han sido incorporados dos indicadores del ultravioleta, juntos o por separados (amarillo y/o verde), en diversos tipos de gel de slice. Se trata de un adsorbente polar.

ALMINA La almina u xido de aluminio es un adsorbente ligeramente bsico debido a que en el proceso de extraccin de la almina a partir de la bauxita quedan algunas molculas de hidrxido de aluminio adheridas a la almina, dndole a sta un carcter bsico. No consigue un desarrollo tan alto de la sustancia depositada como el gel de slice. La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir alminas cidas, bsicas y neutras. Puede contener aglomerantes y/o indicadores ultravioletas. Es un adsorbente de carcter polar, de tal forma que retendr con mayor avidez a los componentes polares.

El punto de aplicacin de la muestra se denomina toque

Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente, de forma que en la placa solo quedar la muestra a analizar. Con el tubo capilar y usando la lnea de base se aplica una gota de la muestra en la placa de celulosa, procurando que se extienda lo menos posible y que no dae la capa. La zona de la placa que contiene dicha banda es raspada y recuperada en un matraz y extrada con el disolvente adecuado. Finalmente el disolvente es evaporado para la recuperacin del soluto. Esta tcnica tiene la ventaja de que su tiempo de desarrollo es inferior al de una cromatografa en columna.

En la cmara cromatogrfica deber mantenerse una atmsfera saturada de vapor del disolvente, con objeto de evitar la evaporacin del disolvente, ya que si sta se produce, el aporte de fase mvil al frente del disolvente puede ser insuficiente para su desplazamiento a travs del papel.

PROCESO DE ADSORCION La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la accin de fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrgeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la substancia con el solvente.

La eleccin del eluyente depende del componente que se va a separar y del material en que la separacin se lleva a cabo. En la eleccin del eluyente influyen varios factores: Precio. Pureza. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muy voltiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. La cubeta contiene un volumen de fase mvil, cuya altura de lquido debe de estar siempre por debajo de la lnea de aplicacin de las muestras

ter de petrleo Tolueno dietil-ter, t-butil-ter diclorometano acetato de etilo n-pentano, n-hexano Ciclohexano tetracloruro de carbono ter dietlico cloroformo acetona iso-propanol etanol metanol cido actico

Revelado. Qumicos (por inmersin o rociado). Se obtienen derivados coloreados o fluorescentes Fsicos (pticos). Generalmente se utiliza radiacin UV (Para hacerlas visibles se utiliza luz ultravioleta entre 240 270 nm).

Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que reacciona con los componentes orgnicos produciendo manchas negras. Adems de estos reveladores generales, existen otros especficos: 2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas). Verde de bromocresol (para cidos carboxlicos). Paradimetilaminobenzaldehido (para aminas). Ninhidrina (para aminocidos).

El tamao de las manchas no est relacionado con la cantidad de componente separado.

Para hacer visibles aquellas seales que no se detectan a la luz UV ni son coloreadas, se procede al revelado de la placa usando un revelador destacando entre los ms usuales el Yodo y el leum [mezcla de cido sulfrico (4%) cido actico (80%) y agua (16%)]. El revelado consiste en pulverizar el cromatograma con la especie reveladora y posterior calentamiento en una estufa alrededor de 100 C, logrndose de esta manera la carbonizacin de los compuestos orgnicos. El cromatograma una vez revelado nos presenta mediante manchas el grado de pureza de la muestra o el nmero de compuestos presentes en ella.

Para determinar las posiciones relativas de las seales se utiliza el concepto de Rf o Factor de Retencin. El Rf es la relacin que existe entre el recorrido de una mancha, medido desde el origen hasta el centro de la misma, y el recorrido por el disolvente (fase mvil) medido desde el origen hasta el frente. Distancia recorrida por la seal de un compuesto Rf = ---------------------------------------------------------Distancia recorrida por el frente del disolvente El Rf se expresa en valores que oscilan desde 0,01 hasta 0,99 y, tambin en porcentaje. Cuanto menos haya recorrido la sustancia en la fase estacionaria, menor ser el Rf de la misma. Los valores de Rf se pueden utilizar con fines comparativos para identificar sustancias al comparar con muestras autnticas de las mismas.

Es extraordinariamente simple, ya que utiliza una tira de papel de filtro, por ejemplo, Whatman No 1, como medio para las separaciones. Actualmente, la CP no se utiliza demasiado, debido al desarrollo alcanzado por otras tcnicas cromatogrficas, especialmente la CCF, CG y HPLC.

En esta el adsorbente se coloca dentro de un tubo largo y estrecho, provisto en el fondo de una llave de paso (puede servir una bureta), cuya salida esta conectada a un matraz de succin.

Carbonato clcico xido Magnsico xido de Aluminio Almidn Gel de Slice Estos adsorbentes se pueden definir dependiendo de la naturaleza de las sustancias que se van a separar.

En este procedimiento la muestra en disolucin se va aadiendo de forma continua en la parte superior de la columna. *Las primeras porciones del eluyente estn formadas por disolvente puro, y despus de cierto tiempo aparece el componente (A) adsorbido en ltimo lugar. Cuando aparece el componente (B), el eluyente contiene una mezcla de ambas sustancias (A y B), y as sucesivamente hasta que al final sale el componente mas adsorbido despus que la columna entera esta saturada de el. *En este momento la composicin del eluyente corresponde a la que tenia la disolucin original de la muestra

Este mtodo es adecuado para la determinacin del nmero de componentes

de una muestra

No es aplicable a la resolucin de muestras complejas, debido a que solo puede recuperarse una cantidad limitada del ltimo componente adsorbido antes que el segundo componente comience a salir de la columna.

Cromatografia de gases: Utilizada para la separacion de componentes y de gases en pemex. Cromatografia fraccionada: Separacion de diferentes liquidos con alto grado de volatilidad. Cromatografia de intercambio ionico: Se ocupa en la optencion de proteinas en la industria alimentaria.

La cromatografia de capa fina: Se utiliza en la industria farmaceutica para la optencion de materiales contenidos en las plantas . Cromatografia de HPLC Se utiliza para la purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas, cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina y estrgenos

Se usa para determinar la existencia de Drogas, venenos, alcohol, en la sangre y otros tejidos o fluidos. Por ejemplo en la separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina. | 3 | Contaminantes | Residuos productos zoosanitarios: substancias destinadas al diagnstico, prevencin o tratamiento de las enfermedades de losanimales que pueden dar lugar, por su mal uso o abuso, a repercusiones desfavorables para aquellos o para la salud pblica.Estas pueden ser anabolizantes (estrgenos, andrgenos, etc.), tireostticos, antibiticos (cloranfenicol, tetraciclinas), sulfamidas (bacteriostticos), betaagonistas (clembuterol) y plaguicidas (carbamatos, piretrinas, herbicidas). |

Cristales Amorfos de SiO2 al 99 % de Pureza. funcionamiento trmico estable alta adsorcin estructura fsica estable resistencia al rompimiento alta regeneracin, etc.

sus vapores son mas densos que el aire. El producto comercial generalmente contiene otros productos hidrocarbonados como ismeros de seis carbonos, benceno, algunos compuestos de 5 y 7 carbonos y otros con azufre, oxgeno, cloro o dobles ligaduras, aunque en menor proporcin. Se obtiene del petrleo. Por destilacin de fracciones de las que se obtienen gasolinas o a travs de reformados catalticos, por medio de los que se obtienen compuestos aromticos. Una forma de obtener n-hexano de gran pureza es pasarlo a travs de malla molecular, en la cual se retienen la n-parafinas y eluyen las ramificadas, cclicas y compuestos aromticos. Un posterior cambio de temperatura y/o presin, permite recuperar las parafinas lineales. En el caso de contener impurezas con dobles ligaduras u otros elementos como azufre, xigeno o halgenos, entonces la purificacin debe llevarse a cabo mediante hidrogenacin.

Productos de descomposicin: monxido y dixido de carbono. En general es incompatible con agentes oxidantes, bases, cidos y humedad. Reacciona vigorosamente con cido clorosulfnico, dihidroaluminato de litio y clorometil furano y oleum. Se ha informado de reacciones muy violentas con tetraaluminato de litio, hidruro de litio y aluminio y terbutxido de potasio.

Solvente, combustible, plastificante, reactivo de laboratorio, extraccin de aceites vegetales y animales, anticongelante, elevador de octano, manufactura de productos qumicos y farmacuticos, agente de extraccin, produccin de formaldehdo, monometil, dimetilamina, sulfato dimetlico, matil antraquinona y metil steres, desnaturalizacin de etanol, deshidratacin de gas natural, en la produccin de pinturas, barnices, cementos, tintas, cosmticos, plsticos y colorantes.

Puede provocar cncer <indquese la va de exposicin si se ha demostrado concluyentemente que el peligro no se produce por ninguna otra va>. Puede provocar defectos genticos <Indquese la va de exposicin si se ha demostrado concluyentemente que el peligro no se produce por ninguna otra va >. Lquido y vapores muy inflamables. Provoca irritacin ocular grave. Provoca irritacin cutnea. Provoca daos en los rganos <o indquense todos los rganos afectados, si se conocen> <indquese la va de

Es muy famable, y pues es un poco corrosinva y sus vapores irritan las mucosas

Lavar los ojos inmediatamente con abundante agua, por lo menos durante 15 minutos, elevando los prpados superior e inferior ocasionalmente para retirar cualquier residuo de la sustancias de estas superficies. Se debe buscar atencin mdica inmediatamente. Exposicin en la Piel: Lavar la piel inmediatamente con agua y jabn mientras se quita la ropa y zapatos contaminados. Se debe buscar atencin mdica inmediatamente. La ropa contaminada se debe lavar antes de usarla nuevamente. Inhalacin: Si se inhala esta sustancia, la persona afectada se debe ubicar en una zona segura con acceso a aire fresco. Si la persona no respira, se debe suministrar el procedimiento de respiracin

PARTE EXPERIMENTAL Experiencia 1 CROMATOGRAFA EN PLACA FINA a) Separacin de carotenos 1. En una comatoplaca de 5x2.5 cm trazar con un lpiz de punta suave una lnea a .5 cm de distancia de borde interior 2. Aplicar con un aplicador (previamente elaborado con un capilar) la muestra de carotenos en dos puntos equidistantes sobre la lnea marcada

Realizar de 2-3 aplicaciones sobre cada punto si la muestra es concentrada Realizar varias aplicaciones si la muestra est muy diluida 3. Dejar secar

4. Desarrollar el cromatograma en una mezcla de hexano: acetona (6:1) (v/v) teniendo en cuenta que ste norebase los puntos de aplicacin y de que eluya hasta 0.5 cm antes del borde superior de la placa. 5. Retirar de la cmara cromatografic 6. Marcar el centro de cada mancha observada y calcular los valores de Rf para cada componente b) Identificacion de aceites esenciales por cromatografa en placa fina 1. Realizar el mismo procedimiento, pero ahora empleando como muestra los diferentes aceites esenciales 2. Utilizando benceno como fase mvil. 3. Aqu se utilizar un agente revelador para poderobservar las diferentes manchas en el cromatograma.

Para estos las placas: Se deber sumergir en una disolucin de KMnO4 al 10 % Lavar las placas inmediatamente con agua corriente hasta que se observen unas manchas de color caf correspondientes a los compuestos prsentes en la muestra 4. Calcular los Rfy compararlos con los de la siguiente tabla. Experiencia 2 SEPARACION DE CAROTENOS POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA 1. Colocar la columna para cromatografia con una pinza universal o una pinza para bureta. 2. lntroducir un trozo delgado de algodn por medio de un agitador hasta la base,

De talmanera que al momento de empacarla la silica no se salga de la columna No debe ser mucho algodn (para que la velocidad de elucin no sea muy lenta) 3. Empacar la columna con silica gel en una mezcla de hexano acetona 1.1 (v/v) Procurar que la compactacin de la silica sea homognea No se formen buerbujas No se agriete la silicagl empaquetada Mantener en todo el proceso de enpauquetado un goteo uniforme en la llave de salidadedosolvente durante todo el proceson de empacamiento de la columna.

4. Dejar gotar el dosolvente y esperar hasta que sste quede ligeramente arriba de la fase estacionaria. 5. Una vez empacada la columna con la silica, agregar un poco de NaCl de tal forma que quede con una capa fina de aproximadamente 1cm. 6. Agragra 10 gotas del concentradeoespinacgasconauda de un a pipeta pasteur 7. Tener cuidado de no derramar el concentrado por las paredes del la columna ni que se mezcle con la fase novil. NOTA: nunca permiir que el nivel del disolvente baje masalla de la superficie de la capa de NaCl, ya que de lo contrario se corre el riego de uq e la columna se seque y se agriete, lo que afecta negaticvamente el desarrollo de la separacin.

8. Una vez que los pigmentosdpenertaron en la slice llenar lentamente la columna con la mezcal de hexano:aceitona 1:1 (v7v) cuidando en todo momento de no hacer remolinos con la fase mvil ya que se mezclara con la muestra a operar dando resultados negativos. 9. Correr la co,umnacromatografica observando la seoaracion de los diferentes coponentes de la mezcla del estracto de epinacas, adicionando constantemente fase mvil a manera de que siempore se mantenga constante el volumen de eluyentedurate todo el proceso. 10. Recoger la primera fraccin coloreada en tubos de ensayo numerados y cubiertos con papel aluminio

11. Cuando termine e eluir esta primera fraccin, cambiar el eluyente a acetato de eetilo: metanol 1:1 v/v y recoger la siguiente fraccioncoloreada en tubos de ensayo numerados y cubiertos con papel aluminio 12. Una vez recolectadas todas las fracciones, en un bao de agua caliente , evaporar la mayor cantidad posible de disolvente para realizar una cromatografa en capa fina de las fracciones que presenten tonalidades diferentes, corrindolas a la par de la mustra original del estracto de sepinacas, usanto como fase moil hexano acetona 1:1 (v+v) identiciarlos pigmentos separados en cada fraccion Experiencia 2 SEPARACION DE LICOPENOS 1. Hacer la cromqtografia en capa fina ddel extracto de jitomate para la separacin de licopenos, en la misma foma que se efectu en la espinaca. 2. Analizar los resultados obtenidos y concluir.