Universidad Autónoma del Estado de México

Facultad de Química
Programa de
Doctorado en Ciencias Químicas
Tema:

Síntesis de Ala-Boro-Pro como inhibidor de FAP

Presenta:
Diana Sarahí Trujillo Benítez

Toluca Estado de México, septiembre 2021

Resumen
Desarrollo de inhibidores
FAP (FAPI)
actividad
DPPs
exopeptidasa
Sobreexpresión en los
fibroblastos
estromales reactivos. Diferenciación
entre

Mal pronóstico en simulan la estructura

tumores de del sustrato actividad
PREP
carcinomas: endopeptidasa

 Angiogénesis
 Inmunosupresión
NitroPro FAP acepta Ala o Gly
 Reordenamiento de MEC BoroPro
 Proliferación
 Metástasis.

 de colon.
 de páncreas.
 de ovario.
 hepatocelular. Ki µm
Ki nm
 Doxorubicina

FAP

La sola inhibición de
FAP no basta para
reducir el crecimiento
tumoral
Fosofonoacetil
F19
FAPI

FAPI-04
Radiofármacos de reconocimiento especifico
Inhibidores de FAP IC50:6,5nM

(Lindner, T. et al. FAPI 04

2018)

Ki: 9,0 ± 0,9 nM

HYNIC

ARI-3099
(Poplaswki, E. et al. 2014)

6-metoxi-N-4-quinolinoil-Gly-(2S)- 2-ciano-
4,4-difluoropyrrolidina.
(Jansen, K. et al. 2014)
 Constantes de inhibición (Ki) determinadas por acoplamiento
molecular (AutoDock).
Compuesto Ki (nM)

296.46

N-acyl-Gly-boroPro

14.07

N-(pyridine-4-carbonyl)-D-Ala-boroPro)
Lu-DOTA-HYNIC-Lys(Nal)-Urea-
177

Glu (Hernández-Jiménez, T. et al. 2018)

0.536 99m
Tc-EDDA/HYNIC-[Lys3]-bombesina
(Ferro-Flores, G. et al.
2006)

HYNIC-Ala-ProBoro
Procedimiento
 3,11 g de trimetilborato
30mmol (0,931M). 1.71 g de Boc‑pirrolidina
B(OMe)3 10 mmol (0,31M)
8,6 ml de Sec-buLi
12mmol (0,372M)
N-Boc-Pirrolidina
ser a
La presentación suele
pa ra tener
1,4M en ciclohexano
12 mmol
xano s-buLi
1,4mmol----1ml ciclohe
ano
12mmol----xml ciclhex
12/1,4=8,57ml-
-8,6 o 9 ml

20 mL de éter etílico Et2O

3 mL de TMEDA
TetraMetilEtilenDiAmina
atmósfera de nitrógeno a -40 ° C, 3h
∆G= ∆H-T ∆S
3h 2= (-10)-3 (-4)
-2= (-10)-2 (-
4)
-6= (-10)-1 (-
4)
 Complex induced proximity
effect (CIPE)

Un evento previo a la litiación acerca a los grupos reactivos, determina la velocidad (complejo
intermedirario) antes de que ocurra la desprotonacion y metalación.

. s-buLi

TMEDA
B(OMe)3

La reacción se detiene
colocando 30 ml de H2O y
subiendo a t.a.
 Extraer con 30ml de NaOH 2M,
3 veces, fase acuosa.

.
Adicionar HCl
Extraer con EtOAc
hasta pH de 3 Soluble con hidrocarburos, cetonas, En fase acuosa se quedan las sales
alcoholes y éteres pero poco soluble en H2O generadas de la neutralización de NaOH y
HCl

Eliminar el EtOAc y
Agregar 100g de recuperar el solido.
MgSO4 dejar toda
una noche

Recuperar fase de EtOAc

a R

S
 Separación de R y S Poplaswky S. et.al. (2014)

(1S,2S,3R,5S)-(+)-
Pinanediol Coutts S. et.al. (1995)
Kelly a. et.al. (1993)

1,36 g de (+)
pinanediol (8,0mmol)

1,52 g
(7,1mmol) t.a. en Et O (25ml)
2
por 2 horas

Separado por HPLC flash cromatografia

gel de sílice
• Columna de 300x3,9 mm de microporasil A
(85:15 hexano: EtOAc)
• Eluyente metil-terbutil eter:hexano (1:9) (85%) de una mezcla 1:1
• UV a 220nm
• Compuesto 7b eluye primero
 Separado por cristalización

224g de 6 en 900 mL de
éter tratarlo con dry HCl
a 0°C por 35 min

Se generará un precipitado el cual se

Mantener en agitación por debe lavar con 400 mL de eter y 200
toda una noche entre 10- mL de 9:1 eter de petróleo:eter
18°C.

Se generan 113g de un polvo

blanco que es 60:40 1:2 (64% )

1,18g fue disuelto en 65mL de diclometano El filtrado fue disuelto en 65 ml de

con ligero calentamiento, filtrar la solución EtOAc y la cristalización comenzó
para remover material café insoluble en un minuto

Fue nuevamente recristalizado con 10 mL de Se dejo en agitación por 2 horas a

isopropil alcohol (IPA) para obtener 430mg t.a. y el primer producto fue
(80%) >99% R recuperado (46%) 97:3 (R:S)
Wu W. et.al. (2012)

El ácido borónico bruto se convirtió en el éster de (+) - pinanodiol mediante la adición de 1,0
equiv. de (+) - pinanodiol en éter etílico. Se produjo una mezcla de aductos cis-2, 4-
disustituidos (1a) y trans-2,4-disustituidos en una proporción de 7: 3, donde el cis-2,4-
disustituido deseado era la mayoría. Se separó R puro con éxito de la mezcla L, D mediante
cristalización en acetato de etilo con un rendimiento total del 35%.
 Han L et. al. (2017)
Gibson S. et al. (2012)

1,36 g de (+) Kelly a. et.al. (1993)

pinanediol
Flash cromatografia gel de sílice
(8,0mmol)
(85:15 hexano: EtOAc)
Et2O
(25ml)
t.a.
1,52 g 2 horas
(7,1mmol)

1,18g en 65 ml de diclometano con ligero Disolver filtrado en 65 ml de

calentamiento, filtrar la solución y remover EtOAc, la cristalización comenzará
material café insoluble en un minuto, agitación por 2 h.
(46%, 97:3)

Recristalizar con 10 mL de isopropil

alcohol (IPA) (80%) >99% de R
Okondo M. S. et.al. (2018)
0.21 g D-Boc-
20 ml
Alanina ( 1,1 mmol) de
DMF

DIPEA, 0.5 g
N,N-Diisopropiletilamina

0°C, N2
HATU (1.5
mmol)

Dejar agitación por 2 h. (1.0 mmol)

Remover solvente
mediante vacío a
 Okondo M. S. et.al. (2018) Coutts S. et.al. (1995)

Agregar 100g de
MgSO4 dejar toda
una noche
KHSO4 (0,1 N) x3
NaHCO3 ( 5%) x3

50 ml EtOAc

Eliminar el EtOAc y
recuperar el solido. Purificar
Gel de silice
(3:1 Hexano: EtOAc)
92%
Como quitar el Boc
0.21 g D-Boc-
20 ml
Alanina ( 1,1 mmol) de
DMF

DIPEA, 0.5 g

0°C, N2
HATU (1.5
mmol)

Dejar agitación por 2 h. (1.0 mmol)

Remover solvente
mediante vacío a
Coutts S. et.al. (1995) Kelly a. et.al. (1993)
3 mmol

Solución saturada de
Subir hasta t.a. Evaporación de
HCl en Et2O (50 ml)
agitación 3 h. solvente rotavapor
0°C.

Disolver (10mmol) en
100mL de H2O pH:2
con HCl

1,28g (10.5mmol) Mezclar las 2

acido fenilboronico fases. Reemplazar Dejar en agitación
en 100 ml de hexano el hexano a los 30, toda una noche
60, 90 y 120 min.

Extraer la fase acuosa

Cl-
Para dejar el compuesto libre sin Cl

Fase acuosa en columna de

intercambio iónico Dowex 50-X2- 100
Eluir con agua hasta pH:neutro.

Eluir con hidróxido de amonio (1:50)

liofilizar las fracciones 90-95%.

R-NH3Cl

Cl-

R-SO4H + R-NH3Cl R-SO4NH4-R + HCl

R-SO4H + NH3OH R-SO4NH4 + H2O

 Cloruro de acetilo
Coutts S. et.al. (1995)
25mmol Solución
Colocar el producto saturada de HCl en
obtenido en 190 ml de EtOAc (190 ml) 0°C.
metanol Subir a t.a. agitación 3 h.

Evaporación de Los únicos que lo

Lavar con EtOAc y Et2O
solvente rotavapor. mencionan.
Okondo M 2017

2,2g 5mmol Tricloruro de Boro

En diclorometano anhidro 25 ml
-78°C en atmosfera de Argón BCl3 (1.0 M en diclorometano, 15 ml)

Separar la fase acuosa y Adicionar gota a gota y

lavarla con Et2O (2x20 ml) agitar por 1 h en la
misma temperatura

Colocar 20 ml de H2O y Concentrar por

Purificación
20 ml de Et2O evaporación
mediante HPLC
Otra forma seria…

1. Disolver 1 mmol del conjugado Alanina-

Boc-HYNIC, 1.5 mmol de EDC y 2.0 mmol
NHSS en 15 mL de agua a temperature ITLC
1.- Disolver el Alanina (1 mmol) en 10 mL de DMF
ambiente (activación de carbonilos) (1 h).
Fase móvil: sol salina 0.9
2.-Adicionar DIPEA (1 mmol), HATU y el succinimidyl-N-boc-HYNIC (1 %
2. La mezcla de reacción se incuba durante 1 h
mmol). Revelado: ninhidrina
a temperatura ambiente bajo agitación.
3.-La mezcla de reacción se incuba durante 1 h a t. a. bajo agitación. negativo
4.-Evaporar el solvente orgánico. 3. Se adiciona 1 mmol del derivado
Control: de
Alanina (+)
boroprolina (desprotegido de Boc).
4. La mezcla de reacción se incuba durante 3 h
a temperatura ambiente bajo agitación.
 Separado por cristalización

224g de 6 en 900 mL de
éter tratarlo con dry HCl
a 0°C por 35 min

Se generará un precipitado el cual se

Mantener en agitación por debe lavar con 400 mL de eter y 200
toda una noche entre 10- mL de 9:1 eter de petróleo:eter
18°C.

Se generan 113g de un polvo

blanco que es 60:40 1:2 (64% )

1,18g fue disuelto en 65mL de diclometano El filtrado fue disuelto en 65 ml de

con ligero calentamiento, filtrar la solución EtOAc y la cristalización comenzó
para remover material café insoluble en un minuto

Fue nuevamente recristalizado con 10 mL de Se dejo en agitación por 2 horas a

isopropil alcohol (IPA) para obtener 430mg t.a. y el primer producto fue
(80%) >99% R recuperado (46%) 97:3 (R:S)
Adicionar HCl
Extraer con EtOAc
hasta pH de 3 Soluble con hidrocarburos, cetonas, En fase acuosa se quedan las sales
alcoholes y éteres pero poco soluble en H2O generadas de la neutralización de NaOH y
HCl

Eliminar el EtOAc y
Agregar 100g de recuperar el solido.
MgSO4 dejar toda
una noche

Recuperar fase de EtOAc

Han L et. al. (2017)