Practica Nº 6

Tinción de Gram

Carlos David Tarazona Florez

Julio 2020

Centro de Gestión Agroempresarial del Oriente.

Santander
Tecnólogo en Control Ambiental
Introducción

El aislamiento y caracterización de microorganismos de interés biotecnológico es de

suma importancia porque se ha demostrado que bacterias aisladas del ambiente pueden

ser patógenas para el hombre, animales y plantas. La identificación de los

microorganismos puede permitir evaluar la patogenicidad y virulencia de una cepa, así

como su uso y aplicación en procesos biotecnológicos, si la cepa es un patógeno

verdadero, se deberá reconsiderar su uso en procesos biotecnológicos. (1)

La tinción o coloración de Gram, técnica ideada por el Dr. Hans Gram (2) en el año de

1884, consiste en un método de identificación de microorganismos mediante un

tratamiento con colorantes determinados. Este método permite la diferenciación de los

microorganismos en dos grupos: Gram positivos y Gram negativos. Se basa en la

diferencia del color de las membranas de las células sometidas al proceso de tinción. (3)

En la cotidianidad es el método de mayor facilidad técnica, además de ser más rápido y

económico, comparado frente a métodos como medios de cultivo cromógenos, pruebas

antígeno-anticuerpo (ELISA), PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) y

electroforesis que aunque más específicos, requieren mayores inversiones de tiempo,

económicas, y técnicas. (4)

El objetivo de este trabajo es apropiar los fundamentos de la tinción de Gram y su

utilidad para la identificación de microorganismos con fines biotecnológicos.

Procedimiento

Paso 1: se comienza con la lectura de la descripción y los pasos para realizar el

laboratorio
Paso 2: se hace uso del mechero Bunsen para flamear el asa de punta redonda
Paso 3: se recoge la muestra de bacterias a estudio mediante el asa de punta redonda
previamente esterilizada

Paso 4: se extiende dicha muestra sobre un portaobjetos

Paso 5: se vuelve a esterilizar el asa de punta redonda con la llama del mechero Bunsen
para poder ser guardado posteriormente

Paso 6: se deja secar la muestra en el portaobjetos por 5 minutos

Paso 7: se hace uso del mechero Bunsen para hacer la fijación de la muestra
Paso 8: Se pasa el portaobjetos suavemente dos o tres veces (1-2 segundos) a través de la
llama, No sobrecalentar ya que esto causará distorsión de las células.

Paso 9: Se inunda el portaobjetos con violeta cristal y dejarlo actuar durante 1 minuto
Paso 10: enjuagar el portaobjetos con agua
Pasó 11: Inundar el portaobjetos con yodo y dejarlo actuar durante 1 minuto
Paso 12: enjuagar el portaobjetos con agua
Paso 13: Decolorar la muestra con alcohol durante 5-10 segundos
Paso 14: enjuagar la muestra con agua
Pasó 15: Inundar el portaobjetos con safranina y dejarla actuar durante 1 minuto
Paso 16: enjuagar el portaobjetos con agua
 Paso 17: ver el portaobjetos bajo el microscopio para observar los resultados

En los resultados se pueden visualizar bacilos Gram-negativos (color violeta) y cocos Gram-positivos
(color rosado)
Créditos
Cuestionario

1. ¿Para qué sirve la tinción de Gram?

Esta técnica es muy útil para diferenciar entre distintos grupos de bacterias,
logrando así la facilidad de estudiarlas y clasificarlas de una forma profunda.
Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se
tiñen de una forma u otra al contacto con los diferentes colorantes de la tinción de
Gram, Así, las bacterias que se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram
positivas y las que no Gram negativas.

2. ¿Cómo es la pared celular de las bacterias Gram positivas?

Las bacterias Gram positivas tienen una pared celular muy gruesa, formada por un
gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram,
los complejos insolubles se quedan atrapados entre dichas capas de la pared
bacteriana, dando un color violeta intenso al observarlas al microscopio.

3. ¿Cómo es la pared celular de las bacterias Gram negativas?

Las bacterias Gram negativas están formadas por una pared más fina formada por
menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que
repele la tinción Gram), estos compuestos colorantes sí que se disuelven y pierden
su color. Al microscopio se verán incoloras o de color rosa-rojo, en función de si
se ha añadido la fucsina al final de la técnica de tinción de Gram.

4. ¿Para qué sirve el cristal violeta?

El Cristal Violeta es el colorante primario de la coloración de Gram, este se

adhiere a la pared celular bacteriana, las bacterias Gram positivas absorben este
colorante porque tienen mayor porcentaje de ácido teicoico en su estructura y por
eso adquieren un color violeta en el microscopio, por lo tanto como colorante
primario cumple como función permitir la identificación de bacterias cuya
estructura y composición de pared celular se encuentre mayor proporción y
distribución de ácido teicoico.

5. ¿Para qué sirve el lugol?

El Lugol o Mordiente cumple la función de fijar el colorante primario en la

preparación, es decir facilita la adhesión del cristal violeta en la muestra.
6. ¿Para qué sirve el alcohol acetona?

La función del alcohol-acetona es la quitar el colorante cristal violeta de las

bacterias (decolorante), así si la bacteria conserva el tinte, es Gram positiva y si el
tinte no se mantiene es Gram negativa. Para poner de manifiesto las células Gram
negativas se utiliza una coloración de contraste

7. ¿Para qué sirve la safranina o fushina?

La Safranina es un colorante de contraste en la tinción de Gram, dado que las

bacterias con baja composición de ácido teicoico y alta composición lipídica en su
pared no absorben el cristal violeta luego de ser removido con el alcohol, pero si
absorben este colorante rojizo; las bacterias que absorben este colorante y que
adquieren una tonalidad rosada o rojiza se conocen como Gram negativas. Por lo
tanto este colorante facilita la visualización, identificación y la diferenciación
bacteriana en la muestra.

8. ¿Cuáles son los tipos morfológicos bacterianos que existen? Explique

Cocos

La característica forma esférica u ovalada de los cocos hace que al dividirse la

célula de la bacteria, esta pueda mantenerse unida a otra célula tras dicha división
celular. De esta forma, aunque las bacterias sigan conservando siempre su
independencia celular, formarán distintas agrupaciones según sea el plano de
división único o múltiple:

 Plano de división único: diplococos o cocos en cadena (género Streptococcus).

 Planos de división múltiples: agrupación de cocos en tétradas o racimos (género

Staphylococcus).

Ejemplos:

 Streptococcus pyogenes (amigdalitis).

 Haemophilus influenzae (gripe).

 Streptococcus pneumoniae (neumonía).

 Neisseria gonorrhoea (gonorrea).

 Neisseria meningitidi (meningitis).

 Bacilos

Los bacilos son bacterias que tienen forma de barra, dentro del grupo de los
bacilos es posible diferenciar distintos subtipos de bacterias según sea la longitud
y estructura morfológica de las células:

 Bacilos cortos con forma irregular (cocobacilos).

 Bacilos largos con extremos ondulados (género Bacillus).

 Bacilos curvos con forma de coma (género Vibrio).

 Bacilos agrupados en filamento formando letras chinas (género

Corynebacterium).

Ejemplos:

 Bacillus anthracis (carbunco cutáneo).

 Vibrio cholerae (cólera).

 Lactobacillus casei
.
 Lactobacillus acidophilus.

 Lactobacillus bifidus.

Espirilos

Poseen forma de espiral que caracteriza a las bacterias del grupo de los
espirilos, es fácilmente reconocible al microscopio óptico, siendo posible
distinguir distintos subgrupos según el número de vueltas y la estructura de dichas
espirales. Así, la espiral puede tener forma helicoidal con una estructura rígida, o
bien, con forma de tirabuzón, siendo la estructura más flexible. Esta última
estructura morfológica es característica de las comúnmente conocidas
como bacterias espiroquetas.

Ejemplos:

 Treponema pallidum (sífilis).

 Borrelia (causa fiebre e infecciones en humanos y otros animales, usando
garrapatas, piojos y otros invertebrados como vectores de infección).
 Leptospira (leptospirosis o ictericia de Weill).
Conclusión

La tinción de Gram es de gran importancia al momento de aislar y caracterizar

microorganismos, con este laboratorio que se realizó se pudo lograr el objetivo de la
correcta apropiación de los fundamentos de la tinción de Gram, como el correcto
procedimiento para realizarla, el manejo de los reactivos, la interpretación de resultados y
la clasificación de las bacterias presentes en la muestra analizada, todo esto con el fin de
tener buenas bases al momento de trabajar con microorganismos en proyectos
biotecnológicos.
Referencias bibliográficas

[1] Universidad Simón Bolívar. (2008, Diciembre). Identificación y caracterización de

una bacteria degradadora de parafinas. Dialnet.
https://dialnet.unirioja.es/descarga/articulo/2986546.pdf

[2] Dr. Hans Christian Jaochim Gram: Inventor of the Gram Stain. Madani, Kaivon. 5,
Florida: s.n., 2003, Elsevier, Vol. 10.

[3] L.M Presscott, J.P. Harley, D.A Klein. Microbiology. s.l. : McGraw-Hill, 2002.

[4] T.D Brock, D.W. Smith, M.T Madigan. Microbiología. Barcelona: 4ta ed. Ed.
Prentice Hall,
1987.

Learn.chm.msu.edu. 2020. Gram Stain. [En línea] encontrado en:

http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain/gramstain/index.html [26 Julio 2020].

Kapital Inteligente. 2020. Tinción De Gram. Procedimiento, Materiales Y Vídeo

Explicativo.. [En línea] encontrado en: https://www.kapitalinteligente.es/tincion-de-gram/
[26 Julio 2020].

canalsalud. 2020. ¿En Qué Consiste La Tinción De Gram? -Canalsalud. [En línea]
Encontrado en: https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-
diagnosticas/tincion-de
gram/#:~:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20Gram%20es%20un%20tipo%20de%20t
inci%C3%B3n%20que,t%C3%A9cnica%20se%20denominan%20Gram%20negativas.
[26 Julio 2020].

Es.slideshare.net. 2020. Informe De Tinción Gran. [En línea] encontrado en:

https://es.slideshare.net/edinberto/imforme-de-tincion-
gran#:~:text=Cristal%20de%20Violeta%3Aes%20el,eso%20adquieren%20un%20color
%20Fig. [26 Julio 2020].

ecologiaverde.com. 2020. TIPOS De BACTERIAS: Nombres, Características Y Fotos.

[En línea] encontrado en: https://www.ecologiaverde.com/tipos-de-bacterias-2633.html
[27 Julio 2020].