Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
PRÁCTICA 10:
1. INTRODUCCIÓN
Fase móvil
Fase
estacionaria
1
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
consiste en que ésta técnica puede aplicarse a cantidades muy pequeñas de producto (del
orden del µg).
Las técnicas cromatográficas se pueden clasificar atendiendo a varios criterios:
naturaleza de las fases (sólido, líquido, gas), relación de polaridad de las fases (fase
normal, fase inversa), mecanismo de separación (adsorción, exclusión, intercambio
iónico, reparto, afinidad), disposición de las fases (en columna, en plano) y forma de
desarrollo del proceso (frontal, de desplazamiento, de elución). En la siguiente tabla se
da una relación general de los diferentes métodos cromatográficos basada en la
naturaleza de la fase móvil:
Mecanismo de
Clasificación general Fase estacionaria Fase móvil
separación
adsorción
sólido líquido
Cromatografía líquida exclusión
(LC) resina cambiadora líquido intercambio iónico
líquido líquido reparto
Cromatografía gaseosa líquido gas adsorción
(GC) sólido gas adsorción
Cromatografía de fluidos sólido-especies fluido
reparto
supercríticos (SFC) orgánicas supercrítico
2
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
Muestra
Fig. 1
Éter de petróleo < tetracloruro de carbono < ciclohexano < éter etílico < acetona <
benceno < acetato de etilo < cloroformo < etanol < metanol < agua < piridina < ácido
acético
3
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
Una vez sembrada la muestra, se llena la parte superior libre de la columna con
el eluyente y se abre la llave de la columna estableciendo un flujo continuo de la fase
móvil. Se van tomando fracciones consecutivas del eluyente que serán examinadas
posteriormente para determinar su composición. A medida que sea necesario se va
adicionando más eluyente a la parte superior de la columna, hasta que el análisis de las
fracciones confirme que la elución de los componentes de la mezcla se ha completado.
4
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
elución
frente de disolvente
B
dD
dB
A
dA
x
M
Fig. 2
5
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
Las placas para cromatografía TLC se preparan depositando una fina capa de
una suspensión del adsorbente sobre un soporte adecuado y secando el disolvente en
estufa. No obstante, existe una amplia gama de placas para cromatografía TLC
disponibles comercialmente con diferentes tipos de adsorbentes y soportes.
Se introduce la placa en una cámara cerrada saturada con los vapores del
disolvente (fase móvil) con el que se llevará a cabo el desarrollo. Para favorecer la
saturación, se puede introducir en la cámara un papel de filtro cuya parte inferior quede
sumergida en la fase móvil. El papel de filtro debe dejar una franja de la pared de la
cámara al descubierto, para poder seguir el proceso cromatográfico sin necesidad de
destapar la cámara (véase Fig.3 ). El disolvente no debe estar en contacto directo con la
muestra depositada en la cromatoplaca, debiendo quedar su nivel por debajo de la línea
de aplicación de muestras.
papel de filtro
línea de aplicación
de muestras
cromatoplaca
disolvente
Fig. 3
6
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
Reacción de la ninhidrina
ninhidrina O
O
O
N
+ RCHO + CO2 + 3H2O
O
HO
(morado)
7
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
4.1. Separación de una mezcla de dos colorantes por cromatografía en columna (CC)
Materiales:
- Columna de cromatografía
- Matraces Erlenmeyer (4 x 50 ml; 2 x 100)
- Vaso de precipitados (100 ml)
- Varilla de vidrio
- Soporte metálico
- Pinza
- Nuez
- Pipetas Pasteur
- Aspirador de pipeta
Reactivos/disolventes:
- Alúmina activada
- Etanol al 96%
- Agua destilada
- Mezcla problema: 1,5 ml de una solución de 60 mg de naranja de metilo y 200
mg de azul de metileno en 110 ml de etanol al 96%
Procedimiento:
8
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
4.2. Separación de una mezcla de aminoácidos por cromatografía en capa fina (TLC)
Materiales:
Reactivos/disolventes:
Procedimiento:
9
FUNDAMENTOS DE QUÍMICA-PRÁCTICA 10
4.3. Separación de una mezcla de dos colorantes por cromatografía en capa fina
Procedimiento:
Llevar a cabo una TLC con la muestra problema del apartado 4.1, utilizando
etanol al 96% como eluyente. Justificar las diferencias observadas en la elución de la
muestra problema por CC y TLC.
5. EJERCICIOS
10