UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

CRISTOBAL DE HUAMANGA
ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE MEDICINA
HUMANA

MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS (COLORACIÓN

GRAM Y ZIEHL NEELSEN)

Alumno: Culqui Gomez Elvis Brady

Docente: Mg. Nilda Apayco Espinoza

Serie: 300

Grupo: Martes 3:00 – 5:00 pm

AYACUCHO-PERÚ

2017
 PRACTICA DE LABORATORIO 3
1. Conocimientos previos (vocabulario)
1 Coloración Principios de la técnica:
Gram Se fundamenta en las paredes celulares, las bacterias Gram
negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con
mayor facilidad que las Gram positivas. La razón es la
menor cantidad de mucopéptido de las paredes de las
bacterias Gram negativa(1)

Utilidad principal:
Permite diferenciar microscópicamente a las bacterias en
gram positivas y gram negativas además de poder observar
el tamaño, forma y/o agrupación bacteriana, la reacción
tintorial y el germen predominante en una infección.(1)
2 Coloración Principios de la técnica:
de Zielh Se basa en la propiedad de las paredes de las bacterias que
Neelsen contienen ácidos grasos que confieren la propiedad de
resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la
tinción con colorantes básicos, requiere calentamiento para
que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene
ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de
modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias.
Las bacterias que resisten la decoloración se tornan de
color rojo.(2)

Utilidad principal:
Usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol
resistentes (BAAR) , como M. tuberculosis o el Phylum
Apicomplexa (coccidios intestinales) (2)

¿Qué técnica de coloración se utilizó para la diferenciación de bacteria

gran positivas y Gram negativas y en qué tipos de muestras? Sustente los
principios de dicha técnica , mediante referencias bibliográficas
 La técnica utilizada fue la coloración de Gram, esta técnica se basa en
las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares en
especial del peptidoglucano en las bacterias gram positivas esta capa es
más gruesa y en las gram negativas es delgada.(3)

 En las gram negativas La capa de peptidoglucano que posee es

demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal
violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se
escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Por el contrario, las
bacterias gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y
con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción
del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros,
cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal
violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violeta.(4)
En un cuadro indique 10 nombres de bacterias que pertenecen a cada
grupo bacteriano

GRAM POSITIVAS (5) GRAM NEGATIVAS

Staphylococcus aureus.
Streptococcus pyrogenes
Streptococcus aglactiae
Streptococcus faecalis
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus sanguis
Clostridium tetani
Bacillus antracis
Clostridium botullinum
Clostridium perfringes
Neisseria meningitidis.
Neisseria gonorrhoeae
Escherichia coli
Salmonella typhi
Salmonella enteritidis
Haemophilus influenzae
Bordetella pertussis
Brucella abortus
Francisella tularensis
Pasteurella multocida

¿Qué técnica de coloración se utilizó para la identificación de bacilo de

koch y que características debe tener la muestra? Sustente los principios
de dicha técnica, mediante referencias bibliográficas

 Se utilizó la técnica de coloración de Zielh Neelsen, la muestra es el

esputo obtenido por expectoración espontánea, tras un golpe de tos
profunda. Estas muestras son generalmente de consistencia espesa y
mucoide que deben provenir del árbol branquial , de color variable (desde
blanquecinas hasta verdosas) e incluso sanguinolentas.(6)

¿Qué diferencia existe entre las dos técnicas de coloración utilizadas?

Sustente los principios, mediante referencias bibliográficas

 La técnica de coloración gram es para poder observar bacterias de tipo

gram positivas o negativas que están relacionados al peptidoglucano en
cambio la coloración ziehl neelsen se observan bacterias acido
resistentes que están relacionados con ácidos grasos en su pared
celular. (7)

 Ambos son técnicas diferenciales pero utilizan diferentes reactivos y

métodos a la hora de preparar la muestra para poder ser observada en el
microscopio. La técnica de coloración gram utiliza como reactivo principal
cristal de violeta por otro lado la ziehl neelsen utiliza como reactivo
principal la fucsina fenicada. (7)

¿Cómo se realiza el reporte de la presencia BAAR por el método de la

baciloscopia?
INFORME DE RESULTADOS.
Negativo: no se observan BAAR en 100 campos observados.
Positivo +: se observan menos de un bacilo por campo en promedio en 100
campos observados.
Positivo ++: se observan de 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50
campos observados.
Positivo +++: Se observan más de 10 bacilos por campo en promedio en 20
campos observados.

Es necesario encontrar como mínimo 4 BAAR en la Baciloscopia para reportarlo

positiva, si se encuentran de 1 a 3 bacilos esta es la conducta a seguir:
1. Ampliar la lectura a 200 campos.
2. Si lo anterior no modifica la lectura repetir la Baciloscopia.
3. Si se encuentra la misma cantidad de bacilos (1 a 3) se reporta como
negativo poniendo una nota en el diario de trabajo sobre lo observado. (8)

3. Preguntas de reflexión
¿Qué puede manifestar usted, respecto a la ley N° 30287 sobre ley de
prevención y control de TBC en el Perú? Y que otras técnicas se puede
realizar para la identificación del bacilo de Koch

 Este reglamento es de gran relevancia para nuestra sociedad ya que

establece que la atención integral de un paciente con tuberculosis y su
tratamiento son gratuitos y se deben realizar por un equipo
multidisciplinario de salud en todos los niveles de atención. Asimismo, el
estado priorizará la inclusión de las personas afectadas por la
tuberculosis a los programas sociales estatales para mejorar su
condición de vida en alimentación, acceso a empleo, a bonos
habitacionales y a educación gratuita, entre otros.

 Para la identificación de bacilo de koch existen otras técnicas como Los

cultivos que son las más sensibles y más lentas, mientras que las
técnicas moleculares basadas en amplificaciones genómicas tienen una
sensibilidad menor que los cultivos pero son más rápidas. Entre las
pruebas inmunológicas encontramos a la prueba tuberculina y una
variedad de pruebas in vitro (QuantiFERON-TB Gold and T-SPOT.TB).

Manifieste usted porque es importante conocer el fundamento de la

coloración de Gram.

 Es de gran importancia ya que nos permite conocer cómo actúa los

reactivos utilizados en este método frente a la composición de la célula
además es necesario para poder identificar bacterias etiológicas de
alguna patología ya que es frecuente en la parte clínica de nuestra
profesión
Bibliografía:
(1) Santambrosio E, Ortega M. Tinción y observación de microorganismos.
[Internet] OPS. 2009 [actualizado 15 Sep 2009; citado 29 mayo 2017].
Disponible en: http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-
gram.htm#GRAM5

(2) Cordova F, Malbran Tinción de Gram y Baar. [Internet] 2012 [citado 29

de mayo 2017]. Disponible en http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2014/ir141b.pdf

(3) (4) López J, Hernández D, Colín C, Ortega P, González A. Tinción de

Gram: MedlinePlus. [Internet] EE.UU. U.S. National Library of
Medicine2016[actualizado 9 mayo 2017; citado 29 mayo 2017]
http://www.telemicroscopia.ehas.org/assets/diagnostico-tuberculosis.pdf

(4) Dorronsoro I, Martín C, Cabodevilla B, Ojer M, Ruz A. Clasificación de

bacterias infecciosas. [Internet] 2000 [citado 29 mayo 2017]; 18: 215-
218. Disponible en
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1137-
66272007000400006

(5) Aznar J, Safi H, Palomares JC. Brote de tuberculosis por contaminación

en las muestras en un laboratorio de micobacteriología: confirmación por
técnicas moleculares. [Internet] Enferm Infecc Microbiol Clin 1997
[citado 29 mayo 2017]; 15: 144-146. Disponible en:
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-
89582015000100011

(6) Maguire JD, Fenton ME, Susanti AI, Walker JB. Aportes del Instituto
Nacional de Salud para tinciones en microbiologia. Rev Peru Med Exp
Salud Publica. [internet] 2005; [consultado 27 de mayo 2017] 22(4):
102-105 307 disponible en http://repositorio.ins.gob.pe/handle/INS/866

(7) Llaca M, Flores A, Martínez D. La baciloscopia y el cultivo en el

diagnóstico de la tuberculosis extrapulmonar. Rev salud pública y
nutricio. [Internet] 2003. [citado 29 mayo 2017]; 78(1):1‐3. Disponible en:
http://www.respyn.uanl.mx/iv/3/articulos/tbexp_co.htm
 OBSERVACIONES

 COLORACIÓN GRAM
 Se pudo observar las bacterias de Gram positivas como
muestra la imagen de la izquierda (azul) y de Gram
negativos(rojo) como muestra la imagen de la derecha

 COLORACIÓN ZIELH NEELSEN

 En esta coloración se pudo observar bacilos de koch que
posee una forma alargada tal como lo muestra la imagen