ENZIMAS DE

RESTRICCIÓN
Keny Davi Alvarado Quiroz
NUCLEASAS
Endonucleasas
• Dentro de la Enlaces
Cadenas Fosfodiester

Exonucleasas
• Extremo Cadena
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Endonucleasas

• Origen Bacteriano
• Secuencias Diana (Corte)
• 4 a 8 nucleótidos
• Metilación (Bacterias)
• Ligasa
• ADN Recombinante
NOMENCLATURA
N°
Endonucleasa
Cepa

Especie

Genero
CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS DE
RESTRICCIÓN

Mg

Palindrómicas
TIPOS DE CORTES
Cohesivas Romas
Pegajoso Misma Posición

Posiciones diferentes Inespecíficas

Cohesión Idónea de Unión No complementariedad

Cortes Romos
FAMILIAS DE ENZIMAS DE
RESTRICCIÓN
Secuencia Diana

Extremos cohesivos similares

2 Fragmentos combinarse manera especifica

FACTORES QUE AFECTAN
Pureza del ADN
Detergentes o Estabilizadores
pH y Temperatura
Grado de Metilación
ALMACENAMIENTO Y
CONSERVACIÓN

-20°C Glicerol
• Evitar perdida
Actividad
SELECCIÓN

Revisar el mapa de
Restricción

Conocer la secuencia
completa

Base de Datos
EFICIENCIA

Condiciones
Optimas

Inserto
CANTIDAD ADECUADA

Aumentar fecha
Concentración
caducidad
de ADN
Próxima

1ug ADN, 60
min, t° optima
http://nc2.neb.com/NEBcutter2/
APLICACIONES

Estudio Gen
Clonación
• Expresión Diagnostico de Construcción ADN
fragmentos de
• Regulación enfermedades recombinante
• Correlación ADN

Determinación de
Mapas de Bibliotecas Análisis de
Polimorfismos
Restricción Genómicas Paternidad
(RFLP)
CUESTIONARIO
 ¿Cuantas enzimas fueron usadas en la práctica? De qué tipo son?
 ¿Cuantos fragmentos o bandas se obtuvieron y cuales corresponden a que Enzima?, Grafique
las bandas digeridas en el gel de agarosa.
 ¿Por qué se expuso a la muestra conteniendo la enzima a incubaciones de 37° C y 65° C?
 ¿Cuál es la función de las sales en la eficiencia del funcionamiento de las enzimas de
restricción?
 ¿Por qué las enzimas de restricción no atacan el ADN de las bacterias que lo poseen?