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En cada cromosoma, las dos cadenas del ADN se encuentran arrolladas. La duplicacion
implica que las cadenas se abran, de modo de que cada una sirva de molde para
sintetizar cadenas nuevas. Esta se inicia en sitios especificos con secuencias
determinadas: ORI. Hay multiples ORI
Iniciacion
Al abrirse la doble hélice se forma una “burbuja” de replicación. Así, cada burbuja tiene dos horquillas de replicación,
que a partir de un punto de origen común, avanzan en direcciones opuestas hasta la secuencia terminadora. Las
horquillas desaparecen cuando se van integrando al encontrarse las cadenas en el terminador. El crecimiento de de
las cadenas es bidireccional. El segmento de ADN que se sintetiza a partir de un origen de replicación (con sus dos
horquillas), lo llamamos replicón.
De las dos cadenas parentales, la celula hija conserva una de ellas y la otra la construye por
complementariedad de bases, usando la anterior como molde. Como resultado de la
replicacion, se puede observar una semiconservacion de las hebras originales. Tambien es
una copia fiel, ya que las celulas hijas son identicas a las originales.
Una de las características de las ADN-polimerasas es que sólo pueden sintetizar en dirección 5’3’ (al igual que la arn
pol, solo que esta copiaba la bien orientada unicamente). Sin embargo, en este caso, deben ser copiadas ambas,
pero una de ellas esta en dirección 5’ 3’ y la otra en dirección 3’ 5’. De manera que una esta mal orientada.
La segunda particularidad es que no pueden colocar por si mismas el primer nucleotido de la cadena, solo los
agregan a un extremo 3 preexistente, la cadena debe estar iniciada. Para esto interviene previamente una primasa
(una enzima ARNpol: sintetiza un cebador o primer, es una pequeña cadena de arn que servira para cebar el
agregado de nucleotidos. Asi, la cadena bien orientada crece de manera continua. Se la denomina cadena lider.
Por su parte, en la cadena mal orientada, el primer se coloca desplazado del ori, hacia el terminador de la horquilla.
De esta forma, el primer expone su extremo 3 permitiendole a la enzima sintetizar. Posteriormente, la primasa
retroce, se agrega un nuevo primer, la pol agrega un nuevo fragmento de nucleotidos hasta contactar con el primer
anterior. El proceso continua hasta que se llegue al terminador. La cadena es sintetizada de manera discontinua, en
pequeños tramos, llamados fragmentos de Okazaki. Se la llama cadena rezagada, por su crec mas lento.
Al finalizar el proceso, una ADN pol I elimina los cebadores y rellena los espacios con desoxirribonucleotidos. La ADN
ligasa une dichos fragmentos
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El proceso es semidiscontinuo. En cada horquilla, una mitad crecera continua y la otra discontinua
Elongacion
Se produjo la separacion de las hebras por el rompimiento de los PH, esta reaccion es catalizada por la enzima ADN
helicasa, MCM. Como las cadenas son complementarias tenderan a aparearse, para evitar esto, proteinas PSSB se
unen a cada hebra estabilizandola.
A medida que la enzima helicasa abre la doble hélice, dos enzimas complementarias: la topoisomerasa I (corta una
hebra) y la topoisomerasa II o girasa (corta ambas hebras), van disminuyendo la tensión torsional acumulada por el
superenrollamiento en el sector no replicado de la doble hélice, que se produce a ambos lados de la burbuja. Ambas
enzimas se comportan como nucleasas (cortando las cadenas de ADN) y luego como ligasas (restableciendo las
uniones fosfodiéster).
Las cadenas son complementarias y antiparaleslas, y a su vez, seran molde de otras dos cadenas complementarias y
antiparalelas a ellas.
Terminacion
Al eliminarse el ultimo cebador, queda incompleto el extremo 5’. De esta forma, al ser recibidas las moléculas de
ADN por las células hijas, y estas duplicarse utilizando esas cadenas como molde, volverá a ocurrir el mismo proceso.
Así, sucesivamente los telomeros se van a ir consumiendo progresivamente, hasta el punto de provocar un deterioro
en el genoma. Provocando, finalmente, la muerte celular.
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Para evitar esto, determinados tipos celulares los mantienen estables por acción de una telomerasa (se encuentra
inactiva en la mayoría de las células). Garantizan la inmortalidad de la célula, ya que compensan el deterioro
elongando la secuencia telomerica.
Se trata de una retrotranscriptasa: un ARN que sintetiza ADN. Esta activo en células cancerosas, germinales y
embrionarias
Mecanismos de variabilidad
Mutaciones: fallan los mecanismos de reparación. Cambia la secuencia de nucleótidos, y al dividirse la celula, se
fijan los errores. En funcion del producto que generen, determinara si representa una ventaja, desventaja o
neutro
Reordenamiento del material genético: recombinación homologa, durante la meiosis en el crossing over. Sitio
especifico. Transposición, cambios en el lugar de secuencias de adn
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Proteínas reguladoras de enzimas con act kinasa: ciclinas. Reciben este nombre ya que su concentración se eleva
y desciende siguiendo patrones predecibles conforme avanza el ciclo celular
Proteínas catalíticas (catalizan fosforilacion, que puede activar o desactivar a la proteína modificada), reguladas
por las ciclinas: kinasas. Están presentes en la célula pero en estado inactivo, excepto cuando están unidas a su
subunidad reguladora. son proteínas constitutivas.
Se asocian y forman el complejo regulador del avance del ciclo celular: FPS Y FPM
2. Complejo proteico que induce la apertura de los ori: durante G1 permanecen inactivos como complejos pre-
replicativo. El complejo está formado por proteínas MCM helicasa junto con proteínas del complejo de
reconocimiento del origen (ORC) que son activadas por el FPS (cdk2-ciclinas E) y DDK, este fosforila varias
proteínas y comienza la transcripción
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3. Fosforila proteínas asociadas a MT. Se promueve la formación centrosomas, del huso y la alineación de los
cromosomas. Tipos
- Cinetocoricos: se unen a los cinetocoros y van a polimerizarse para traccionar las moléculas
- Polares: en la linea media. Generan un efecto de corrimiento, se unen a los extremos de los mt. Facilita la
separación de los centrosomas
- Astrales: irradian desde el centrosoma y se anclan a la mem, para hacer tracción hacia ella y separar y
estabilizar los centrosomas
4. Fosforila el complejo promotor de la anafase APC
2. ubiquitiza a las ciclinas M, se degradan, dejando al complejo FPM desactivado. Su desaparicion permite la accion
de las fosfatasas las cuales eliminaran los grupos fosfato (que habian sido agregados por el FPM) y la entrada a la
telofase:
Se reorganiza las envolturas nucleares
Se descondensan los cromosomas
Citocinesis, por la desfosforilacion de las miosinas que promueve la formacion de un anillo contractil
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Mecanismos que regulan las CDK
Fosforilacion y desfosforilacion de la subunidad catalitica (kinasas): se requiere de varios pasos para activar el
complejo
Proteinas inhibitorias: garantizan que mientras se acumulen las ciclinas no se active el complejo hasta que la
celula no este preparada. Cuando esto ocurre, se fosforilan los inhibidores, lo que lleva a su ubiquitinacion y su
posterior degradacion, dejando activo al complejo.
Proteolisis controlada de las ciclinas: permite desactivar los complejos una vez cumplida su funcion, y permitir el
paso a la siguiente fase
1- Control pretranscripcional
Los siguientes mecanismos estan regulado por mecanismos epigeneticos: le dan al genoma informacion
regulatoria pero que no alteran las secuencias de bases
El grado de metilación y acetilacion
La presencia de grupos metilo o acetilo afecta la estructura de la cromatina, afectando su expresión. Este agregado
de grupos quimicos ocurre en extremos libres (n terminales) de las histonas
La metilación ocurre en la citosinas presentes en las histonas de las secuencias promotoras, en zonas ricas en
citosina y guanina. Este cambio quimico, provoca un cambio conformacional: el ADN se compacta, queda inaccesible
(heterocromatina) y por lo tanto no se expresa, ya que hay mayor atraccion entre el adn con carga – y las histonas, +.
La union de grupos acetilo desfavorece las interacciones electroestaticas de las colas de las histonas con el ADN
(atraidos por sus cargas opuestas), por lo cual favorece el desplegamiento del ADN y su accesesibilidad a la arn pol
para su transcripcion. Consituyen la eurocromatina
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Son mutuamente excluyentes, dinamicas y reversibles.
La estructura de la cromatina
Existen dos tipos de cromatina: la eucromatina y heterocromatina. La transcripción solo ocurre cuando el ADN está
desplegado. En cada tipo celular solo se expresan determinados conjuntos de genes mientras el resto del genoma se
mantiene "silencioso". Esta esta expresion diferencial de los genes, determinada por el grado de condensacion de la
cromatina, explicaria porque distintos tipos celulares presentan diferentes proteinas
Remodeladores de la cromatina
Ej, complejo SWI/SNF. Actuan remodelando o desplazando a los nucleosomas de una region especificas de un gen,
para facilitar la transcripcion. Estas zonas son regulatorias, como las regiones promotoras donde se une la
maquinaria basal que permite el inicio de la transcripcion. De esta forma, si dicha zona esta “tapada” por un
nucleosoma, la maquinaria basal no se podra unir y la transcripcion no emperaza.
Estos coactivadores pueden reclutar a la maquinaria enzimatica necesaria para la transcripcion: complejos
remodeladores de la cromatina y a para cetilacion de histonas, para que se descondense el adn en dichas zonas. Un
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ejemplo de estos coactivadores es el complejo mediador: 31 subunidades. Transmite las las interacciones
moleculares entre las proteinas unidadas a la secuencia a regulatorias, a las proteinas unidas a la ARNpol II. A partir
de estas interacciones, se fosforila un extremo critico de la ARN pol y se activa. En funcion de la rapidez con la que se
den la interacciones moleculares, determinara el grado de efectividad con la que trancicione de su estado inactivo, a
activo
Si en cambio se une un silencer a la secuencia silenciadora, se produce un cambio que impide la union de los
componentes y con ella la transcripcion
Todas las celulas tienen el mismo ADN, activan los genes con los mismos mecanismos y presentan los mismos
factores basales. Sin embargo, en todas las celulas no se transcriben los mismos genes. Esto se debe a la
combinacion particular de los factores especificos (activadores o inhidores), que actuaran sobre las secuencias
reguladoras, estos determinaran la transcripcion o no de los genes en cada tipo celular.
Splicing alternativo
El splicing se da durante la maduracion de los arn. Afecta a la secuencia codificadora, que sufre un acortamiento
producto de la eliminación de los intrones, quedando como producto final los exones empalmados en secuencia
continua. El catalizador del proceso de empalme y eliminacion se lo llama, spliceosoma.
Una vez liberado el ARNm maduro del espliceosoma, el intrón queda eliminado en forma de lazo y será degradado
posteriormente en el núcleo.
Este proceso al ser alternativo genera variabilidad: Es el mecanismo por el cual puede obtenerse de un mismo gen
proteínas relacionadas. Este proceso consiste en unir covalentemente diferentes combinaciones de exones del pre-
ARNm, ya que no siempre los exones se empalman en la misma secuencia que la del gen codificador, y ademas
puede ocurrir que algunos de ellos sean eliminados junto con los intrones. A partir de esto se obteniene dos ARNm
maduros con distinta información y por lo tanto dos productos proteicos diferentes
Esta regulado por mecanismos reguladores del splicing. Son factores proteicos que regulan positivamente o
negativamente el spliceosoma. Se dividen en represores (bloquea la eliminacion del intron) y activadores (eliminan
el intron)
Agregado de cap
Se adiciona en el extremo 5' del ARNm una molécula de 7 metil-guanosina (un nucleótido de guanina metilado) a la
que se conoce como cap. Ésta molécula se agrega al transcripto primario. Por ser esta modificación simultánea a la
transcripción se la considera co-transcripcional. Funcionar como señal para el inicio de la traduccion y se requiere
para la eliminacion de intrones
La cola poli A es parte de la señalizacion necesaria para que se produzca la exportacion de los arn desde el nucleo
hacia el citosol. Por tanto, en funcion de si se sintetiza o no, se puede controlar la salida del transcripto maduro
Proteinas regulatorias
Entre los ejemplos de mecanismos regulatorios, explicaremos cómo se modifica la tasa de traducción del ARNm que
codifica para la proteína ferritina. Esta proteína funciona capturando átomos de hierro del medio intracelular, ya que
en estado libre, el hierro es tóxico para la célula.
Implica la accion de dos mensajero: la ferritina (almacena Fe) y transferrina (receptor de Fe)
La proteina regulatoria que actua es la aconitasa, su actividad depende de la concentración de hierro libre en el
citosol. Minetras no haya Fe libre, esta proteina se une al extremo 5 de la ferritina impidiendo su traduccion, y a su
vez, se une al extremo 3 de la transferrina, favoreciendo su transcripcion. Al incorporsa Fe, se invierte su funcion:
libera al extremo 5, y comienza a traducirse y se libera de la transferrina, provocando su desestabilizacion
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5- Co- traduccionales (durante la traduccion)
Regulacion del inicio de la traduccion
Los factores de iniciacion EIF-2, en estado activo unido a gtp, reconocen secuencias especificas de los ARNm. Esta
regulado su accion por la fosforilacion
Regulacion de la elongacion
Los factores de elongacion EIF-1 proveen los arnt par producir el eventual acercamiento de los aa y provocar la
union peptidica. Actua tambien EIF-2, se activa frente al apareamiento de bases incorrectas (el ribosoma al no poder
generar el enlace peptidico y se traba) actua sacandolas de bolsillo de la subunidad ribosomal, para que se pueda
unir el arnt correcto
Regulacion de la terminacion
Hacia el final de la traduccion, se alcanza la secuencia de terminacion (uag). Este codon no es reconocido por ningun
arnt, sino que se une en su lugar el factor de terminacion. Provoca la liberacion de la proteina y se desestabilizan las
subunidades, que pueden reutilizarse.
Degradacion de ARNm mutados, por la presencia de terminacion prematura
La maquinaria de traduccion al detectar un codon STOP prematuro (codon sin sentido) detiene la traduccion.
Complejos de vigilancia lo recooncen y posteriormente actua NMD (no sense mediated decay) que lo degrada
Si una proteína adquiere un plegamiento anómalo, o se ha desnaturalizado, entonces ésta pasa a un proceso de
ubiquitinización, consiste en la adición de varias ubiquitinas por una ubiquitinligasa, señal para que el proteasoma la
degrade. La proteína ubiquitinizada es reconocida por el proteasoma perdiendo su plegamiento por acción de las
peptidasas.
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