Universidad de Puerto Rico

Departamento de Biología
Recinto de Arecibo

Enzimas

OBJETIVOS
1. Definir los términos: catalizador, enzima, energía de activación, sustrato, sitio activo,
cofactor, desnaturalización.
2. Explicar como funcionan las enzimas.
3. Describir el efecto de la temperatura, pH e inhibidores sobre la reacción enzimática.

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son, en su mayoría, proteínas que funcionan como catalizadores

biológicos. Un catalizador es una sustancia que acelera la velocidad con que ocurre
una reacción química. Las enzimas reducen la energía de activación necesaria para
iniciar dicha reacción. Estas proteínas aumentan la rapidez de las reacciones químicas
al reducir la energía de activación de cada reacción química.

En general, los nombres de las enzimas se forman al añadir el sufijo asa al nombre de
la sustancia en que actúan. Por ejemplo, la enzima sacarasa descompone la sacarosa
en glucosa y fructosa. Las proteasas rompen los enlaces péptidos que unen los
aminoácidos. En este experimento estudiaremos la actividad de la enzima oxidasa de
catecol. Esta enzima se encuentra en las células de muchas plantas.
En una reacción química, los sustratos son las sustancias sobre las cuales actúan las
enzimas. Son los reactivos que participan en la reacción. Las enzimas se combinan
con sus sustratos de manera transitoria, formando el complejo enzima-sustrato. De
este complejo surgen los productos de la reacción y las enzimas que no son
consumidas ni alteradas. Las enzimas al final de la reacción son liberadas y pueden
combinarse nuevamente con sustratos.

Sustrato + Enzima  Complejo enzima-sustrato  Productos + Enzima

En realidad, la forma convencional de escribir la reacción catalizada por una enzima es:
enzima
sustrato productos

El nombre de la enzima no se incluye entre los sustratos sino que se escribe sobre la
flecha, para indicar que la enzima no se consume durante la reacción química.
El catecol, sustrato normal de la enzima oxidasa también se encuentra en las células
de las plantas. Estas sustancias se encuentran en diferentes compartimientos de las
células. Al ocurrir algún daño a éstas, la oxidasa de catecol actúa sobre el catecol
formando benzoquinona. Este producto tiene un color marrón intenso comúnmente
observado en frutas y vegetales dañadas o lastimadas.

La reacción química que estudiaremos en este experimento es:

Oxidasa de catecol
catecol + ½ O2 benzoquinona + H2O
(enzima encontrada en
 extracto de papa)

Esta es una reacción de oxidación, o sea, que se remueven electrones del sustrato
catecol en presencia de oxígeno, por eso la enzima se llama oxidasa de catecol.
Cada enzima tiene una o más regiones llamados sitios activos. Para que se forme el
complejo enzima-sustrato, el sustrato se une al sitio activo de la enzima. En el modelo
de llave y cerradura, la forma del sustrato (llave) es compatible o complementaria con
la forma de la enzima (cerradura). En el modelo de ajuste inducido al acercarse la
enzima y el sustrato, estos se amoldan perfectamente.
Como consecuencia de la estructura de su sitio activo las enzimas son altamente
específicas con respecto a su sustrato y reacciones que catalizan. Una enzima
usualmente cataliza una sola reacción o conjuntos de reacciones relacionadas La
sacarasa descompone solamente sacarosa, no descompone maltosa o lactosa. La
quinasa transfiere fosfato inorgánico de la molécula de ATP a diferentes moléculas
orgánicas durante la glucólisis.
Además de los sustratos, las enzimas pueden ser afectadas por inhibidores reversibles.
En caso de la inhibición competitiva, el inhibidor compite por el sitio activo de la
enzima. Esta molécula inhibidora se asemeja al sustrato y se combina con el sitio
activo de la enzima. De esta forma se afecta el acceso del sustrato normal y la
reacción enzimática disminuye.
En la inhibición alostérica (no competitiva), el inhibidor se une con la enzima a un
sitio que no es el activo. Estos inhibidores inducen cambios en la conformación del
sitio activo por lo tanto pueden disminuir la habilidad de la enzima para combinarse con
el sustrato.
La temperatura afecta la actividad enzimática. Las enzimas tienen una temperatura
óptima en que la reacción alcanza una rapidez máxima. Las reacciones enzimáticas
ocurren lentamente o no ocurren en absoluto a temperaturas bajas. Las temperaturas
altas inactivan con rapidez a muchas enzimas debido a que se desnaturalizan. Se
afecta su estructura secundaria y terciaria y dejan de ser funcionales. En este
experimento se estudiará el efecto de latemperatura sobre la enzima presente en la
papa.
Otro factor que influye en la actividad enzimática es el pH, el cual es una medida de la
concentración de iones de hidrógeno en la solución. Al igual que la temperatura,
muchas enzimas tienen un pH óptimo. La mayor parte de las enzimas trabajan mejor a
pH neutral, esto es, un pH cercano a 7. Otras enzimas, trabajan mejor en pH acidico
( pH < 7), y otras en pH alcalino (pH > 7), correspondiente al pH del ambiente donde se
encuentran normalmente. Los ácidos y bases fuertes alteran de manera irreversible a
muchas enzimas modificando su estructura molecular. Se estudiará la reacción
enzimática bajo diferentes pH y se determinará el pH óptimo de la enzima oxidasa de
catecol.

PRECAUCIONES
1. En este experimento manejarás instrumentos y cristalería caliente. Utiliza un
guante aislante o unas pinzas al agarrar la cristalería caliente.
2. Algunos de las sustancias utilizados en este experimento pueden ser peligrosos
para tu salud al ser ingeridos o tener contacto con tu piel. Manéjalos con mucho
cuidado. Si tuvieses contacto con alguno de estos reactivos, lava el área con
abundante agua y jabón.

MATERIALES:
Un grupo o persona preparará el extracto de papa:
papa grande agua destilada (fría)
cuchillo (1) vaso de 100 mL ( 1 por grupo)
licuadora (1) cheese cloth
 balanza (1) probeta 100 mL (1)
Envase para pesar
vaso 1000 mL (1) embudo grande (1)

Por mesa
vaso 250 mL gradilla grande (1 por grupo)
marcador (1 por grupo) regla (1 por grupo)
agarraderas tubo de ensayo (1 por grupo) termómetros (1 por grupo)
hornillas (1 por grupo) hielo
tubos de ensayo baño de agua 40oC
Amortiguadores sin color pH 2,7,12
goteros desechables pipetas 1mL y 5mL
Bulbos

PROCEDIMIENTO

I. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO DE PAPA (Al momento de comenzar)

Procedimiento
1. Remueve la cáscara de una papa (al momento) y descártala. Pesa 125 gramos de
papa, córtala en pedazos pequeños y coloquelos en una liquadora con 60 mL de
agua destilada fría.
2. Utilizando 2 capas de gasa, filtre la mezcla. El extracto de papa obtenido será
utilizado por todos los grupos.
3. Coloque el extracto de papa en un vaso de 100 mL y manténgalo en hielo durante
todo el laboratorio

En este experimento utilizará la siguiente escala para analizar los resultados:

Escala de Color
intensidad
0 Crema/transparente
3 marrón claro
5 marrón oscuro