¡Síntesis conceptuales de Biología Celular!

Oleeeee (Talleres 1 y 2 –
Primeras 6 síntesis conceptuales)
Seminario 1. Mantenimiento y variabilidad del genoma nuclear.
El genoma humano no es estático, hay mecanismos que median la variabilidad
genética.
Información básica para entender esto

Las líneas son un cromosoma. Estos tienen porciones de ADN repetitivo que no son
codificantes, pero sí tienen información estructural para poder mantener el ciclo vital de los
cromosomas en el ciclo celular.

- Los centrómeros son porciones de los cromosomas que van a permitir que los
microtúbulos se unan durante la división celular, permite que las cromátides hermanas
se separen.
- Las porciones de origen de replicación son puntos en los cromosomas que permiten el
inicio de la replicación
- Los telómeros son los extremos de los cromosomas, fundamentales para mantener su
longitud de los cromosomas.

Mantenimiento del ADN nuclear:

1) Replicación del ADN:
- Se produce en la fase S del ciclo celular
- Es posible gracias a la complementariedad de bases. A-t, C-G Y viceversa. Las
bases se complementan entre sí, es por eso que cada cadena adulta sirve de
molde para una nueva.
- Es un proceso semiconservativo: Una hebra molde se preserva para crear una
nueva; es un proceso integral y dinámico mecánicamente pero se puede dividir
en 3 etapas
- Las cadenas de ADN pueden separarse de forma reversible, por calor/frío en
PCR y por acción de las helicasas en vida real (Desnaturalización-Re
naturalización)
- Se realiza en 3 fases: Iniciación, elongación y terminación.
- Se puede replicar ADN in vitro

El resumen incluye tanto los seminarios como info de los caps correspondientes de la
bibliografía de la cátedra (Cooper + PDFs dados por la cátedra)
 - Hay procesos que hacen la copia más fiel
- Muchas proteínas se asocian en las horquillas de replicación
La replicación del ADN siempre se da en el sentido 5´- 3´ (posición de la desoxirribosa)
siempre se agregan al oxidrilo que se encuentra en la posición 3´. Y para unirse los
nucleótidos cuentan con 3 fosfatos de los cuales pierden 2 para unirse a la cadena. Es
una ventaja evolutiva porque permite que el nucleótido se desprenda si se detecta un
error durante la lectura de prueba y se coloque uno correcto, porque el que tiene la
energía para que se produzca la polimerización es el nucleótido, no la cadena.
Fases de la replicación:
1- Fase de iniciación: Proteínas
reconocen los sitios de origen de
replicación (zonas repetitivas
reconocidas por un complejo
proteico)
2- Fase de elongación: Las ADN
polimerasas polimerizan el ADN y lo
copian
3- Terminación: Cuando todo el ADN se
copió a excepción del extremo del
telómero. La copia del telómero es
mediada por la telomerasa.
Múltiples orígenes de la replicación es
una ventaja evolutiva, hace que el
genoma se copie más rápido.
5´fosfato – 3´hidroxilo

A ver ptm porque esto es difícil de

explicar. Una imagen vale más que mil palabras. El fenómeno de replicación es
bidireccional, mientras que la acción de la polimerización del ADN es
unidireccional, porque sintetiza en sentido 5´-3´teniendo una base 3´-5´, de ahí que
tengamos una cadena adelantada y una atrasada, en la horquilla de la izquierda la
cadena de arriba es la adelantada porque la replicación se da en el mismo sentido
que la apertura de la horquilla, osease la cadena paterna tiene a la derecha el 3´y a
la izquierda el 5´, osease que la ADN polimerasa puede sintetizar hacia la izquierda
una cadena que vaya desde 5´a 3´. Y la cadena de abajo es atrasada porque la ADN
polimerasa tiene que esperar a que aparezca un fragmento de okazaki (Parte roja
de la flecha) para así sintetizar de derecha a izquierda, lo que demora más.

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 ¿Cómo se producen estos eventos?
El complejo de reconocimiento del origen (Complejo proteico[ORC]) va a reconocer
los puntos de origen (G1), zonas del
ADN ricas en adenina y timina. Y va a
permitir a posteriori la unión de
otras proteínas, entre ellas la
helicasa MCM (S), que permite la
separación de las dos cadenas, y
también la unión de las ADN
polimerasas
La ADN polimerasa lee en el sentido
3´-5´y polimeriza dNTPs
(Desoxirribonucleósidos triosfato,
osease A-T, G-C) en el sentido 5´-3´
Al terminar el periodo S se liberal las
helicasas y no pueden volver a
unirse hasta que haya una nueva
etapa de duplicación del ADN
celular. Eso evita la reduplicación del
ADN en un mismo ciclo.
Las ADN polimerasas no pueden iniciar la síntesis de nucleótidos por sí mismas (No
sintetiza denovo), necesitan un oligonucleótido (segmento) con un extremo 3´que
les permita continuar. Este segmento de ARN es creado por la primasa, una ARN
polimerasa dependiente de ADN sintetiza los primers para que las ADN
polimerasas puedan iniciar (Sintetiza denovo) También sintetiza en sentido 5´- 3´
leyendo en sentido 3´- 5´.
(Fase de iniciación)

Fase de elongación:

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 La primasa sintetiza primers para que la ADN polimerasa pueda sintetizar la nueva
cadena. En el caso de la cadena adelantada solo va a sintetizar el primer primer (La
de arriba) pero para la cadena atrasada va a sintetizar múltiples fragmentos de
okazaki, que van a permitir sintetizar la cadena retrasada. Los fragmentos de
okazaki no se van a quedar ahí, van a irse después, este proceso se va a dar gracias
a la acción ARNasa H (Esta ARNasa H es parte de la ADN polimerasa) que degrada al
primer en dirección 5´-3´, después vienen las ADN polimerasas, y reemplaza el
primer (Que ya no está) por la cadena de ADN. La ligasa se va a encargar de luego
unir los segmentos que se sintetizaron a partir de fragmentos de okazaki con los
que se crearon después de que el fragmento de okazaki se retiró.
Algunas ADN polimerasas son también exonucleasas, si el nucleótido está mal, o
pierde la union a través de puentes de hidrógeno con su base complementaria,
entonces la ADN polimerasa con función de exonucleasa lo “corta”, y lo reemplaza
con el correcto.
Hay varios tipos de ADN polimerasas, pero todas comparten dos detalles:
- Todas sintetizan en sentido 5´-3´.
- Todas necesitan de un primer para poder iniciar la síntesis (No sintetizan
denovo).

La única ADN polimerasa que tiene primasa asociada es la alfa. Esta va a sintetizar
el primer fragmento de la hebra nueva luego del primer. Luego la reemplaza la
épsilon o la delta dependiendo de qué cadena sea.
La épsilon va a actuar en la polimerización de la cadena adelantada, mientras que
la delta va a actuar en la polimerización de los fragmentos de okazaki (Ambas
tienen la función de lectura de prueba, pero no están asociadas a la primasa,
osease no sintetiza a los primers). La delta además tiene función exonucleasa 5´-3´
entonces elimina los fragmentos de okazaki y sintetizan ya de cruce lo que va en su
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 lugar, por eso va a en la cadena atrasada, porque ahí hay más fragmentos de
okazaki.
La capacidad de las ADN polimerasas de escindir nucleótidos en sentido 3´- 5´ es la
LECTURA DE PRUEBA, mientras que la capacidad de escindir nucleótidos en sentido
5´- 3´es la capacidad de QUITAR LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI O PRIMERS. No es
lo mismo.
ADN polimerasas que participan en la Síntesis de ADN:
- Alfa
- Delta
- Epsilon

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 Al final la ligasa utiliza ATP para unir los baches que fueron dejando los fragmentos
de okazaki. Osease liga los fragmentos de okazaki entre sí.

Proteínas importantes de las ADN polimerasas:

- RPC (Factor de replicación C): Proteína de enganche de carga. Esta proteína
permite la unión de la ADN polimerasa después llega PCNA, se libera RPC y deja
que la ADN polimerasa siga su curso acompañada de PCNA.

- PCNA (Antígeno nuclear de células proliferativas): Proteína de enganche

deslizante. Sitúa la ADN polimerasa en el primer y mantiene su asociación
estable con la hebra molde, y anclarse, de ahí se libera a RPC. Va a permitir que
la ADN polimerasa siga avanzando. PCNA solo aparece en el periodo S, cuando
la ADN polimerasa necesita estar pegada a la molécula de ADN:

- Topoisomerasas: Enzimas que catalizan la rotura reversible y la unión de las

hebras de ADN. Hay tipo I, que rompen solo una hebra de ADN; y tipo II, que
rompen ambas hebras de ADN al mismo tiempo. Esta rotura permite que el
ADN se mantenga estable, y no se sobrenrolle. La topoisomerasa II también
mantiene separadas las nuevas moléculas de ADN.

- Proteínas de unión a cadena simple:

Son proteínas que mantienen las
cadenas simples separadas.

La ADN polimerasa tiene que

polimerizar ambas cadenas al mismo
tiempo, por esto se va a dimerizar.

Las proteínas de la cadena retrasada

funcionan todas juntitas y avanzan junto
con la horquilla de replicación gracias a
que hay un rulito (No estático) que las
mantiene cerca de la horquilla, sino se
irían alejando de la horquilla y eso no
serviría

PCNA y RPC
Terminación:
Las células eucariotas tienen cromosomas con extremos libres, esto es un
problema para la replicación del ADN.
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 Estos extremos se llaman telómeros, y se componen de repeticiones en tándem de
secuencias simples de ADN. Estos extremos de la cadena son replicados por la
telomerasa. Una enzima transcriptasa inversa, osease que sintetiza ADN a partir de
una cadena de ARN que es complementaria con la secuencia de bases de los
telómeros. Entonces se une al extremo de la cadena de ADN por
complementariedad de bases, y así permite que se extienda el telómero de la
cadena molde, de ahí se crea otro fragmento de okazaki en la cadena hija para
continuar con la síntesis de esa nueva cadena de ADN, eso permite que las
moléculas de ADN no pierdan su extensión, después la ligasa va y une todo.
Nosotros hay partes de la cadena de ADN que no podemos perder. Pero el extremo
de la cadena molde, que va a ser el telómero, siempre va a quedar más largo que la
nueva cadena, entonces cuando se termine de crear la nueva molécula de ADN,
ese extremo de la cadena molde que quedó más largo se va a enrrollar para darle
más estabilidad a la molécula de ADN, si no existieran los telómeros, esa rosca que
se hace se comería parte importante de la cadena y sería perjudicial para la
molécula. Los telómeros son secuencias simples, que van a evitar que eso pase
cuando se enrosque la cadena al final.  La telomerasa va a permitir mantener la
longitud del ADN en su etapa de replicación.
La célula pierde la capacidad de replicación a medida que pasa el tiempo, esto se
debe a que los telómeros se acortan porque la expresión de la actividad de la
telomerasa va disminuyendo con el tiempo.
Todo esto causa la senescencia proliferativa de las células somáticas. Muerte
programada.
La duplicación del ADN va a estar acompañada por el aumento de la síntesis de
histonas, aumento de formación de octámeros y de nucleosomas, para formar la
cromatina que necesitan las moléculas de ADN

La expresión continua y de altos niveles de las telomerasa impide que se acorten los
telómeros e impide el proceso de seecencia proliferativa, esto se ve en celulas
tumorales, celulas madres y celulas germinales.

2) Mecanismos de reparación del ADN

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 Cuando hay daño en el ADN, se activan proteínas para frenar el ciclo celular. Se da tiempo
para reparar el ADN, y si no se repara la célula muere, o prolifera con ADN dañado y
perjudica al organismo.
1- Lectura de prueba de la polimerasa: El primer mecanismo es la lectura de prueba de la
polimerasa (Actividad 3´exonucleasa) que, si detecta un error, puede sacar el nucleótido
incorrecto y polimerizar el que corresponde. Se da en fase S.

Sistemas de reparación de cadena simple (1 sola cadena rota, se usa a la cadena

sana como molde):
2- Reparación por mal apareamiento de bases (escisión): Funciona solamente en fase S.
Detecta la alteración, corta el segmento donde está la alteración y el segmento se
reemplaza por la acción de la ADN polimerasa. Y al final la ADN ligasa une el pedazo
nuevo con el resto de la cadena.

3- Escisión de Bases: Se detectan bases dañadas de forma única y se eliminan de la cadena

de ADN. La ADN glicosilasa se encarga de romper los enlaces de la base con el esqueleto
de la cadena de ADN, esto deja sitios apirimidinicos o apurínicos (AP) que van a ser
escindidos por la AP endonucleasa. Una helicasa separa el pedazo ese que quedó ahí.
Para luego ser rellenados por la acción de la ADN polimerasa y unidos por la ligasa. Se
elimina la base alterada, se saca el nucleótido y se reemplaza. Funciona en cualquier
momento del ciclo celular.

4- Escisión de nucleótidos: El daño es mayor, en varias bases al mismo tiempo. Una

escinucleasa va a cortar el nucleótido (15 pares de bases aprox), la helicasa lo va a separar
del complejo, la ADN polimerasa lo va a rellenar y la ligasa lo va a unir con el resto de la
cadena. Ocurre en cualquier momento del ciclo celular.

5- Remoción directa de grupos alquilos (Metil Guanin Metil transferasa – MGMT)

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 Es una reparación directa. A una base se le puede agregar un grupo alquilo, lo que altera
la estructura de la base. Las enzimas metil guanin ADN metil transferasa van a actuar
sobre esta base. Ocurre en cualquier momento del ciclo celular.

Los mecanismos de reparación 3 y 4 ocurren en cualquier momento del ciclo celular

porque los daños pueden causarse en cualquier momento del ciclo celular, como la
perdida de un grupo amino (Daño leve) o por dímeros de timidina, daño grave que
modifica la estructura tridimensional del ADN (Causado por rayos UV del sol).

Sistemas de reparación en rupturas de doble cadena:

6- Reparación propensa a errores por unión de los extremos. (Reparación
recombinatoria)

Si hay una rotura de doble cadena, lo que se va a hacer es tomar ambos extremos de la
hebra molde y se van a unir entre sí, el problema es que en ese proceso se pierden muchos
pares de bases.
Es propenso a errores porque mantiene la estructura del ADN, pero es probable que se
desarrollen mutaciones por la pérdida de pares de bases.
Suele darse en G0/G1

7- Recombinación homóloga
Si el daño se produce en G2 donde una cromátide hermana está unida a otra cromátide
hermana. La sana puede ser usada como molde para sintetizar el pedazo roto de la cadena
rota. Si copia la cromátide hermana va a copiar la misma secuencia que la original. Y si se
copia de un cromosoma homologo la secuencia va a cambiar, pero probablemente siga
siendo codificante.
La proteína clave es Rad51, que se une a la secuencia de ADN monocaternario y forma
filamentos proteína-ADN. Luego se une a otra secuencia de ADN bicaternario y forma un
complejo entre los 2 ADN y cataliza el intercambio de hebras entre secuencias homologas.
Los cromosomas tienen una sola cromátide en G0 y G1, pero a partir de G2 son dos
cromátides hermanas, por la síntesis de las nuevas cadenas de ADN en S, entonces ahí se
pueden arreglar por recombinación homóloga, pero los cromosomas homólogos son el
paterno y el materno, que en G1 tienen una sola cromátide, y en G2 tienen dos cromátides
hermanas. Esa es la diferencia entre cromosomas homólogos y las cromátides hermanas.

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Variabilidad genética:
- Mutaciones: Cambios en la secuencia de nucleótidos que escapan a los mecanismos de
reparación del ADN. Llevan a la variabilidad del genoma. No necesariamente tienen un
efecto negativo.
 Inserción: Se añaden bases
 Deleción: Se pierden bases
 Sustitución: Se cambian bases.
- Reorganización del ADN: Se combinan de distintas formas segmentos de ADN.

 Recombinación homóloga: Se da en la meiosis, en el crossing over. Durante

la meiosis los cromosomas están relacionados entre sí, y en vez de sintetizar
un pedazo de uno a partir del otro, lo que se hace es combinar los dos
cromosomas, para que ambos tengan un segmento materno y uno paterno.
Esto permite variabilidad genética y permite diferenciar a los hijos de los
padres.

 Recombinación sitio específico: Participa en el proceso de síntesis de los

anticuerpos. Se combinan distintos segmentos de ADN, para dar genes
distintos y productos proteicos distintos.

 Transposición: Segmentos de ADN que pasan de un lugar a otro por acción

de la enzima transposasa.

 Transposición a partir de ARN: El ARN sirve de molde para crear una hebra
de ADN.

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- Amplificación génica: Se incrementa el número de copias de un gen en la célula. Resulta
de la replicación repetitiva de una región del cromosoma. En algunos casos proporciona
la expresión de los genes durante el desarrollo. Pero también puede ser característica de
células cancerígenas, pudiendo generar la expresión de genes que contribuyen a la
proliferación celular incontrolada.

Saber:
- Mecanismo de replicación del ADN + componentes enzimáticos, en qué
momentos del ciclo celular se produce.
- Mecanismos de reparación del ADN, en qué circunstancias participan y
en qué momentos del ciclo celular se dan.
- Principales mecanismos de variabilidad genética

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