TEMA 4: Replicación del Genoma procariótico

1. Características de la replicación
• La replicación está vinculada y coordinada con el ciclo celular
• El genoma se replica una vez en cada división celular
• Cada célula hija recibe una copia completa del genoma
• La iniciación de la replicación conduce a la división y segregación cromosómica.
• La unidad de segregación es el cromosoma.
¿Cómo es la replicación?
La replicación es semiconservativa:

• Cada una de las cadenas de ADN sirve como molde de síntesis para una nueva cadena
(se mantiene una cadena para replicar la otra nueva complemetaria).
• Para llegar a esta conclusión se realizo el experimento de Meselson y Stahl: se cultiva E
coli con amonio → usan el N pesado del amonio para sintetizar bases nitrogenadas.
Después se cultivan en N ligero → forman nuevas bases nitrogenadas …
Es ordenada y secuencial
Fases de replicación: iniciación, elongación y terminación.
En procariotas es una replicación monofocal: desde un punto de origen (ori C) se produce la
apertura del ADN. La propia secuencia indica donde se abre el ADN (no depende de la enzima)
pq AT tienen 2 enlaces y CG son tres (más difícil de abrir) → se forman horquillas de replicación
con avance bidireccional (región donde está produciendo la replicación).
Terminación: llega un momento que la horquilla pasa por una serie de secuencias que indican
que la replicación tiene que terminar. Promueve la asociación con proteínas tus (forman una
especie de rosquilla alrededor del ADN que permite que la horquilla pase en un sentido pero no
siga por el otro.
La unidad de replicación (replicón) = unidad de segregación. El replicón es el fragmento de ADN
que tiene todos elementos de control necesario para la replicación

2. División celular y segregación cromosómica

Una vez que se ha duplicado la cadena obligatoriamente tiene que dividirse.
En procariotas:
Se produce un anillo en la mitad de la célula → se genera un septo (pared que divide la célula en
dos). Después se forman dos anillos más alrededor del septo que se desplazan al centro de lo
que será la célula hija. Se divide la célula → se forman 2 células hijas.

3. Polimerización del ADN: ADN polimerasa

Se utiliza una cadena paterna como molde para la nueva cadena.
La cadena molde se separa de la otra. La nueva cadena sufre un ataque nucleofílico → se une
nucleótido trifosfato (complementario al nucleótido del molde) en el extremo 3´. Se libera un
grupo pirofosfato que será degradado por una pirofosfatasa inorgánica.
El crecimiento de la cadena siempre se produce en dirección 5´→ 3´. La polimerasa no puede
actuar en dirección contraria.
DNA polimerasa I: cataliza la adición del nucleótido a la nueva cadena. Tiene un dominio
polimerasa (añade nucleótidos) y 2 dominios exonucleasas (elimina nucleótidos).
Si incorpora un nucleótido incorrecto → no se puede unir al nucleótido complementario (se
produce un abombamiento en la cadena) que hace que la polimerasa avanza más despacio (1000
veces más despacio) → intenta corregir el error.
Para arreglar el error utiliza su actividad exonucleasa (nucleasa que solo es capaz de atacar una
molécula de ADN por sus extremos abiertos. Una endonucleasa corta el ADN por cualquier sitio):

• Dominio exonucleasa 3´→ 5´: función correctora de pruebas. Sentido inverso a lo que
incorpora. Elimina el nucleótido erróneo.
• Dominio exonucleasa 5´→3´: función reparadora. Si una parte del ADN sigue unido a
otra hebra formando una doble hélice, la polimerasa no puede actuar pq no tiene molde.
Levanta la cadena unida con su actividad exonucleasa y añade nucleótidos.
En el centro activo hay 2 cationes de Mg que facilita el ataque nucleofílico.
Discriminador de aminoácidos: residuos que solo permite la unión de desoxiribonucleótidos. No
deja que se unan ribonucleótidos.

Tipos y características de la ADN polimerasas

En procariotas hay 3 ADN polimerasas.
• Polimerasa I: implicada en la reparación del ADN.
• Polimerasa II:
• Polimerasa III: replica toda la cadena de ADN. Tiene acti 3´→ 5´ pero no 5´→3´(es capaz
de reparar errores).?

4. Fases de replicación
Iniciación de la replicación
Hay una secuencia de nucleótidos especifica (4 regiones de 9 pares de bases precedidas de 3
regiones de 13 pares de bases enriquecidas en adenina y timina) para la unión de las proteínas
(DnaA) de iniciación.
Forman una especie de barril en la que se incorporan hasta 30 subunidades (necesita ATP) que
generan una serie de tensiones que provocan la apertura de la doble hélice en dos cadenas
sencillas.
Como la polimerasa solo puede avanzar en dirección 3´→5´. Para generar ese extremo 3´ las ARN
polimerasas colocan cebadores en las cadenas sencillas para poder generar los extremos.
DnaB (helicasa): sigue abriendo la doble hélice generando cadenas sencillas. Una vez que la abre
separa una de las cadenas sencillas
DnaC: ayuda a la B a incorporarse al ADN.
La DnaG (primasa) incorpora 3-4 nucleótidos para aportar el cebador y que la polimerasa pueda
iniciar su actividad.
Tmb se incorporan proteínas SSB para dar estabilidad a las cadenas sencillas e impedir que
proteínas la degraden.
A medida que se abre la estructura se producen unas regiones con superenrollamiento positivo.
Si se sigue enrollando puede darse que esté tan enrollada que la polimerasa no puede seguir
avanzando. Para solucionar el problema actúan las topolimerasas que rompen la cadena y la
desenrrollan.

• Tipo I: produce la rotura de una de las hebras, le da la vuelta y la vuelve a unir. No gasta
ATP, la propia tensión de la cadena genera la E necesaria. Elimina los enrollamientos
positivos delante de la polimerasa.
• Tipo II (girasa): rompe la doble cadena, cambia la vuelta de giro (foto) y disminuye la
tensión. Cambia enrollamientos positivos por negativos. Usa ATP para separar y volver a
juntar las cadenas.
No modifican la química del ADN.
Fragmentos de Okazaki?
Hay dos ADN polimerasas que realizan los fragmentos de Okazaki
ADN polimerasa III es una holoenzima.
La abrazadera deslizante obliga que la ADN polimerasa III esté unida al ADN pq es una enzima
“vaga” que no le gusta hacer carreras largas de nucleótidos? Previene la disocioación de la
polimerasa del ADN.
Una vez que se une a la polimerasa, no se puede soltar.
Proteínas tau

4.1 Fase de iniciación

4.2 Fase de elongación

4.3 Fase de terminación

Las secuecnias Tauson las secunecias terminadoras de la repricacion son el sitio de unión de las
proteínas Ruus. Estas proteínas perminten que la hirquilla de replicación pase en un sentido
poero no permitenq eu pase en el tro sentido. Cuando se encuentrasn las dos horquillas se
produce el desamblaje de los replisomas.
Control de la iniciación por metilacion
La secuencia de iniciación solo está activa cuando se encuentra dimerizada la secuencia
palindrómica (GATC) la adenina está metilada lo que indica que es una cadena de ADN vieja y
puede ser replicada.
Cuando se produce una nueva hebra de AND esta no está metidaa. Esta nueva cadena está
hemimetilada. La DAm metilasa metila la hebra nueva y activa el origen para la replicación
La célula mantiene el origen inactivo gracias a laSegA (secuestrina), que tiene una alta afinidad
por la secuencia GATC hemimetilada, Mientras la SEgA unida a esa secuencia la DAm metilada
no es capaz de metilar la secuencia Una vez que la SegA se desprenden, la Sam metilasa metila
por completo ambas hebras. La metilacion de ambas cadenas permite que la DnaA se una al OriC
y continua la replicación.
Replicación por círculos rodantes
Alguno fagos hacen una mella donde se incorpora una polimerasa que va desdeelxtremo 3´ y
elonga la cadena alrededor de la cadena vieja.
Otra proteína corta el extremo 3´cuando se termina de generar la nueva cadena.
Eucariotas
Relación entre la replicación y el ciclo celular.
La replicación delADN solo ocurre en la fase S del ciclo.
El inicio de la replicación del ADN obliga a la célula a emprender la división → una vez se toma
la decisión no puede volver hacia atrás. Pero se puede frenar en los punto de control.
Una vez iniciada la replicación no puede tener lugar la siguiente división hasta que no se haya
completado.
Fase de latencia: fase en la que no se puede dividir. Ocurre en células estropeadas o altamente
especializadas (ej: neurona)
Diferencias entre procariotas y eucariotas
EN eucariotas la sitnesis del ADNo solo ocupa una pequeña parte del ciclo celular (Fase S).
Muchas de las diferencias son debidas a la mayor complejidad del ADN eucariota
Su tamaño obliga que haya más de un origen de replicación (replicones) que van a llevar a cabo
la replicación de forma simultanea a lo largo del cromosoma.
Diferente empaquetamiento de los cromososomas → el mayor grado de empaqueitamiento
ocurre cuando ya se ha duplicado en ADN.
EL ADN de eucariotas tiene conformación lineal mientras que el de procariotas se encuentra
como ADN circular.

Polimerasas
Las mas imp son delta, alfa (primasa y polimerasa a la vez) y épsilon.
Alfa: tiene 4 subunidades. Dos de ellas tiene act polimerasa y las otras 2 tienen act primasa.
Los procariotas
Replicación del ADN eucariota
Algunos orígenes pueden no usarse en una ronda del ciclo y en otra sí
Siempre se tiene que cumplir que ningún origen de replicación puede iniciarse después de que
se duplique.
Fases de replicación de ADN
Fase de iniciación
Características de las secuencias de origen de replicación
Múltiples origen de replicación
Formación del complejo de replicación
En la fase G1 es reconocido por las proteínas ORC → se une a uno de los orígenes → se ha ce un
reclutamiento de las proteínas cargadoras de helicasas → se unen a cada lado del origen →
atraen a la helicasa (Mcm2-7) → se forma el complejo de prereplicacion pero no está abierto.
Activaciçon
Dos quinasas fosforilan a la helicasa y a los cargadores → se liberan los cargadores y la liberación
de (Cdc45, necesaria para la unió de ADn) → se activa el complejo --< empieza a abrir la
estructura del ADN en dos cadenas simples→ lo hace accesible para las polimerasas
La actividad de la CNK dirnate la fase