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Restricción
Objetivos
• Luego de haber completado el ejercicio, el (la)
estudiante estará capacitado para:
• Explicar las funciones de las endonucleasas de
restricción.
• Especificar las ventajas de las endonucleasas de
restricción cuando son utilizadas para el estudio
del DNA.
• Enumerar las diversas aplicaciones en el uso de
las endonucleasas de restricción.
• Crear y analizar patrones polimórficos de
endonucleasas de restricción.
Trasfondo
• En los últimos años la biología molecular ha
revolucionado el estudio de los ácidos nucleicos, en
particular el DNA.
• El conocimiento de la estructura del DNA y el desarrollo
de la tecnología de DNA recombinante han permitido la
manipulación del material genético en cualquier tipo de
célula.
• La tecnología de manipulación genética ha sido aplicada
desde bacterias hasta organismos eucariota (e.j. tomate,
maíz y peces).
• La manipulación genética se ha logrado en gran parte por
el uso de las endonucleasas de restricción.
Endonucleasas
• A. Endonucleasas de restricción.
• Enzimas que reconocen una secuencia específica de
nucleótidos y producen un corte en el lugar de
reconocimiento o muy cerca del mismo.
• Ejemplo: XmaI C↓CCGGG
SmaI CCC↓GGG
Endonucleasas y Palíndromes.
La flecha indica el lugar donde la enzima corta el DNA.
Endonucleasa de Secuencia de
restricción reconocimiento
AluI AG↓CT
BamHI G↓GATCC
EcoRI G↓AATTC
HaeIII GG↓CC
HindII GTPy↓PuAC
HindIII A↓AGCTT
PstI CTGCA↓G
HpaII C↓CGG
NotI GC↓GGCCGC
Endonucleasas: Tipos de Cortes
• Terminales truncados: enzimas cortan ambas hebras del DNA
en el mismo punto (HaeIII)
• Terminales pegajosos: enzimas que cortan las hebras de DNA
en una forma escalonada, dejan fragmentos con cierta
capacidad de complementaridad (EcoRI)
• el fragmento sencillo de la hebra pueden parearse a través de
enlaces de hidrógenos a las bases de otro fragmento sencillo
generado por la misma enzima.
• Estas ultimas son usadas para crear moléculas de DNA
recombinante (ver aplicaciones de endonucleasas de
restricción).
Extremos: truncados vs pegajosos
Enzimas de Restricción: Metilación
1) Ingeniería genética.
• A través de la tecnología de DNA recombinante cualquier segmento de
DNA puede ser separado de un genoma y ligado a un genoma de otro
individuo.
• Esta tecnología que se comenzó a utilizar con bacterias, les ha
permitido a los investigadores estudiar con más precisión los genes de
organismos procariota y eucariota.