Estudio de la morfología macroscópica y microscópica de diversas especies

microbianas.

Maria Juliana Rueda Delgado1, Ivan Delgado Mayorga2, Laura Johanna Galvis Ruiz3
1. est.maria.rueda@unimilitar.edu.co
2. est.ivan.delgado@unimilitar.edu.co
3. est.laura.galvis1@unimilitar.edu.co
Universidad Militar, Bogotá/Cajicá, Colombia
Microbiología Básica 2021-2
Agosto 21, 2021

Resumen

Los microorganismos tienen diferentes formas de crecimiento macroscópico y microscópico,

por tal motivo se han diseñado técnicas y patrones de crecimiento para una identificación más
rápida. Según lo anterior, en el presente trabajo se caracterizaron tres colonias bacterianas de
Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens y staphylococcus realizando micropreparados
usando la tinción de Gram, además de una observación macroscópica de las colonias. Cada
colonia tuvo características de crecimiento diferentes, sin embargo, eran todas de color
transparente, en los micropreparados se pudo observar que tenían formas diferentes y
agrupaciones partículares para cada muestra. Por otro lado, se observaron cuatro
micropreparados con el fin de identificar únicamente sus características microscópicas en un
aumento de 100x. Acá se observaron tres partes de una célula de bacillus, su estructura
general, sus endosporas y cápsula, mientras que la bacteria de Lactococcus lactis se observó
como un estreptococos gram positivos.

Palabras clave: Tinción de gram, micropreparado, Bacillus, Pseudomonas, staphylococcus

Abstract

Microorganisms have different ways of macroscopic and microscopic growth, this is why
science have designed several techniques and growth patterns for faster identification.
According to the above, in the present paper three bacterial colonies of Bacillus subtilis,
Pseudomonas fluorescens y staphylococcus were characterized by performing micro
preparations using the Gram stain technique, in addition a macroscopic observation of the
colony was carried out. Each colony had different growth characteristics, however, each of
them were colourless, dissimilar shapes and clusters were seen in the micro preparations of
each bacteria. Secondly, other four micro preparations were analyzed in order to uniquely
identify their microscopic characteristics at 100x magnification. In this section the general
structure, endospores and capsid of a bacillus strain were observed, whereas the bacteria
Lactococcus lactis was seen as a gram positive streptococcus.

Keywords: Gram stain, micro preparation, Bacillus, Pseudomonas, staphylococcus

 INTRODUCCIÓN
Las células bacterianas tienen una gran
variedad de formas, sin embargo, las
especies mejor estudiadas y más comunes
son las esféricas o aquellas con forma de
bastón. La forma distintiva de la mayoría
de las bacterias se debe a su pared celular
o de peptidoglicano, el cual conserva la
forma que toma la célula. Por ello, el
estudio de la morfogénesis bacteriana se
centra en este componente de la envoltura
celular (Pichoff & Lutkenhaus, 2007).
Para la observación de bacterias se realiza
tradicionalmente la tinción Gram y la
microscopía de luz. Con esta técnica las
bacterias se clasifican en Gram positivas y
Gram negativas de acuerdo a las
diferencias fundamentales en la estructura
de sus paredes celulares. (Carroll et al.,
2016). Las bacterias que se tiñen de color
rosado se clasifican como Gram negativas,
estas presentan paredes celulares
compuestas mayormente de
lipopolisacáridos (LPS) en la parte de la
membrana externa, la cual es una
membrana lipídica unida a una única capa
de peptidoglicano, dejando un espacio
periplástico entre esta y la bicapalipídica
interna, esta capa de LPS no permite la
fijación del cristal violeta. Por otro lado,
las gram positivas teñidas de morado
cuentan con una pared celular más sencilla
formada por una capa tridimensional de
peptidoglicanos la cual deja un espacio
lipoteicoico hasta llegar a la bicapa
lipídica y permite la fijación del cristal
violeta el cual le da su color característico
(Willey, Sherwood, & Woolverton, 2014)..
Los microorganismos también se pueden
identificar de una forma macroscópica, las
especies bacterianas individuales suelen
formar colonias de tamaño y aspecto
característicos. Para el presente estudio se
desarrollaron colonias en superficies de
agar y se incubaron en condiciones
controladas que permiten el crecimiento de
la población bacteriana. Factores como lo
son la difusión, disponibilidad de
nutrientes, la quimiotaxis bacteriana, la
presencia de líquido en la superficie, la
dureza del agar y también la comunicación
entre células son los encargados de
determinar los patrones de crecimiento, el
tamaño y la forma de la colonia. Las
diferentes formas de patrones de desarrollo
son de gran utilidad para identificar una
colonia basándose en su aspecto general y
utilizarla para obtener un cultivo puro
(Willey, Sherwood, & Woolverton, 2014).
De acuerdo a lo anterior, el presente
artículo tiene como objetivo estudiar la
morfología macroscópica y microscópica
de las bacterias mediante las características
morfológicas de las colonias. Así mismo,
analizar la importancia del uso de las
tinciones para una correcta identificación y
observación de microorganismos teniendo
en cuenta las diferentes composiciones
químicas de sus paredes celulares.
MATERIALES Y MÉTODOS
I. Análisis macroscópico y
microscópico de colonias
bacterianas y micropreparados.
Se tomaron tres colonias bacterianas
diferentes para realizar una descripción
macroscópica, estas corresponden a
Pseudomonas fluorescens, Staphylococcus
y Bacillus subtilis . La morfología
macroscópica de las colonias se clasificó
según los criterios de: forma de
crecimiento, elevación de la colonia,
características de los bordes, pigmentación
y textura (consistencia). Por otro lado en el
análisis microscópico se realizó tinción de
gram, para determinar si eran gram
positivas o gram negativas, y su respectiva
morfología. Estas características se
determinaron según lo indicado en la
literatura.
Por otro lado, se hizo un análisis
microscópico de cuatro micropreparados,
en los que se observaron Lactococcus lactis,
endosporas, cápsulas y Escherichia coli. La
descripción de estos micropreparados se hizo
tomando en cuenta si eran cocos, bacilos,
cocobacilos o espirilos y si eran bacterias
gram positivas o negativas.
II. Micropreparado y tinción de
Gram.
La tinción de Gram está basada en la
diferente composición química de la pared
celular bacteriana. Esta tiene una serie de
cuatro reactivos que permiten la tinción de
las muestras.
Esta sección se dividió en dos partes: la
primera en la realización de un micro
preparado y la segunda en el
procedimiento de la tinción de Gram.
El micropreparado se realizó tomando una
pequeña muestra de una las colonias
mencionas del primer apartado, para esto
se esterilizó un asa redonda en el mechero
hasta que tomara un color rojo intenso,
cerca del mechero se abrió la caja petri y
con el asa fría en el agar se raspó
suavemente la colonia tomando una
pequeña muestra. Posteriormente, en un
portaobjetos se puso una gota de agua
destilada y sobre esta se esparció la
colonia. Finalmente la muestra se fijó al
portaobjetos pasándola por el mechero
hasta que el agua se evaporara por
completo.
Una vez se tiene el micropreparado se
coloca en la rejilla de coloración para
realizar la tinción de Gram. Cada uno de
los reactivos deben aplicarse de tal forma
que cubran toda la superficie. Se comenzó
con el cristal violeta dejándolo reposar por
un minuto, luego se lavó con agua
destilada. Siguiente a este se agregó Lugol
dejando actuar nuevamente por un minuto
y lavando el exceso con agua destilada.
Posteriormente se cubrió la lámina con
alcohol-acetona durante 30 segundos, se
retira el exceso con agua. Finalmente se
aplicó Fucsina sobre la lámina esperando
un minuto y lavando suavemente con agua
destilada para retirar los excesos.
Una vez completada la tinción de Gram, se
procede a poner la lámina en posición
vertical sobre un papel absorbente cerca
del mechero. Cuando esta se secó se
realizó el montaje en el microscopio
comenzando con observaciones en 4x y
terminando en 100x añadiendo una gota de
aceite de inmersión sobre la lámina para
ello.
III. Método de cultivo por estría.
Se procedió a formar una colonia de
bacterias en un agar nutritivo nuevo. El
objeto de muestra fue el celular. La
muestra se tomó con un hisopo
ligeramente humedecido con agua
destilada y se pasó sobre el celular. Cerca
del mechero se abrió la caja de petri con el
agar nutritivo para pasar en forma de “S”
el hisopo sobre el agar, esto debe realizarse
suavemente para no dañar el agar. Una vez
realizado el cultivo, la caja se cerró, rotuló
y se selló con papel vinipel para llevarla a
incubación por quince días.
RESULTADOS
A continuación se muestran todos los
resultados que se obtuvieron en el presente
estudio, los cuales fueron dispuestos en
diferentes tablas.
1. Observaciones de las bacterias.
Se realizaron las observaciones de
Pseudomonas fluorescens, Staphylococcus
y Bacillus subtilis teniendo en cuenta las
características ya mencionadas. La
información obtenida se puede ver en la
tabla 1. La descripción de manera
detallada de cada uno de estos resultados
se encuentra a continuación.

Tabla 1. Resumen de las observaciones macroscópicas de las bacterias asignadas a cada

integrante del grupo
Forma de
Colonia Elevación Bordes Pigmentación Textura
crecimiento

1. Bacillus Sin
Circular Plana Ondulada Cremosa
subtilis pigmentación

2.
Sin
Pseudomonas Puntiforme Plana Lisos pigmentación
Cremosa
fluorescens

3. Lobulado y Sin
Puntiforme Plana Cremosa
Staphylococcus filamentoso pigmentación

Después de las observaciones 2. Pseudomonas

macroscópicas y una vez realizada la Negativo Bacilococos
fluorescens
siembra y tinción de una muestra del
3. Estreptococ
cultivo de las bacterias, se dio paso a las
Staphylococcus Positivo os
observaciones microscópicas. Dichas
observaciones se realizaron siguiendo las
1.1 Bacillus subtilis
características mencionadas en la
A. Observaciones macroscópicas.
metodología del presente estudio. De la
La colonia de Bacillus subtilis (figura 1)
misma manera, la información de las tres
se encontraba en un agar nutritivo el cual
bacterias se agrupó en la tabla 2 que se
se cultivó el 6 de agosto del 2021.
encuentra a continuación.
Fig 1. Fotografía de vista superior de una
Tabla 2. Resumen de las observaciones
colonia de Bacillus subtilis
microscópicas en 100x de las bacterias
asignadas a cada integrante del grupo

Micropreparado Gram Morfología

1.Bacillus Estreptobaci
Positivo
subtilis los
 aumentos bajos no aportaron información
relevante para el presente estudio. Sin
embargo, al observar en 100x (figura 2) se
lograron determinar sus características
morfológicas microscópicas. Inicialmente
se observó que B. subtilis es una bacteria
gram positiva por su fuerte coloración
morada . La forma alargada y de bastón de
los microorganismos permitió definir su
forma de bacilo, sin embargo se agrupaba
en forma de largas cadenas.

En las observaciones iniciales de la Fig 2. Fotografía microscópica de una

colonia de B. subtilis (figura 1) se micropreparado de Bacillus subtilis
lograron apreciar sus características observado en 100x
morfológicas macroscópicas,
determinando que su forma de crecimiento
es circular, esto debido a que se observan
agrupaciones circulares grandes de las
diversas colonias bacterianas; por otro
lado, no se observó elevación lo que
permite definir que es plana. En cuanto a
la forma de los bordes se aprecian leves
ondulaciones, por tanto, se determinó que
tenía bordes ondulados. Una vez se tomó
la muestra para realizar el frotis bacteriano
no se observó pigmentación y se identificó
que tenía una contextura cremosa, esto
debido a su consistencia cuando se pasó el 1.2 Pseudomonas fluorescens
asa. A. Observaciones macroscópicas.
B. Observaciones microscópicas. La colonia asignada correspondía a la
especie Pseudomonas fluorescens, esta se
Una vez se realizó el análisis encontraba en un agar nutritivo cuyo
macroscópico, se llevó a cabo la tinción cultivo fue realizado el 06 de agosto de
de gram según lo mencionado en la 2021.
metodología del presente estudio y
posteriormente la caracterización Fig 3. Fotografía de vista superior de una
microscópica. colonia de Pseudomonas fluorescens.
Luego de terminar la tinción de gram se
procedió a realizar el montaje y respectiva
observación en el microscopio y el
respectivo análisis. Se inició observando
desde el menor aumento 4x, siguiendo con
10x y 40x, estas observaciones en
 más oscuros que otros, sin embargo, a este
aumento ya se conoce que P. fluorescens
es una bacteria gram negativa debido a su
fuerte coloración rosada.

Fig 4. Fotografía microscópica de una

micropreparado de Pseudomonas
fluorescens observado en 4x.

En el análisis macroscópico realizado a la

colonia se pudo observar que el
crecimiento de la bacteria es puntiforme,
ya que se observan varios puntos
completamente circulares que seguían un
patrón de siembra. Los bordes se La siguiente observación se hizo a 40x ya
observaron completamente lisos sin que para el caso de este micropreparado la
irregularidades en toda la colonia. En diferencia entre 4x a 10x no era
cuanto a la elevación de la colonia, ésta se significativa, debido a que se seguía
veía completamente plana sobre el agar apreciando una capa rosada muy densa en
por lo que se caracterizó como plana. Al la que no se observaban bien a los
momento de tomar la muestra de la colonia microorganismos, por tanto no aportaba
con el asa se sentía con una consistencia información relevante. En el aumento de
cremosa. Finalmente y como se puede 40x se pueden ver las bacterias con mucha
observar en la figura 3 la colonia de más claridad, sin embargo su morfología
Pseudomonas fluorescens no presenta aún no se podía apreciar (figura 5).
ninguna pigmentación, por lo que es
transparente. Fig 5. Fotografía microscópica de una
micropreparado de Pseudomonas
B. Observaciones microscópicas. fluorescens observado en 40x.
Luego de realizar la caracterización
macroscópica de la colonia, se hizo el
micropreparado de la misma para realizar
un análisis microscópico de los
organismos de Pseudomonas fluorescens.

La muestra se observó a diferentes

aumentos. Se comenzó desde el menor
aumento siendo este el de 4x. Como se
En la última observación con un aumento
observa en la figura 4 no se pueden
de 100x las bacterias pueden diferenciarse
diferenciar a los organismos, solo se
adecuadamente ya que se tiene la mejor
observa una gran capa rosada con sector
resolución con respecto a los otros
aumentos mencionados. En la figura 6 se
puede ver la morfología de las bacterias,
caracterizándose como cocobacilos ya que
presentaban una forma más ovalada que
redonda o de bastón.
Fig 6. Fotografía microscópica de una
micropreparado de Pseudomonas
fluorescens observado en 100x.
1.3 Staphylococcus
A. Observaciones macroscópicas.
La bacteria en este caso estaba identificada
con el género de Staphylococcus,
sembrada en un agar nutritivo desde el 06
de agosto de 2021.
Fig 7. Fotografia de vista superior de una
colonia de Staphylococcus
Según lo observado (figura 7), esta colonia
presentó un crecimiento de manera
puntiforme siguiendo la ruta de siembra
realizada, la elevación de la colonia era
mínima, caracterizándose como plana, los
bordes del cultivo eran muy variables en
cada área de la caja de petri y además no
se percibieron con claridad, por lo tanto el
cultivo se observó sobre el microscopio a
4x. Así se identificaron dos aspectos
diferentes de borde, uno que se identificó
fácilmente como lobulado, puesto que
presentó curvas que sobresalieron de
manera irregular como se ve en la figura 9
y, el otro tipo de borde, se identificó como
filamentoso, el cual presentaba finos
filamentos alrededor del área de la colonia,
creando una superficie lateral rugosa e
irregular como se ve en la figura 8. En
cuanto a la pigmentación, este cultivo no
presentó ningún tipo de coloración y
mediante la manipulación de la colonia
con el asa de siembra, se logró determinar
que tenía una textura cremosa.
Fig 8. Fotografía en el microscopio de un
borde filamentoso de una colonia de
Staphylococcus
Fig 9. Fotografía en el microscopio de un
borde lobulado de una colonia de
Staphylococcus
 Fig 11. Fotografía microscópica de un
micropreparado de Staphylococcus.
Observado en 10x

B. Observaciones microscópicas.
Después de realizar el análisis
macroscópico del cultivo, se inició con el
En la observación en 40x se puede ver la
análisis microscópico de una siembra de la
apariencia de la bacteria, en la cual se
bacteria. Inicialmente se observó en
evidencia dispuesta por todo el área
enfoque a 4x, aquí se podía ver una
seleccionada en múltiples grupos de lo
pequeña área de la colonia bacteriana,
que se pensaba que podían ser
como se ve en la parte inferior de la fig 10,
cocobacilos, ya que se ven en forma
la cual presentaba una coloración
ovoide o cocos un poco alargados, tal
azul-violeta. No se logran distinguir otras
como se puede observar en la figura 12
estructuras bacterianas.
Fig 12. Fotografía microscópica de un
Fig 10. Fotografía microscópica de un micropreparado de Staphylococcus.
micropreparado de Staphylococcus. Observado en 40x
Observado en 4x

Finalmente, en la observación en 100x

En la observación en 10x, se ve con un
(figura 13) con aceite de inmersión, se
poco más detalle el área de la bacteria
puede observar que la forma de las
observado anteriormente, sin embargo,
bacterias no es cocobacilos, sino, cocos,
sigue sin distinguirse una estructura o
los cuales están organizados en filas uno
morfología precisa, la coloración morada
junto al otro formando estreptococos,
es más evidente, como se puede ver en la
algunas cadenas que forman son más
figura 11.
largas que otras, sin embargo en todas los
cocos persisten en el mismo tipo de
organización paralela en un solo plano.
Además todos tienen una coloración
morada, por lo cual se establece que son
bacterias gram positivas.
Fig 13. Fotografía microscópica de un
micropreparado de Staphylococcus.
Observado en 100x
una forma de cocos divididas en planos
paralelos unidas una tras de otra formando
una cadena, por lo que se identificaron
como estreptococos. Adicionalmente, la
tinción de gram para esta bacteria la
identifica como una bacteria gram positiva
debido a su coloración morada..
Fig 14. Fotografía microscópica de
Lactococcus lactis, estreptococos gram
positivos. Observada en 100x

2. Observaciones de los micro

preparados dispuestos en el
laboratorio B. Micropreparado 2
En la tabla 3 se presenta un resumen de los
resultados y a continuación una El segundo micropreparado analizado fue
descripción detallada de cada uno de ellos el de Escherichia coli, como se observa en
la figura 15 son bacilos gram negativos de
Tabla 3. Resumen de todos los gran tamaño lo que facilitó su
micropreparados observados en 100x identificación. Su tinción gram indica que
Micropreparado Gram Morfología tienen una alta presencia proteica en su
pared celular dándoles esa forma de bacilo
1. Lactococcus Positivo Estreptococ y color rosado. La zona de la figura 15 que
lactis os
se ve de un color rosado muy oscuro se
2. Escherichia Negativo Bacilos debe a la alta concentración de
coli microorganismos en ese punto.
3. Endosporas Negativo Bacilos
Fig 15. Fotografía microscópica de
4. Cápsulas Negativo Bacilos Escherichia coli, bacilos gram negativos con
coloración rosada. Observada en 100x
A. Micropreparado 1

En la figura 14 se pueden observar las

características morfológicas de la bacteria
Lactococcus lactis. La bacteria presenta

C. Micropreparado 3
En la figura 16 se caracterizó la
morfología microscópica de unos bacilos
gram negativos agrupados en filas
divididos por planos paralelos lo que se
conoce como estreptobacilos, estos son
gram negativos por su color rosado.
Dentro de los bacilos se puede observar
una forma circular u ovalada teñida de
color oscuro, estas corresponden a las
endoesporas de los bacilos. La presencia
de estas hace creer a primera vista que la
bacteria observada se trata
estreptococos, sin embargo, al mirar
detalladamente se observa la forma de
bacilos teñida un tono rosado más claro.
Fig 16. Fotografía microscópica de
endosporas en bacilos gram negativos.
Observada en 100x
D. Micropreparado 4
Finalmente, se observaron las cápsulas de
unos bacilos gram negativos bajo un
aumento de 100x. Las cápsulas se
observan en la figura 17 de un color
blanco que resalta sobre el colorante
rosado, tienen una forma bien definida y
facilita la determinación morfológica de la
bacteria ya que se ve claramente la forma
de bacilo. Esta es la capa más externa que
tiene una bacteria formada por polímeros
orgánicos.
Fig 17. Fotografía microscópica de cápsulas
en bacilos gram negativos. Las cápsulas se
distinguen como el área blanca que rodea la
bacteria. Observada en 100x
de
DISCUSIÓN
De acuerdo a los resultados descritos en la
sección anterior, se observó que los
aumentos de 4x, 10x e inclusive 40x no
aportaron información relevante en la
descripción microscópica de los
microorganismos objeto de estudio. Esto
se debe a que en aumentos como 4x y 10x
la apertura numérica es baja, normalmente
de 0.1 y 0.22 respectivamente para cada
aumento; dicha apertura numérica juega un
papel clave en el poder de resolución del
microscopio, lo que determina la nitidez,
claridad y riqueza de detalles observables
de la imagen. En el caso de 40x la apertura
es de 0.65, la cual es alta, sin embargo no
se utilizó aceite de inmersión en este
aumento lo que redujo su poder de
resolución (Montalvo, 2010).
Por otro lado, el aumento de 100x permitió
definir a detalle la morfología
microscópica de los organismos, para estas
observaciones el uso de aceite de
inmersión fue clave, esto debido a que el
aceite de inmersión contribuye a disminuir
la refracción de la luz causada por el aire
que se ubica en medio del condensador y
la lente objetivo en este caso la lente de
100x; gracias a que el índice de refracción
del aceite es igual a la del condensador y la
lente, lo que permite una trayectoria
homogénea de la luz (Cargille, 2006).
En microbiología el estudio de las
bacterias no solo se aplica en un campo
microscópico, conocer las características
macroscópicas que tienen las bacterias
puede facilitar su identificación. Sin
embargo, sólo entre el 1 al 5% de los
microorganismos son cultivables en los
laboratorios (Willey, J. M., 2016). Las
bacterias tienen diferentes capacidades de
agregación a un nivel macro y según su
tendencia de agregación se puede tener
una idea del comportamiento microscópico
de las mismas (Wang et al, 2012).
Los cultivos permiten el aislamiento del
organismo para realizar su identificación y
estudiar la sensibilidad a compuestos
químicos antimicrobianos y así mismo
permite una aplicación de marcadores
epidemiológicos. Para realizar una colonia
en el laboratorio se deben tener en cuenta
muchos factores de nutrición de cada
microorganismo, bien sea para que crezca
en un medio universal o realizar un cultivo
específico para una bacteria que se
necesita caracterizar (Bou et al 2011). Los
medios especializados pueden indicar qué
tipo de bacteria se está aislando según sea
la respuesta de crecimiento que tienen
sobre un medio con características
químicas específicas y un ambiente
controlado, ofreciendo grandes pistas de
qué especie o familia de bacteria se trata
(Willey, J. M., 2016). El estudio
macroscópico de las bacterias sobre un
medio de cultivo sólido suele formar
colonias con un tamaño y apariencia
particulares para cada especie, presentando
unas formas complejas como sencillas.
Estas colonias pueden variar sus patrones
de crecimiento debido a muchos factores
como la difusión y disponibilidad de
nutrientes, quimiotaxis y la dureza del agar
(Willey, J. M., 2016).
Teniendo en cuenta el procedimiento
realizado en el presente estudio, la fijación
de la muestra al portaobjetos es un paso
fundamental antes de realizar la tinción de
Gram. El propósito de realizar la fijación
es el de preservar las estructuras internas y
externas de los microorganismos cuando
van a ser observados bajo el microscopio.
Este proceso busca desactivar enzimas que
puedan perturbar la morfología y
endurecimiento de las estructuras celulares
durante la tinción y observación de la
placa. En este estudio se hizo una fijación
por calor, la cual se toma una pequeña
muestra de una colonia bacteriana usando
un asa esterilizada y se reparte sobre un
portaobjetos con unas gotas de agua
destilada. El frotis se calienta ligeramente
en un mechero por periodos de diez
segundos para no sobrecalentar la muestra
(Willey, J. M., 2016).
De acuerdo con las observaciones
microscópicas realizadas del frotis de
Pseudomonas, se estableció que pesar de
haber logrado la caracterización
morfológica de la bacteria se puede
observar que durante la siembra del
micropreparado se agregó una alta
cantidad de muestra de la colonia, lo que
dificulta una observación clara y precisa
de los mismos, se puede considerar que
esto se debe a un exceso en la cantidad de
muestra y grosor del frotis en el
portaobjetos. En relación con las
observaciones realizadas de
Staphylococcus, se evidencia que aunque
se puede identificar la presencia de la
bacteria, en cierta parte de la muestra hay
residuos de colorante, lo cual dificulta la
visibilidad precisa del organismo, no
obstante se logró distinguir la morfología
de la bacteria como estreptococos, aunque
se podía confundir con la forma de
estafilococos. Estos mismos patrones de
acumulación de tinte y microorganismos
se observan en la muestra de B.subtilis, sin
embargo, la observación fue un poco más
clara debido a la organización de los
mismos. Dichos resultados, se creen que
se deben a posibles errores en el
laboratorio durante la realización de la
tinción Gram y el micropreparado.
Respecto a los resultados obtenidos de las
descripciones macroscópicas y fueron descritas como cocos gram
microscópicas de B.subtilis se coincide
con los reportado por Realpe, et al (2002)
en cuando a la forma de los bordes, tipo de
crecimiento y elevación de la colonia, sin
embargo se difiere en la caracterización de
la textura de la colonia, en la que se
menciona que puede ser mucoide,
probablemente se difiere por una mala
observación durante la misma. Calvo y
Zuñiga (2010) mencionan que Bacillus es
un género de bacterias Gram positivas con
forma de bacilo los cuales se agrupaban en
cadenas, lo que confirma lo observado en
este estudio.
Las observaciones macroscópicas y
microscópicas realizadas de P. fluorescens
concuerdan con las características
reportadas por Castillo (2012). Se describe
que estas bacterias son bacilos gram
negativos ligeramente curvados o
completamente rectos, sin embargo, en las
cepas observadas en el presente trabajo
estas tenían una forma más alargada y
curva, esto posiblemente porque no se
tenía una buena vista de las mismas. En las
imágenes de microscopía electrónica de
barrido reportadas por Run-run et al
(2021) se describen a las bacterias como
bacilos curvos.
En relación a la identificación
microscópica que se realizó de
Staphylococcus, estos coincidieron con los
resultados obtenidos en estudios previos
sobre la caracterización morfológica de
bacterias del mismo género, uno de estos
estudios es el realizado por Habib et al., en
2015, donde caracterizaron especies de
Staphylococcus aureus aisladas de diversas
fuentes de animales como cabras, perros,
búfalos, caballos, aves y seres humanos, y
positivos, que se presentan en pares, sin
movilidad, ni formación de esporas y
tampoco encapsulados, lo cual corrobora
lo presentado anteriormente en los
resultados.
Durante muchos años la tinción de Gram
ha sido una técnica básica en los
laboratorios de microbiología y aún es
considerada un elemento de alta
complejidad según el programa de
Enmiendas de mejora de laboratorio
clínico (CLIA). Se considera una técnica
compleja debido a la naturaleza del
proceso y a la subjetividad de la
interpretación de resultados, lo cual
contribuye a la incidencia de errores (Linoj
et al., 2016).
Los errores son a causa de diferentes
factores, como lo puede ser la mala calidad
de la muestra, la incorrecta preparación e
interpretación del frotis (Linoj et al.,
2016). En cuanto a la calidad de la
muestra, es importante que los cultivos aún
esten frescos ya que los cultivos antiguos
tienden a perder las paredes celulares de
peptidoglicano, lo que predispone a las
células gram positivas a ser gram
negativas (Tripathi et al., 2021). En
relación a la cantidad de la muestra, es
necesario que la cantidad de células
utilizadas para el frotis sean suficientes
para que los organismos puedan ser
visibles en un portaobjetos; deben
presentarse en concentraciones de 10⁴ a
10⁵, además de esto es importante realizar
un correcto frotis sobre el portaobjetos,
asegurándose que el grosor sea mínimo,
sin superposición de células, para que la
interpretación no resulte complicada
(Sandle). Otro error en el procedimiento es
el tiempo de coloración, por lo que es
fundamental que la tinción se realice con
un seguimiento muy detenido para evitar
una decoloración insuficiente o una
coloración excesiva (Tripathi et al., 2021).
En cuanto a la interpretación, el error
principal es identificar erróneamente los
gram positivos como gram negativos, esto
se debe a que las bacterias gram positivas
pueden perder su capacidad para retener el
cristal violeta y teñirse como gram
negativas por un daño en sus paredes
celulares. El otro caso en errores de
interpretación, es que las bacterias gram
negativas se presentan como gram
positivas, esto generalmente se debe a que
el frotis es demasiado espeso, provocando
que los organismos no se decoloren por
completo (Sandle).
CONCLUSIONES
Los aumentos juegan un papel clave en la
caracterización microscópica de las
bacterias. Los aumentos de 4x y 10x no
permiten una caracterización de los
individuos, sin embargo a partir de 40x se
logran observar a detalle y describir los
microorganismos, donde el aceite de
inmersión es fundamental para el proceso.
Los resultados obtenidos respecto a la
caracterización microscópica de B.
subtilis, P fluorescens y staphylococcus,
coinciden con lo reportado en la literatura.
Respecto a la caracterización
macroscópica de B. subtilis se difiere con
lo reportado en la textura de la colonia,
esto puede deberse a un error durante el
análisis.
Se logró realizar las caracterizaciones
morfológicas, tanto macroscópicas como
microscópicas de todas las bacterias
tratadas. De esta manera, se interpretó
como se ven las diferentes formas de
crecimiento y demás características de las
colonias, así mismo, mediante la tinción de
Gram se percibieron las clasificaciones
que pueden tener las bacterias, que son
gram positivas y gram negativas de
acuerdo a las coloraciones que presentan
siguiendo la composición de sus paredes
celulares.
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