INFORME DE PRÁCTICA N°7

1. TITULO: Observación microscópica de bacterias (coloración GRAM)

2. OBJETIVOS

 Colorear adecuadamente las muestras con coloración Gram.

 Reconocer los pasos de la coloración microscópica de Gram.
 Reconocer y diferenciar a las bacterias por su forma, agrupación y coloración
GRAM (+) y GRAM (-).

3. MARCO TEORICO
Hans Christian Joachim Gram
Nace en Copenhague, 13 de septiembre de 1853, fue un bacteriólogo danés, que desarrolló
la tinción de Gram, un método de amplio uso en microbiología que ayuda a clasificar
bacterias y a hacerlas más visibles en el microscopio.
Tinción de Gram
Gram siguió el método de Paul Ehrlich, utilizando una solución de anilina y violeta de
genciana. Después un tratamiento con lugol (yodo en yoduro potásico acuoso) y etanol,
observando que algunas bacterias retenían el colorante (por ejemplo los neumococos)
mientras que otras no lo hacían. Esto permitió dividir las bacterias en Gram-positivas y en
Gram-negativas, clasificación que es de gran utilidad hoy día para elegir un tratamiento
antibiótico.
Tinciones
Son procedimientos usados para teñir, y así visualizar, diferentes microorganismos, entre
ellos las bacterias las cuales no serían visibles al microscopio óptico por ser transparentes.
Las tinciones se efectúan generalmente sobre bacterias desecadas y calentadas para
coagular sus proteínas (proceso de fijación).
Las bacterias grampositivas
Se tiñen de morado porque el colorante queda atrapado en una gruesa capa de
peptidoglucanos a modo de malla entrelazada que rodea a la célula.
Las bacterias gramnegativas
Tienen una capa de peptidoglucanos más delgada, que no retiene el cristal violeta, de forma
que las células se tiñen con la safranina empleada como contraste y se ven rojas.
Diferencias
Las bacterias grampositivas se diferencian de las gramnegativas en la estructura de la pared
celular y en sus componentes y funciones. Los componentes de la pared celular son
también exclusivos de las bacterias, y su estructura repetitiva desencadena respuestas
inmunitarias innatas protectoras en el ser humano.
Las membranas citoplasmáticas de la mayor parte de los procariotas están rodeadas de unas
capas rígidas de peptidoglucano (mureína), salvo en las arqueobacterias y los micoplasmas.
El peptidoglucano es el elemento que proporciona rigidez, por lo que también determina la
forma de cada célula bacteriana. Las bacterias gramnegativas están envueltas además por
una membrana externa.
Una bacteria grampositiva posee una pared celular gruesa que consta de varias capas y está
formada principalmente por peptidoglucano que rodea la membrana citoplasmática. Si bien
es una capa gruesa, es lo suficientemente porosa como para permitir la difusión de
metabolitos hacia la membrana plasmática.
Pequeña reseña
La técnica sufrió ciertas modificaciones por Hucker en 1921 para estabilizar los reactivos y
mejorar la calidad de la tinción, por lo que la tinción de Gram también se conoce como
Gram-Hucker.
Con esta técnica también es posible observar la forma que tienen los microorganismos, es
decir, si son cocos, bacilos, cocobacilos, pleomórficos, filamentosos, entre otros. Así como
también su distribución en el espacio: en racimo, en cadena, aislados, en pares, en tetradas,
etc. Cuando se sospecha una infección bacteriana, la mayor parte de las muestras recibidas
deberán extenderse en lámina portaobjetos y teñirse con Gram para examinarse bajo el
microscopio.
El reporte del Gram orientará al médico sobre qué tipo de microorganismo puede ser la
causa de la infección, antes de obtener el resultado definitivo del cultivo.
En algunos casos la vida del paciente está muy comprometida, por tanto los médicos
necesitan con urgencia el reporte del Gram para colocar un tratamiento empírico, mientras
esperan la identificación del microorganismo. Por ejemplo, si el Gram revela que hay cocos
Gram positivos en el líquido cefalorraquídeo, el médico orientará la terapia inicial con
antibióticos que eliminen a este tipo de bacterias, de acuerdo a los protocolos establecidos
para ello. Una vez que llegue el resultado definitivo con el nombre del microorganismo
aislado y su respectivo antibiograma, el médico evaluará si debe o no cambiar la terapia.
Esta decisión la tomará de acuerdo al estudio de susceptibilidad del microorganismo ante
los antibióticos que está recibiendo y la evolución del paciente.

4. METODOLOGÍA
4.1 Materiales
 Colorante Lugol
 Colorante Cristal Violeta
 Colorante Safranina
 Alcohol acetona
 Lamina portaobjetos
 Barra de coloración
 Asa de Kholle
 Microscopio
 Aceite de cedro
 Goteros

4.2 Procedimientos
5. RESULTADOS
6. DISCUSIÓN

En contraste con la práctica de laboratorio realizada en el campus de Odontología de la

USAL, la tinción realizada en nuestra facultad es la adecuada, y los resultados fueron
similares, y todo se dio con total normalidad.

7. CONCLUSIONES
 Se logró colorear adecuadamente las muestras con coloración Gram
 Se reconocieron los pasos de la coloración microscópica de Gram
 Se lograron reconocer y diferenciar a las bacterias por su forma, agrupación y
coloración GRAM (+) y GRAM (-).

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• Stearn (1957) AN INTRODUCTION TO THE 'SPECIES PLANTARUM' &

COGNATE BOTANICAL WORKS OF CARL LINNAEUS. Reimpreso. EEUU.
• Musto A. (2013) MANUAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA, 2° ed.
Universidad Nacional Arturo Jauretche
• Libenson y Mcllroy (1955) EL DIARIO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS p
22-26. EEUU