Facultad de ciencias de la salud

Escuela profesional de tecnología médica

Especialidad laboratorio clínico y anatomía patológica

PCR convencional, RT- PCR , PCR- RFLP

Docentes: Integrante:
Juan Alexander Pisconte Guerra
Manuel Alberto Feria Zevallos Corra Urbina Cynthia Paola
Risco Bravo Javier Francisco
Curso:

Biología Molecular Diagnóstica Ciclo: VII

PCR CONVENCIONAL
 Definición

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés Polymerase Chain Reaction) es, sin lugar a
dudas, la técnica más importante y revolucionaria en biología molecular, debido a que permite obtener in vitro
millones de copias de un fragmento de ácido desoxirribonucleico (ADN) a partir de una sola molécula.

La PCR se basa en la replicación celular en la que actúan varias proteínas para sintetizar dos nuevas hebras de
ADN a partir de otra que funciona como molde.
 La PCR surgió en 1971 cuando Gobind Khorana
describe la técnica al explicar la replicación de un
Historia
fragmento de ADN usando dos iniciadores.

En un inicio se utilizaba ADN

polimerasa de Escherichia coli pero
era muy inestable a los cambios de
temperatura por lo que se reemplazó
por ADN polimerasas más estables,
encontrándose la Taq polimerasa
aislada de la bacteria Thermus
aquaticus.
Fue en 1983 cuando Kary Mullis y sus
compañeros la llevaron a cabo por primera vez
mientras trabajaban en la fabricación de
oligonucleótidos y en el uso de iniciadores para
la secuenciación de ADN.
 PCR Convencional

Para la PCR convencional solo se necesita

una DNA polimerasa, magnesio,
nucleótidos, primers, el DNA molde que se
desea amplificar y un termociclador.
 PCR Convencional

El l mecanismo de la PCR es tan simple como su propósito:

3) EXTENSIÓN DEL
ADN: Los primeros son
2) ALINEAMIENTO:
extendidos por la DNA
1) DESNATURALIZACIÓN: Los primers se unen a
polimerasa (en dirección 5’ –
del DNA doble cadena (dsDNA) las secuencias
3’), dando como resultado
es desnaturalizado (separado en compatibles en el DNA
dos copias de la molécula
cadenas sencillas) por calor (96 cadena sencilla (40 – 60
original de DNA doble
C°). C°).
cadena (72 C°).
Estas tres etapas
comprenden un ciclo de
amplificación en la PCR.
PCR Convencional
 PCR Convencional

Cada una de las etapas está determinada por una temperatura. Teóricamente el proceso permite generar en
30 ciclos de amplificación más de dos billones de copias de ADN a partir de una sola molécula.
 Ventajas y Desventajas de la PCR

VENTAJAS DESVENTAJAS

● Alta Sensibilidad
● Alta Especificidad
● Poca muestra ● Contaminación
● Sin purificaciones ● Introducción de una
complicadas nueva tecnología
● Rapidez
● Automatización
PCR CON TRANSCRIPTASA
INVERSA
 ● La retro PCR
RT-PCR ● PCR con transcriptasa inversa

Variación del PCR Convencional

Para generar una gran cantidad de copias de ADN,

Se retrotranscribe una hebra de ARN en ADN complementario (ADNc) usando

una enzima llamada transcriptasa inversa y el resultado se amplifica mediante
una PCR tradicional.
Esto es especialmente útil cuando los científicos solo tienen
tejido y quieren estudiar la secuencia de genes.
RT-PCR
¿Qué necesitamos para una RT-PCR?

1 2

3 4

Transcriptasa
Inversa

Polimerasa
Uso de ADNc

● Examinar la composición genética de diferentes tumores.

● Realizar la PCR de manera tradicional y cuantitativa.
● Expresar proteínas únicas.
● Generar bibliotecas de secuencias de ADN que codifican
proteínas importantes.
 Ventajas y Desventajas de la RT-PCR

VENTAJAS DESVENTAJAS

● Disponibles comercialmente.
● Los resultados pueden
● Buena Sensibilidad.
no estar disponibles
● Buena Especificidad.
dentro de un periodo
● Baja probabilidad de un
clínicamente relevante.
resultado falso positivo o
● Son pruebas costosas.
falso negativo.
PCR-
RLFP
 Fragmentos de restricción de longitud
PCR- RFLP polimórfica

Sir Alec Jeffreys

1985
MEDIANTE ESTA TÉCNICA
SE LOGRA:

➢ AMPLIFICACIÓN FRAGMENTOS DE
ADN
➢ TROZOS MAS PEQUEÑOS
➢ ANÁLISIS DE PATRONES DE
BANDAS
 ❏ MAPEO GENÓMICO
❏ PRUEBAS DE PATERNIDAD
❏ DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES
UTILIDAD
HEREDITARIAS.
❏ CRIMINALISTICA
❏ PRUEBAS FORENSE
Procedimiento
Procedimiento