UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

TALLER DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

TALLER GUÍA N°1 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

NORMAS DE BIOSEGURIDAD Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS COMPLEJOS

DOCENTE: ALEJANDRA QUINTERO LINERO

Integrantes: Yeilis Barbosa, carelis cantillo, Leiner campos, karen cotes, claudia
Madrid, angie marrugo, duvan puentes, Tahelis toloza

1. De la guía de laboratorio de Bioseguridad, enumere los niveles de laboratorio que

existen y de ejemplos de los microorganismos que puedan trabajarse en el mismo.

RTA: Niveles de laboratorio

Nivel 1. Corresponde a los laboratorios de docencia en enseñanza secundaria o de pregrado y en

ellos se manejan microorganismos que no producen enfermedad en humanos
inmunocompetentes.

Dentro de los agentes estudiados en laboratorios nivel 1 se incluyen:

 Bacilus subtilis,
 Naegeria gruberi,
 Virus de hepatitis canina infecciosa
 Virus del Mosaico del Tabaco
 Especies de E.coli no patogénicas.
 Saccharomyces cerevisiae
 Penicillium roqueforti
 Ditylenchus dipsaci

Nivel 2. Corresponde a los laboratorios clínicos, de diagnósticos y docentes en donde se trabaja

con microorganismos que tienen un riesgo moderado y que están asociados con enfermedades
humanas de diferente severidad. Este nivel es indicado cuando se trabaja con derivados
sanguíneos, fluidos corporales y tejidos.

Estos laboratorios trabajan con organismos tales como:

 Virus del sarampión

 Muchas especies de salmonella
 Clostridium botulinum
 Escherichia coli
 Aspergillus fumigatus
 Candida albicans
 Trichinella spiralis
 Toxacara canis
 Virus hepatitis B
 Virus del Dengue
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Nivel 3. Corresponde a los laboratorios clínicos, de diagnóstico, docencia, investigación o

producción. Se trabajan con agentes que potencialmente se pueden adquirir por vía respiratoria y
causa infecciones serias e incluso letales.

Los agentes estudiados en un laboratorio nivel 3 incluyen:

 Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis)

 Virus de encefalitis de St. Louis
 Virus de la fiebre amarilla
 Francicsella tularensis (tularemia)
 Coxiella burnetii.
 Yersenia pestis
 Taenia sollum
 Paracoiccidioides brasiliensis

Nivel 4. Corresponde a los laboratorios que se trabajan con agentes que tienen altos riesgo de
causar enfermedades serias, que se transmiten por aerosoles y para los cuales no hay vacuna o
terapia conocida.

Todos los agentes nivel 4 son virus. Algunos ejemplos son:

 El virus Marburg
 El virus Ebola
 Virus de la viruela
 Virus que causan fiebre hemorrágica Congo-Crimea
 Fiebre Lassa.
 Flavivirus
 Paramixovirus

2. Explique para que tipo de microorganismos son los medios de cultivo complejos
preparados en el laboratorio de Microbiología ambiental

 especies aerobias y anaerobias varias,

 bacterias des nitrificadoras.
 bacterias que fijan nitrógeno
 bacterias fotosintéticas
 bacterias indicadoras

3. Explique para qué sirve la selección de los medios de cultivos y cuáles son los productos
que se utilizan para ello.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
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los microorganismos. De lo antes mencionado, podemos desglosar cada tipo

de medio de cultivo y su enfoque.
• Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos,
excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar
CLED).
• Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo
determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
• Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el
mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su
respiración, etc. (por ejemplo, medio de MacConkey).
• Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el
crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la
cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.
• Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que
permite el crecimiento de una especie.
Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal
a especímenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y
su concentración simple.

Productos que se utilizan para ello

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.
En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se
Obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que, a
Excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente.
Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de
los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza.

EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales

o vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y
Calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos
Preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los
Medios de cultivo. Los más utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de
malta.

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y

sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas
Animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en
Pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y
sales minerales.

FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario añadir a los medios de

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cultivo de algunos patógenos sustancias como sangre completa, sangre

desfibrinada, plasma o suero sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer
aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por
tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal
sano, y adicionada al medio de cultivo después de que este haya sido auto
Clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento, sino que
también aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de
algunas bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa presente en las células
sanguíneas destruye el peróxido de hidrógeno que algunas bacterias que no
poseen este enzima acumulan como producto del metabolismo del oxígeno.

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo

del crecimiento bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes al
medio de cultivo. Debido a que la mayoría de las bacterias son neutrófilas, se
suelen emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos ò bipotásicos u otras
sustancias como las peptonas para prevenir la desviación del pH.

4. Establezca las diferencias entre los medios de cultivos complejos, naturales, sintéticos,
semisintéticos.

Medios de cultivos Diferencias

Medio complejo  Fueron los primeros utilizados
 los más empleados se preparan a partir de
tejidos animales, más raramente de vegetales
 Usualmente se complementan con el añadido
de minerales y otras sustancias.
 No se conocen todos los componentes del
medio de cultivo, ni las cantidades exactas en
que están presentes.
 no es rigurosamente constante.
 Puede tener ciertos inconvenientes en
condiciones experimentales, donde la
reproductibilidad no podrá ser exacta. 
 En la práctica corriente estos medios dan
excelentes resultados y son los más
empleados.

Medio natural  son los preparados a partir de sustancias

naturales de origen animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones.
 composición química no se conoce
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exactamente
Medio sintéticos  Son los medios que tienen una composición
química definida cualitativa y
cuantitativamente.
 Se conocen todos los componentes
 Por su costo sólo se emplean en
procedimientos especiales
 Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya
que este posee antibióticos como la
vancomicina colistina y nistatina.
Medio semisintéticos  Son medios donde parte de su composición
corresponde a extractos naturales como
levadura, malta patata, sangre, leche, etc. A lo
que se añade constituyentes sintéticos o
químicamente definidos para el crecimiento
bacteriano.
 Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio
por muy enriquecido que esté éste, haciéndolo
exclusivamente en células vivas con unas
características determinadas. Ejemplos de este
tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias,
Rickettsias, etc.

5. Realice un flujograma o esquematice el procedimiento de preparación de 5 medios de

cultivos desde la elección, pesaje, cálculos, hasta el producto final. (Cálculos para un
litro).

AGAR PDA
La infusión de papa como
AGAR DE DEXTROSA Y fuente de almidones y la
PAPA dextrosa son la base para
el crecimiento de hongos y
levaduras.

Es un medio de cultivo nutritivo sólido, no selectivo. En él pueden

crecer especies bacterianas y fúngicas, pero su uso está indicado
especialmente para el aislamiento de hongos filamentosos yRealizar los cálculos para 15 cajas
levaduras. También es conocido como medio PDA por la expresiónde Petri
en inglés Potato Dextrose Agar.
39 g 1000 ml

Se preparan 15 cajas de 585 ml xg

Petri
1000 ml 39 g
Casa comercial (39 g en 1 L
585 ml 22,8 g
de agua)
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Metodología

Rehidratar 22,8 g del medio

Reposar 10 a 15 en un litro de agua
minutos destilada

Por último se sirven en la cabina

Calentar agitando
Esterilizar en el medio en sus respectivas cajas
frecuentemente
autoclave y Enfriar de petris, se espera que
hasta el punto de
aproximadamente a solidifique, se tapa y se envuelve
ebullición para
45ºC en papel transparente y se
disolverlo por
guardan en el área estéril.
completo.

El agar Sabouraud, también conocido como

agar dextrosa Sabouraud, es un medio de
cultivo sólido, especialmente enriquecido
para el aislamiento y desarrollo de hongos,
como levaduras, mohos y dermatofitos.

Realizar los cálculos para 40

cajas de Petri

65 g 1000 ml AGAR SABOURAUD

2,600 ml xg

1000 ml 65 g

2,600 ml 169 g

Metodología
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Se preparan 40 cajas de
Petri

Casa comercial (65 g en

1 L de agua) Suspender 169 g de medio
deshidratado en un litro de
agua destilada.
Recomendaciones: Evitar el
sobre calentamiento

Esterilizar a 121°C, Calentar agitando frecuentemente y

distribuir y enfriar a dejar hervir para disolver
temperatura ambiente completamente los ingredientes.
antes de su utilización.

Es un medio selectivo para el recuento de levaduras y

hongos a partir de una gran variedad de muestras
alimenticias. Es nutritivo debido a la presencia de
extracto de levadura y glucosa y selectivo por la
presencia de cloranfenicol que inhibe el crecimiento
bacteriano. El agar es el agente solidificante.

Realizar los cálculos para 10

cajas de Petri
La dextrina y la glicerina son
33,6 g 1000 ml
Agar Extracto de Malta las fuentes de carbono, y la
336 ml xg peptona es una fuente de
nitrógeno
1000 ml 33,6 g

336 ml 11,3 g

Suspender 11,3 g de medio de cultivo en

Metodología
un litro de agua destilada.
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Mezclar bien y disolver calentando

con agitación frecuente

Enfriar a 45-50º C, Hervir hasta disolver por completo NO

mezclar bien y SOBRE CALENTAR y Esterilizar en auto
dispensar el medio en clave a 118°C.
placas.

6. Cuáles son los productos que se usan para crear selectividad en un medio de cultivo,
explique su función.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a

los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una
infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

 Extractos Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales

(por ejemplo carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y
posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados
deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los
más utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta.

 Peptonas Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales

minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o
vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos,
pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales.

 El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de

cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de
las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
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 La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuación.

 Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden a identificarlos.

 El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los

microorganismos menos resistentes.

También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar por ejemplo, la
formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.

 el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido.

 La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría

de las bacterias Gram-positivas.

7. Como se verificaría que un medio de cultivo procesado en autoclave quede realmente

esterilizado.

Rta: El rendimiento del proceso puede confirmarse mediante la supervisión de los cambios
de color en la cinta indicadora que suele aplicarse sobre los paquetes o los productos que
se introducen en el autoclave. También pueden utilizarse indicadores biológicos, como
Attests, que contiene esporas de Bacillus Sterothermophilus, que se encuentran entre los
organismos más resistentes que debe destruir un autoclave. Después de una tanda en el
autoclave, el cristal interno de la ampolla del Attest se rompe, con lo que las esporas
penetran en un medio líquido diferencial. Si el autoclave ha destruido todas las esporas, el
líquido permanece de color azul. De lo contrario, las esporas se metabolizarán y
provocarán un cambio al color amarillo después de dos días de incubación a 56 °C

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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1. BiosLab. (2020). Niveles de Bioseguridad. Madrid. https://www.visavet.es/es/bioslab/niveles-

de-bioseguridad.php

3. Liebana J. (2002). MICROBIOLOGÍA ORAL. 2ª ed. España - McGraw-Hill Interamericana. P. 86

4. OMS. (2005). Manual de Bioseguridad en Laboratorios.3era Edición.

https://santafe.conicet.gov.ar/wp-content/uploads/sites/102/2016/06/OMS-

CLASIFICACION-DE-MICROORGANISMOS-SEGUN-RIESGO.pdf

5. Práctico No, T., Tévez, L., & Cultivo, M. DE. (2006). Universidad Nacional del Nordeste Trabajo
Práctico No 4 Medios de Cultivo.

6. Probiotek. (2020). AGAR CON EOSINA Y AZUL DE METILENO ( EMB ).

https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-con-eosina-y-
azul-de-metileno-emb/

7. Probiotek. (2020). AGAR DE DEXTROSA Y PAPA.

https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-de-dextrosa-y-
papa/

8. Probiotek. (2020). AGAR DE MAC CONKEY.

https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-de-mac-
conkey/

9. Probiotek. (2020). AGAR DEXTROSA SABOURAUD.

https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-dextrosa-
sabouraud/

10.Probiotek. (2020). AGAR NUTRITIVO. https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-

de-cultivo-reactivos/agar-nutritivo/

11.Universidad de Granada. (2018). PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO. UGR.

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https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf