Informe de Laboratorio N° 5: Técnicas de Tinción - Tinción gram

Universidad El Bosque - Facultad de Ciencias - Programa de Biología

Microbiología 2024-1
Espinosa-Téllez, Samuel, Daza-Castañeda, Wilson, López-Caro, Juan, Rodriguez-Bustos, Ana
Docente: Virginia Roa Angulo
Objetivos logrados:

[1] Se observó el fundamento de tinción de bacterias específicas utilizando la técnica de tinción

de Gram, con el propósito de comprender los mecanismos subyacentes que permiten la retención
de la tinción.

[2] Utilizar la tinción de Gram como herramienta para la identificación bacteriana, aprovechando
la información proporcionada sobre la morfología celular y la disposición de las bacterias.

[3] Reconocer los límites de los cuales nos permite utilizar la tinción gram.

Materiales y Método (Ana 😀):

Resultados obtenidos:

Esta técnica es crucial en el proceso de fijación de microorganismos en la muestra, donde se

produce la muerte celular, preservando la morfología celular y permitiendo su adhesión y tinción
en la lámina.Las bacterias en condiciones normales desarrollan formas definidas, determinadas
en gran medida por la rigidez de su pared celular. Estas formas pueden ser esféricas, ovaladas, en
forma de bastón o espirales. Por lo tanto, es fundamental realizar una observación cuidadosa de
estas características durante el proceso de tinción, ya que la forma celular es uno de los
principales marcadores para la identificación inicial de géneros bacterianos. ( Bou, et al , 2011)

TINCIÓN GRAM- NEGATIVA

En la figura # observada, se distingue una morfología celular alargada, caracterizada por una
forma cilíndrica que se identifica comúnmente como bacilos. Los extremos de estas células
tienden a ser redondeados. Además, se aprecia una disposición de estas bacterias en el entorno,
donde se observa un notable acumulo de las mismas. Esta disposición está influenciada por el
plano de división celular y si la célula hija permanece unida a la madre tras la división celular.
Basándonos en estas características, podemos definir que se trata de una célula con esta
estructura específica. Finalmente, su clasificación se considera negativa, indicada por la
coloración sólida presente en toda la estructura celular. ( Rojas , 2011)

En la figura #Se representa un organismo con una morfología esférica, clasificado en la literatura
como bacilos. Estos organismos pueden variar en su disposición, encontrándose solos, en pares o
en cadenas cortas. Sin embargo, en la imagen se muestra un comportamiento individual de este
organismo. Es importante destacar que la tinción gram actúa de manera diferente en este tipo de
bacterias, ya que producen una capa externa viscosa extracelular conocida como cápsula. Las
cápsulas son estructuras protectoras con diversas funciones, compuestas principalmente por
polisacáridos. Debido a su composición mayoritariamente no iónica y su tendencia a repeler las
manchas, los métodos de tinción simples no resultan eficientes para teñir la cápsula. Sin
embargo, su coloración es posible mediante la fijación a partir del calor, que puede interrumpir o
deshidratar la cápsula, lo que provoca falsos negativos. Este proceso de fijación contribuye a la
observación de la tinción que se aprecia en la imagen. ( Rojas, 2011 )

Por último, en la imagen se presenta un bacilo gram-negativo, cuya identificación se facilita

gracias a las características distintivas de la tinción. Sin embargo, la diferencia más notable que
se observa radica en la distribución de esta bacteria, que tiende a estar más compactada en
grupos, lo que genera espacios blancos en la muestra. A pesar de su apariencia, esta bacteria es
considerada por la literatura como móvil debido a la presencia de un flagelo polar. Entonces,
¿por qué no se evidencia el flagelo en la imagen? Esto se debe a que la técnica de tinción gram
requiere una manipulación más extensa de la bacteria para lograr su coloración. Para ello se
utiliza un proceso para engrosar los bacilos aplicando mordientes coloidales inestables de ácido
tánico, que se depositan sobre estas estructuras y aumentan su diámetro, facilitando su
observación. (Torres , 1996)

Sin embargo, mediante técnicas modificadas de la tinción gram, que requieren menos tiempo y
una manipulación reducida de la bacteria, es posible observar todas estas características,
incluyendo la movilidad mediante flagelos polares. ( Ramires y lozano, 2020 )
TINCIÓN GRAM- POSITIVA

En la figura # observada, se distingue una morfología celular esférica, caracterizada

comúnmente como cocos . Además, se aprecia una disposición de estas bacterias en el entorno,
donde realizan racimos las cuales son uniones de varios cocos por lo tanto el plano de
división celular la célula hija permanece unida a la madre tras la división celular.
La figura # Muestra células esféricas con morfología de cocos, identificadas como grampositivas
por la tinción. Se disponen formando cadenas variables o racimos, con células hijas unidas a la
madre tras la división celular. Las áreas con mayor tinción se deben al fijamiento de la muestra,

concentrando la tinción en esas partes. ( Vasquez , et al , 2011)

En la figura observada, se distingue una morfología celular esférica, comúnmente caracterizada

como cocos. Además, se aprecia una disposición de estas bacterias en el entorno, donde se
denota una mayor densidad y agrupación de ellas en racimo .A primera vista, todas las bacterias
parecen tener una morfología similar. Sin embargo, es importante destacar que estas bacterias
pertenecen a diferentes géneros. Sin embargo, el uso de métodos de tinción de Gram no facilita
la identificación de géneros bacterianos específicos. ( Ramirez y lozano , 2020)
Conclusiones (Felipe):

[1] El uso de la tinción Gram es una técnica fundamental en la microbiología, nos permite
diferenciar bacterias en dos grupos principales (Gram positivas y Gram negativas). Las Gram
positivas tendran una pared celular gruesa de peptidoglicano (observándose en el microscopio de
coloración violeta), mientras que la Gram negativas tendrán una pared celular más delgada, con
una membrana externa adicional (observándose en el microscopio con una coloración rosada).

[2] Gracias al uso de la tinción Gram se logró observar la morfología celular de cada una de las
muestras asignadas en clase, como su forma, tamaño y disposición.

[3] La tinción de Gram no es una prueba perfecta, ya que algunas bacterias pueden tener una
tinción Gram variable o no teñirse adecuadamente, además no es la única prueba necesaria para
identificar una bacteria. Además, en la interpretación se debe realizar con cuidado ya que por lo
general en centros especializados se realizan combinaciones con otras pruebas para obtener un
diagnóstico preciso.

Referencias

Bou, G., Fernández-Olmos, A., García, C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S. (2011). Métodos de
identificación bacteriana en el laboratorio de microbiología. Enfermedades infecciosas y microbiología
clínica, 29(8), 601-608.
Rojas, A. (2011). Conceptos y práctica de microbiología general. Universidad Nacional de
Colombia.
https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/handle/unal/8391/albertorojastrivino.2011.pdf?sequence
=1&isAllowed=y

Ramírez, L. C. C., & Lozano, L. C. (2020). Principios fisicoquímicos de los colorantes utilizados en
microbiología. Nova, 18(33), 73-100.

Torres, M. (1996). Manual práctico de bacteriología médica. Editorial Serviprensa CA Guatemala, 320.

Vázquez, C., Martín, A., de Silóniz, M. I., & Serrano, S. (2011). Técnicas básicas de Microbiología.
Observación de bacterias. Reduca (Biologia), 3(5).