Universidad Autónoma del Estado de México

Facultad de Química
Programa de
Doctorado en Ciencias Químicas
Tema:

Regulación, expresión
y participación de FAP
en el progreso del
Cáncer

Presenta:
Diana Sarahí Trujillo Benítez

Toluca Estado de México, agosto 2021

• FAP en la progresión del cáncer.
Directa o Indirecta.
Enzimática y no Enzimática.

• Regulación de FAP.
Factores que desencadenan su
sobreexpresión.

• FAP en otras enfermedades.

 FAP en la progresión del cáncer.
Proliferación. Invasión celular.
Migración
.
Crecimiento
tumoral.
¿cómo?

Indirecta. Hipótesis. Directa.

Altera las vías de

Regula la remodelación de
¿ambas?
señalización intracelular.
la matriz extracelular.

Mayor capacidad de Afectan el ciclo celular.

Se discute si: MMP 1,4,9, Vías de proliferación.
crecimiento celular.

Atribuye. Independientemente.
Rutas PI3K/AKT y
Actividad enzimática. Ras-ERK
Hidrolisis de colágeno
• Regulación de FAP.
Factores que desencadenan su
sobreexpresión.
Factores que inducen la expresión de FAP.
 FAP
Tríada catalítica
Ser624, Asp702 e His734

La serina actúa como un nucleófilo

FAP catalíticamente inactivo (FAPCI)

Ser 642 está mutado a Ala
Melanoma de ratón se transfectaron con
FAPCI. sugiere que la FAP catalíticamente
inactiva todavía puede inducir efectos
biológicos.
Las líneas de cáncer de mama transfectadas con FAP o
con FAPCI crecieron más rápidamente in vivo, fueron
más invasivas en los geles de colágeno y tuvieron una
mayor degradación de la matriz extracelular en
comparación con las líneas celulares no transfectadas.
Además tenían un mayor crecimiento y
motilidad celular, y ambas proteínas activaban
las moléculas de señalización PI3K y
MMP2/9.
¿Puede sólo el poder inhibidor ser suficiente
contra FAP?
• La FAP se expresa escasamente en tejidos adultos sanos de
mamíferos.
• Las excepciones incluyen:
Células alfa pancreáticas.

Células estromales de médula ósea multipotentes (BM-MSC).

Estroma uterino especialmente durante la fase proliferativa.

Placenta humana.
Algunos fibroblastos dérmicos.

La FAP está presente en el plasma de los seres

humanos (aproximadamente 100 ng/ml
 El gen FAP humano

• 2q23.
• Aprox. 73 kb.
• 26 exones.

Comparte una homogeneidad notable con

DPPIV (se encuentra en el cromosoma
2q24.3), abarca 70 kb y contiene 26 exones.
Se cree que la FAP surgió de una duplicación
de DPPIV.
La región promotora es un fragmento de 245 pb que rodea el sitio
de inicio de la transcripción. Contiene sitios de unión a la
transcripción de respuesta de crecimiento temprano-1 (EGR1),
HOXA4 y E2F1.

EGR1 pareció ser el factor de transcripción más

importante para impulsar la expresión de FAP.
 Los reguladores de la sobreexpresión de FAP mas
estudiados son:

TGF-β

.
 Park Y. et al. (2016)
hTERT

Transcriptasa inversa de la telomerasa

humana (hTERT) contribuye a la
inmortalización celular.

Presente en el 90% de las células

cancerosas humanas,

Independientes de la telomerasa:

Movilidad.
Invasión.
Antiapoptosis.

Proteína de especificidad 1 (Sp1), factor de transcripción E2F 1

(E2F1) y homeobox A4 (HOXA4)
 A2BR

El tratamiento de ratones portadores de

melanoma con un inhibidor del receptor de
adenosina A2BR redujo el número de células
FAP + en un modelo de melanoma de
trasplante, mientras que un agonista A2BR
aumentó las células FAP +. Estas células
mostraron una fosforilación mejorada de
ERK1/2 y expresión de FGF2 y CXCL12.
La adenosina es un factor promotor de tumores
generado a partir de la degradación del ATP. Las
concentraciones extracelulares de adenosina
aumentan en los tejidos tumorales hipóxicos
debido a la regulación positiva de la enzima
generadora de adenosina CD73, expresada en las
células tumorales.

La acumulación de ADO en TME es

promovida principalmente por HIF-1α a
través de dos formas. Una forma es
aumentar la expresión de CD39 y CD73
para escindir ATP en ADO. La otra forma
es inhibir la actividad de AK. La
activación de AK puede catalizar la
conversión de ADO en AMP, que es su
principal vía de eliminación.
 Sorrentino C. et al. (2016)
Células de melanoma B16.F10

Inhibidor
de A2BR

Agonista
de A2BR
 ESTRÓGEN
O
• RE
• RE-B
• Receptor 30 acoplado a
proteína G (GPR30),

Estradiol (E2) regula la

expresión de la
metaloproteinasa de la matriz
(MMP) -2 y la secreción de
enolasa 1 a través del RE en las
células WPMY-1 del estroma
prostático.

La aparición de CAF de próstata

coincide con una reducción
sustancial en el número de SMC
diferenciadas y un aumento
significativo de células madre
SMemb/CD44/FAP positivas.

Jia B. et al. (2016)

FSK estimula la expresión de ER
activando la vía de PKA , mientras que
otros informes indicaN que GPR30
suprime la actividad de PKA al inhibir la
producción de cAMP.
 Radiación Wäster P. et al. (2017)
UV

• UVR regula positivamente la expresión de FAP-a en

melanocitos y células de melanoma in vitro, lo que facilita la
degradación de la ECM.

• El crecimiento y la invasión de las células del melanoma

primario depende de la secreción de las catepsinas B y D
lisosomales.

• La sobreexpresión de catepsinas se asocia con un mayor

potencial metastásico, así como con un mal pronóstico

La invasión del melanoma fue

mejorada por la expresión de TGF-β1
inducida por catepsina B, lo que resultó
en fibroblastos activados con mayor
capacidad para promover la invasión
del melanoma
Efecto de los medios acondicionados de cultivos irradiados sobre la migración y la
invasión celular. Se encontró que las líneas de células de melanoma, así como los
fibroblastos, mejoran el crecimiento y la migración celular tras la adición de medio
acondicionado.
Inhibidor de catepsinas

B
K

Muy
interesante

Para establecer que FAP-a es el

actor principal durante la
invasión estimulada por TGF-b1,
reducimos la expresión de FAP-a
en células de melanoma usando
siARN.
Las catepsinas regula la activación de TGFβ1 en líneas celulares de melanoma maligno. A
su vez es un factor central responsable del aumento del nivel de proteína FAP-a tanto
mediante la señalización de forma autocrina a las células de melanoma como de forma
paracrina a los fibroblastos.
 CONCLUSIONE
S
La inhibición de la actividad enzimática de la FAP puede tener algunos efectos beneficiosos sobre
el microambiente del tumor, pero por sí misma es probablemente insuficiente para detener la
progresión del tumor.

El uso de los inhibidores de FAP como vectores de reconocimiento especifico para el tratamiento
de algunos tipos de cáncer, esta tomando un camino:

Profármacos
Inmunoterapia
Radiofármacos

En el camino de la regulación de FAP como alternativa de tratamiento en los diferentes tipos de

cáncer que la sobre expresan podría ser mediante inhibición de la expresión utilizando siARN pero
no mediante la utilización de inhibidores por si solos.
Para dilucidar el mecanismo por el cual GPR30 y ER del
estroma pudieron ejercer sus efectos sobre la progresión del
CaP, investigamos más a fondo sus funciones en el cambio
fenotípico de las células estromales. Examinamos la expresión
de FAP, CD44, Smemb y los marcadores de diferenciación tanto
a nivel de ARNm como de proteína en células WPMY-1, que
fueron transfectadas con plásmidos de expresión o ARNip para
GPR30 y ER. Como se muestra en la Figura 5, A y B, FAP,
CD44 y SMemb se regularon significativamente al alza en las
células WPMY-1 tras la sobreexpresión de GPR30, junto con la
disminución sustancial
 TNF-α
Las dosis altas de TNFα produjeron aumentos en la
fosforilación de ERK1 / 2 junto con aumentos modestos en la
expresión de FAP en líneas celulares de cáncer de mama [42],
aunque dosis similares no produjeron una regulación al alza
significativa de FAP por BM-MSC. BM-MSC, en cambio,
aumentaron la FAP en respuesta a IL-1β y TGFβ

Entre las numerosas citocinas, el factor de necrosis tumoral alfa

(TNF-α) es una importante citocina inflamatoria multifuncional
con acciones pleiotrópicas, que implica la regulación de la
apoptosis, la supervivencia y las respuestas inmunitarias [3-5].
Se ha informado que varios tipos de células pueden liberar
TNF-α, como fibroblastos, células de Kupffer, queratinocitos,
las células inflamatorias infiltrantes, incluidos los macrófagos
infiltrantes de tumores, y células tumorales que incluyen
linfomas de células B y carcinomas de colon.
 6 casos de fibromas uterinos fueronestudió.

La señalización de LPS a través de TLR4 indujo la expresión de

TGFβ por fibroblastos primarios, que correspondía a una alta
expresión de FAP

LPS (100 ng / ml) activa los fibroblastos CD90 +. La expresión

de la proteína de activación de fibroblastos (FAP) en
fibroblastos de miometrio CD90 + (fib) y fibroblastos de
fibroma CD90 + (TAF) se detectó mediante Western blot (A) y
PCR en tiempo real (B). (C) El colágeno I y el TGF-β
aumentaron significativamente después de 48 h de tratamiento
con LPS (* P <0.05, ** P <0.01).

Se trataron UFC, SMC, TAF y fibroblastos con lipopolisacárido

Se aislaron células de fibromas
(LPS, 100uterinos
ng / ml)(UFC), células de
músculo liso (SMC), células asociadas a tumores (TAF) y
fibroblastos mediante separación celular magnética (MACS,
Miltenyi Biotec, Inc., Auburn, CA). A continuación, se
cultivaron conjuntamente UFC y SMC con CAF (fibroblastos
activados por LPS) durante 72 horas.
 La alfa-2-antiplasmina
La capacidad de la FAP para escindir la α-2 anti-plasmina se ha
detallado ampliamente. Durante la reparación del tejido, la Resultante con Asn en N-
fibrina se deposita para formar un coágulo de fibrina. La terminal (Asn-alfa-2-
fibrinólisis es el proceso natural en el que la plasmina disuelve antiplasmina).
un coágulo de fibrina que conduce a la resolución de la cicatriz.
La anti-plasmina Α-2 es un inhibidor de la plasmina y por lo
tanto reduce la tasa de lisis del coágulo de fibrina. La escisión
de la α2-antiplasmina por FAP convierte la α2-antiplasmina en
un inhibidor más potente de la plasmina

Dado el papel de FAP en la remodelación tisular y la expresión

en fibroblastos activados de tejido cicatricial, no es
sorprendente que la expresión de FAP esté asociada con
enfermedades de cicatrización incontrolada, conocidas como
fibrosis. Se ha informado que la FAP está elevada en afecciones
fibróticas que afectan al hígado, los pulmones y el colon.
neuropéptido Y, péptido YY, sustancia P y péptido natriurético
cerebral 32. Los sustratos conocidos de la actividad
endopeptidasa de FAP incluyen colágeno desnaturalizado tipo I
y III (los componentes de la gelatina) [18, 19], enzima de
escisión de antiplasmina α-2, y recientemente descubierto factor
de crecimiento de fibroblastos 21
En última instancia, la fibrosis hepática puede provocar insuficiencia hepática, una afección
denominada cirrosis. Se cree que el inicio de la fibrosis hepática es una lesión crónica de
etiologías tales como una infección por hepatitis viral, enfermedad de hígado graso no
alcohólico o alcoholismo. Con la lesión hepática crónica, las células estrelladas hepáticas,
que normalmente están inactivas y funcionan para almacenar vitamina A, se activan y
comienzan a producir la matriz extracelular responsable de la cicatrización hepática. Las
células estrelladas hepáticas activadas adquieren un fenotipo más parecido a miofibroblasto
La antiplasmina α-2 escindida en el N-terminal es un inhibidor
y expresan α actina del músculo liso (αSMA), proteína ácida fibrilar glial (GFAP) y FAP
de la fibrinólisis más potente que su proteína no escindida y, por
[19]. La expresión intrahepática de FAP, pero no GFAP o αSMA, se correlacionó con el
lo tanto, proponen que el aumento de la FAP circulante puede
grado de fibrosis hepática en pacientes con infecciones virales por hepatitis C [49]. La
ser responsable de los episodios trombóticos y hemorrágicos
actividad de la PAF fue de 14 a 18 veces mayor en los hígados cirróticos en comparación
relacionados con la hemostasia asociados con la cirrosis
con los hígados sanos, y la PAF circulante casi se duplicó en presencia de cirrosis
hepática. Curiosamente, los niveles de FAP se normalizaron con
alcohólica [47]. Shirley Uitte de Willige mostró que la concentración y la actividad de la
un trasplante de hígado exitoso [50, 51]. Un estudio de KH
FAP circulante aumentaron significativamente en pacientes con cirrosis hepática y que estos
Williams demuestra que los niveles bajos de FAP circulante
niveles aumentados se correlacionaron con una mayor escisión de la antiplasmina α-2.
pueden usarse clínicamente para descartar fibrosis hepática
clínicamente significativa en pacientes con enfermedad del
hígado graso no alcohólico.
La fibrosis pulmonar idiopática (FPI) es otra enfermedad de fibrosis incontrolada, esta vez que
afecta al pulmón. Esta enfermedad pulmonar crónica se caracteriza por una fibrosis excesiva
del intersticio pulmonar sin una etiología clara ni tratamientos exitosos. La FAP se regula al
alza específicamente en los focos fibroblásticos y el intersticio fibroblástico de pacientes con
FPI, pero no en el tejido normal adyacente, el tejido pulmonar de individuos sanos o el tejido
pulmonar de pacientes con enfisema centriacinar [53]. La FAP también está regulada
positivamente en modelos de ratón de FPI y los niveles de expresión de FAP en los pulmones se
correlacionan con la gravedad de la FPI [54]. Curiosamente, la IPF se agrava en los ratones
deficientes en FAP, y la restauración de la FAP en los ratones deficientes en FAP redujo
significativamente el contenido de colágeno pulmonar. Por tanto, este hallazgo sugiere que la
FAP desempeña un papel protector en el pulmón y funciona para combatir la fibrosis al
promover la eliminación del colágeno y la degradación de la matriz [55]. Sin embargo, estos
sorprendentes hallazgos se contradicen con un estudio que demuestra que un inhibidor
inespecífico de la FAP (PT-100, Val-boro-pro, Talabostat, BXCL-701) tenía efectos
antifibróticos. En modelos in vivo de FPI, un inhibidor de la FAP ralentizó la enfermedad y
redujo la fibrosis [56]. Si bien las funciones específicas de la FAP en la FPI siguen siendo
inciertas, su implicación en la enfermedad es indiscutible.
 Control a nivel
Control y reparación a organismo con
nivel celular puntos de homeostasis del
Control y reparación a control en ciclo celular sistema inmune
ADN nivel molecular en
síntesis de ADN
puntos de control
Regulación de Se pasan todos estos
la polimerasa puntos de control se
genera cáncer
En una línea celular de carcinoma de pulmón de células
escamosas, la sobreexpresión de FAP promovió la proliferación,
la motilidad y la invasión mientras que, simultáneamente,
aumentaron la señalización de PI3K / Akt y SHH / Gli1

La importancia de estas vías de señalización para promover la

proliferación e invasión celular se confirmó cuando la inhibición
de SHH y PI3K anuló el fenotipo.

El silenciamiento de la expresión de FAP redujo la activación de pRb y reguladores

oncogénicos del ciclo celular, incluidos CCNE1, E2F1 y c-Myc, pero elevó la
expresión de supresores de tumores como p27 y p21. Además, el silenciamiento de
FAP disminuyó significativamente la expresión de PI3K fosforilada, AKT, MEK1 / 2,
ERK1 / 2 y GSK3b, mientras que los niveles totales se mantuvieron sin cambios.
Estos resultados sugirieron que FAP es un regulador aguas arriba de las vías de
señalización PTEN / PI3K / Akt y Ras-ERK en el carcinoma oral de células
escamosas.
Se tomaron varios pasos para mejorar la actividad gelatinolítica
específica de FAP mientras se disminuían las actividades de
gelatinasa de las MMP. En primer lugar, FAP se purificó
parcialmente a partir de los extractos tirando hacia abajo con
agarosa WGA como se describió anteriormente [16, 19, 28]. En
segundo lugar, la actividad gelatinolítica de la FAP se conservó
mientras que la de las MMP se inhibió mediante la inclusión de
EDTA en los tampones de extracción y de incubación del
zimograma [16, 19, 28]. Finalmente, la FAP se eluyó de las perlas
WGA en tampón de muestra de gel que contenía N-
acetilglucosamina y reactivo reductor de ditiotreitol que inhibe
las MMP pero conserva la actividad de la FAP [16, 19, 28] y se
realizó una zimografía.