Apéndice Practica 7

Laboratorio de Orgánica 1
López Del Valle Enrique Clave 03
Ramírez Flores Cristian Clave 14
Cromatografía en Columna
1.-Cromatografía en Columna. Para que sirve y sus aplicaciones. Esta técnica
permite aislar compuestos de una mezcla, se realiza mediante el uso de un
tubo cilíndrico vertical (columna de vidrio), el cuál en su interior lleva un
soporte sólido adsorbente actuando de fase estacionaria y por donde pasa la
fase móvil. Para crear la fase estacionaria son utilizados el gel de sílice (SiO2) y
alúmina (Al2O3), y las sustancias que atraviesan esta fase pasan por presión, por
gravedad o por capilaridad. De forma general la cromatografía por columna es
usada para separar proteínas y su separación depende de la matriz con que
esté hecha la fase estacionaria permitiendo o no la interacción con la matriz y su
retención y posterior aislamiento. Estas matrices juegan un papel importante en la
finalidad de producto obtenido y existen variantes como lo son la cromatografía de
intercambio iónico, la cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de
afinidad, entre otras.

2.-Cromatografía de adsorción y de partición o reparto. CROMATOGRAFÍA DE

ADSORCIÓN: la fase estacionaria sólida retiene a los solutos, principalmente por
efecto de fuerzas físicas de superficie del tipo de fuerzas de Van der Waals. Se
emplea en la separación de compuestos orgánicos diversos, tanto líquidos como
sólidos. Recordemos, en primera instancia, la diferencia entre ADSORCIÓN y
ABSORCIÓN.

CROMATOGRAFÍA DE REPARTO: los solutos se separan en base a las

diferencias de las solubilidades de estos, entre la fase móvil y la fase
estacionaria. Es la técnica más usada y, generalmente, se efectúa sobre tiras de
papel de filtro, o en placas inertes recubiertas con un material adsorbente. Es una
cromatografía líquido-líquido porque la fase estacionaria es el agua contenida en
la celulosa del papel. Cuando la fase móvil (solvente orgánico) pasa sobre la fase
estacionaria, las sustancias se separan <repartiéndose= entre ambas.
3.-Factores que influyen en una separación por cromatografía en Columna. Los
factores que pueden afectar el comportamiento cromatográfico incluyen lo
siguiente:
 Composición, fuerza iónica, temperatura y pH aparente de la fase móvil.
  Velocidad de flujo, dimensiones de la columna, temperatura de la columna y
presión.
 Las características de la fase estacionaria, incluyendo el tipo de
soporte cromatográfico (basado en partículas o monolítico), tamaño de
partícula, tamaño de poro y área específica.
 En fase reversa y otras modificaciones superficiales de las fases
estacionarias, el grado de modificación química (según se expresa
mediante recubrimiento exhaustivo (end-capping), carga de carbono, etc.)
4. Selección de eluyentes y adsorbentes para la separación de compuestos por
Cromatografía en Columna Antes de correr la columna se debe tomar en cuenta el
comportamiento del compuesto en una cromatografía de capa fina, para decidir el
eluyente correcto, generalmente como adsorbente se elige silica, pero debe
tomarse en cuenta la naturaleza acido-base del compuesto en cuestión, ya que la
silica es de naturaleza acida en disolución y puede presentar problemas para
separarse. En general ambos eluyentes y adsorbente no deben reaccionar con el
compuesto y deben mostrar una diferencia de rf grande entre componentes.
Bibliografía.
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