Tema 9: DNA y genes: síntesis y reparación

Capítulo 15: DNA y genes: síntesis y reparación (T2 BIII)

15.1 Experimento de Hershey y Chase

15.2 Experimento de Meselson y Stahl

15.3 Replicación del ADN:

• Se realiza gracias a la ADN polimerasa
• Las reacciones de polimerización generalmente son endergónicas, necesitan un aporte de energía
• La síntesis de ADN requiere un aporte de energía, pero con una distinción. La energía potencial de los
monómeros de desoxirribonucleótidos se eleva primero por reacciones que añaden dos grupos fosfato para
formar trifosfatos de desoxirribonucleótidos (dNTP). (La N de dNTP indica cualquiera de las cuatro bases del
ADN)
• Como tienen tres grupos fosfatos muy próximos, los dNTP tienen una alta energía potencial, la suficiente como
para hacer que la formación de enlaces fosfodiéster en una cadena de ADN en crecimiento sea exergónica,
separándose dos de los fosfatos
15.4 Síntesis del ADN

Cebadores
• Como se muestra, el extremo 3' es suministrado por un cebador, una cadena de una docena de nucleótidos
que forma pares de bases complementarias con una cadena molde de ADN
• El cebador proporciona la ADN polimerasa con un grupo hidroxilo (-OH) 3' libre que puede combinarse con un
desoxirribonucleótido entrante para formar un enlace fosfodiéster
Síntesis de la cadena conductora
Síntesis en la cadena retardada
Para entender su funcionamiento se planteó la siguiente hipótesis: hipótesis de la replicación discontinua
• Esta sostenía que la ARN primasa sintetiza nuevos cebadores de ARN para las cadenas retrasadas a medida que
la horquilla de replicación móvil expone regiones de ADN monocatenario, y que la ADN polimerasa utiliza esos
cebadores para sintetizar fragmentos cortos de ADN lo largo de la cadena retrasada, que se unen para formar
una cadena continua
Todos los enzimas que intervienen están unidos por un replisoma, una máquina macromolecular de gran tamaño

15.5 La replicación de los extremos cromosómicos

• Esta requiere una enzima especializada de replicación del
ADN
• El problema de la replicación de los extremos: la región del
extremo de un cromosoma eucariótico se llama telómero
▪ Cuando la horquilla de replicación alcanza el extremo de
un cromosoma lineal, una ADN polimerasa eucariótica
sintetiza la cadena conductora hasta el final del molde
de ADN original (paso 1 y 2)
o Como resultado, la síntesis de la cadena
conductora da lugar a una copia de doble cadena
de la molécula de ADN
▪ En la cadena retardada, la primasa añade un cebador
de ARN cerca del extremo del cromosoma (paso 2)
▪ La ADN polimerasa sintetiza el fragmento de Okazaki final en la cadena retardada (paso 3)
o Una enzima que degrada los ribonucleótidos elimina el cebador
▪ La ADN polimerasa es incapaz de añadir ADN cerca del final del cromosoma, porque no puede sintetizar
ADN sin un cebador (paso 4)
o Como resultado, el ADN de cadena simple que queda continúa siendo monocatenario
▪ El ADN de cadena simple al final de la cadena retardada termina siendo degradado, lo que provoca un
acortamiento del cromosoma
Si este proceso continuara, cada cromosoma se acortaría en unos 50 a 100 desoxirribonucleótidos cada vez que el
ADN se replicara. Con el tiempo, los cromosomas lineales desaparecerían por completo

La telomerasa resuelve el problema de la replicación de los extremos

• Se encontraron 2 importantes descubrimientos:
1. Los telómeros están formados por cortos fragmentos de bases que se repiten una y otra vez
2. Un enzima llamada telomerasa, que porta su propio molde, participa en la replicación de los telómeros
• La telomerasa cataliza la síntesis del ADN a partir de un molde de ARN que contiene
• La telomerasa añade ADN al extremo de un cromosoma para impedir que se acorte
• Proceso:
1. El segmento no replicado del telómero en el extremo 3' del molde de la cadena retarda forma un "saliente"
monocatenario
2. La telomerasa se une a esta sección saliente de ADN y utiliza una porción del ADN mantenido en la
telomerasa como molde para la síntesis del ADN
o El ADN es sintetizado a partir del OH en 3' de la cadena única
3. La telomerasa se desplaza hacia el ADN recién sintetizado y cataliza la adición repetida de una misma
secuencia corta de ADN al final de la cadena simple. Este paso se repite
4. Una vez que el saliente de cadena simple de la cadena progenitora se alarga suficientemente, las enzimas
normales de síntesis del ADN utilizan esta cadena como molde para sintetizar una cadena complementaria
 o La adición resultante del ADN bicatenario al final de un cromosoma contrarresta cualquier
acortamiento

15.6 Corrección de errores en la síntesis del ADN

• Mediante la ADN polimerasa
▪ Las investigaciones encontraron en E. coli mutantes un defecto en una parte de la enzima ADN polimerasa
III denominada subunidad  (épsilon)
▪ Esta subunidad actúa como una exonucleasa, por lo que es una enzima que elimina desoxirribonucleótidos
de los extremos de las cadenas de ADN
▪ El sitio activo de la ADN polimerasa puede detectar estas formas físicas y añadirá un nuevo
desoxirribonucleótido solo si el par de bases anterior es correcto
▪ La ADN polimerasa se interrumpe te cuando detecta una base mal alineada, y la actividad exonucleasa de
la subunidad  elimina el desoxirribonucleótido mal emparejado
▪ Corrección de pruebas: capacidad de la ADN polimerasa de reconocer y eliminar los desoxirribonucleótidos
incorrectos
• Reparación de emparejamientos erróneos
▪ Aunque la ADN polimerasa deje alguna base mal emparejada, hay una segunda corrección: una batería de
enzimas corrige los errores por los mal emparejamientos
▪ Gracias al estudio de la E. coli, se descubrieron las 10 proteínas que intervienen en la reparación de
emparejamientos erróneos
o Estas proteínas reconocen la base mal emparejada, eliminan la sección de la cadena de ADN que
contiene la base incorrecta y vuelven a sintetizar el ADN ausente usando como molde la cadena más
antigua
 ▪ En E. coli, unos marcadores químicos en la cadena más antigua permiten a las proteínas distinguir la cadena
original de la recién sintetizada. Los eucariotas también deben distinguir el ADN antiguo del recién
sintetizado, pero no utilizan el mismo sistema de marcadores químicos

Reparación del ADN dañado

• Incluso después de que el ADN se sintetice el trabajo de asegurar la precisión no ha terminado
• Los genes están sometidos a continuos ataques. El ADN es dañado por la luz solar, los rayos X y muchas
sustancias químicas como los radicales hidroxilo (OH) producidos durante el metabolismo aeróbico, las
aflatoxinas presentes en cacahuetes y maíz mohosos, y los benzopirenos del humo de los cigarrillos, e incluso
inestabilidades del propio ADN
• Para reparar el ADN dañado, los organismos han desarrollado muchos sistemas de reparación del ADN
• Ej: sistema de reparación por escisión de nucleótidos que actúa sobre el ADN dañado por la luz ultravioleta
▪ La luz ultravioleta (UV) de la luz solar (cabinas de rayos UVA) puede
hacer que se forme un enlace covalente entre bases pirimidínicas
adyacentes dentro de la misma cadena de ADN
▪ La pareja timina-timina es una alteración, denominada dímero de
timina, crea desviaciones en la estructura del ADN
▪ La desviación hace que se atasquen las ADN polimerasa normales,
bloqueando la replicación del ADN
▪ La reparación de nucleótidos por escisión arregla los dímeros de
timina y otros tipos de daños que distorsionan la hélice de ADN y
sustituye la cadena de ADN dañada por un ADN correcto recién sintetizado
Proceso:
1. Un enzima reconoce la desviación en la hélice de ADN
2. Después, otro enzima elimina un segmento del ADN de
cadena simple que contiene la secuencia defectuosa
❖ Estos son los nucleótidos escindidos de la
reparación de nucleótidos por escisión
3. La cadena de ADN intacta proporciona un molde para la
síntesis de una cadena corregida y el hidroxilo 3' de la
cadena de ADN situada a continuación del hueco sirve
como cebador
4. La ADN ligasa une el ADN recién sintetizado al ADN
original no dañado

15.7 Xerodermia pigmentaria

Rara enfermedad autosómica recesiva, en la que los que la padecen
son extremadamente sensibles a la luz ultravioleta (UV)