MEDIOS DE

CULTIVOS
“Medios de Cultivos”

Microbiología

Pro. Julián Reyes Mejía

Laboratorista Químico

3ª

Vespertino

Stefany de la Cruz Córdova

Generación 2018-2021

Índice
Introducción
Información general
Medios de cultivo…………………………………………………………………………………………………6
Condiciones que debe de cumplir un medio de cultivo…………………………………………6
Requerimientos energéticos de los microorganismos y no energéticos………………..7
Clasificación según su composición física……………………………………………………………..8
Clasificación según su composición………………………………………………………………………9
Clasificación según su uso……………………………………………………………………………………10
Principales medios de cultivos utilizados en microbiología
Agua peptonada…………………………………………………………………………………………………11
Caldo de azida ……………………………………………………………………………………………………””
Medio Rothe……………………………………………………………………………………………………….””

Medio leoffler……………………………………………………………………………………………………..12
Medio MacCockey………………………………………………………………………………………………””
Medio Mueller Hinton………………………………………………………………………………………..””

Medio Eosina Azul de metileno……………………………………………………………………………13

Medio baird Parker…………………………………………………………………………………………….””
Agar lactasado con púrpura de bromocresol………………………………………………………””

Caldo de bilis y verde brillante……………………………………………………………………………..14

Medio base bordet-gengou…………………………………………………………………………………””
Agar Brucella modificado……………………………………………………………………………………””

Medio chapman………………………………………………………………………………………………….15
Agar chocolate…………………………………………………………………………………………………….””

Medio agar para Haemophillus…………………………………………………………………………...16

Medio base christensen………………………………………………………………………………………..””
Medio citrato de Simmons……………………………………………………………………………………””

Medio Clark y lubs………………………………………………………………………………………………17

Medio cled………………………………………………………………………………………………………….””
Medio agar Columbia……………………………………………………………………………………….…””

Agar D-cocosel…………………………………………………………………………………………………..18
Agar desoxicolato citrato……………………………………………………………………………………””
Medio agar DCLS……………………………………………………………………………………………….19
Medio agar Endo……………………………………………………………………………………………….””
Medio agar de Lownnstein-Jensen…………………………………………………………………….””

Medio coletsos……………………………………………………………………………………………………20
Medio agar patata………………………………………………………………………………………………””

Medio saboraud…………………………………………………………………………………………………21
Medio agar esculina……………………………………………………………………………………………””
Medio agar Haktoen…………………………………………………………………………………………..””

Medio base Hugh y Leiffson……………………………………………………………………………….22

Medio King A………………………………………………………………………………………………………””
Medio King B………………………………………………………………………………………………………””

Medio ordina movilidad……………………………………………………………………………………...23

Medio agar sangre……………………………………………………………………………………………….””
Medio agar sangre azida……………………………………………………………………………..……...””

Medio agar nutritivo…………………………………………………………………………………………...24

Medio agar F-selenito…….……………………………………………………………………………………””

Medio agar S-S…………………………………………………………………………………………………….25

Medio Kliger o KIA……………………………………………………………………………………………….””

Caldo lactosado……………………………………………………………………………………………………26
Medio agar verde brillante…………………………………………………………………………………..””
Medio Wilson y Blair modificado………………………………………………………………………….””

Medio agar XLD…………………………………………………………………………………………………..27

Medio caldo Columbia…………………………………………………………………………………………””
Medio casteñada………………………………………………………………………………………………….29
Medio Sabouraud gentamicina tetrazolium…………………………………………………………30
Medio Schaedler con Vitamina K3…………………………………………………………………………””
Medio agar sangre Columbia…………………………………………………….…………………………31
Introducción
La microbiología es la ciencia que estudia los microorganismos, tanto aquellos
causantes de enfermedades como los beneficiosos. Engloba el estudio de bacterias,
hongos, parásitos y virus. Esto seres para ser vistos por el hombre, necesitan ser
ampliados de tamaño mediante artilugios, tales como el microscopio óptico.
Para la realización del estudio de los microorganismos, antes que nada se necesita
tener desarrollado a estos, para ello es importante emplear el medio de cultivo
adecuado para su desarrollo y así poder ver como se multiplican y actúan en ese
medio.
En la realización del medio de cultivo se necesita saber cuál o cuáles son los
necesarios para el desarrollo de los microorganismos, en qué consiste cada uno de
ellos y los pasos a seguir para obtener el medio de cultivo que queramos. En el
presente manual se abordan conceptos, clasificaciones generales, según su uso, su
composición, etc. Y varios medios de cultivos en los que trae información exclusiva
de sí.

Medios de cultivo
Son todos los nutrientes necesarios para producir lo que queramos,
microorganismos, células, tejidos etc. Uno de los sistemas más importantes para la
identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el
que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo.

Condiciones que debe de cumplir un medio de cultivo

Para un microorganismo crezca en un medio de cultivo de necesario:
 Una composición de nutrientes adecuados a las necesidades de ese
microorganismo
 Condiciones físico-químicas adecuados
Una temperatura óptima. Siempre se deberá mantener la temperatura apropiada
según la especie microbiana.

Grado de humedad. Corresponde a la cantidad de agua que va a

utilizar el microorganismo para su crecimiento. En general,

cualquier medio sólido o Líquido requiere una cierta porción de
agua.

pH. Existen sustancias que van a estabilizar el pH del medio, este tipo de sustancias
reciben el nombre de
buffers o tampones
proporcionando al medio
un pH adecuado y
estable que facilite el
crecimiento microbiano.

Requerimientos energéticos de los microorganismos 6

  Fuentes de Carbono. Existen muchos tipos de fuentes de Carbono, ya que
esto está ligado al metabolismo energético, de la especie microbial; por
ejemplo, algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas
como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En general conocer el tipo
de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación.
 Fuentes de nitrógeno. Fuente menos energética que el carbono pero
necesaria para el desarrollo microbiano. Puede presentarse como proteínas,
peptídicos y aminoácidos. Ejemplo: gelatiniza (proteína compleja).

Requerimientos no energéticos de los microorganismos

 Fuentes de azufre. Todos los microorganismos que utilizan en su
metabolismo azufre lo hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a
veces en forma de tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a
partir de un aminoácido, cómo por ejemplo la metionina, cisteína, tiamina,
etc.
 Fuentes de fosforo. En general, las bacterias que utilizan el fosforo, lo
suelen hacer en forma de fosfatos.
 Iones metálicos. Son utilizados por las bacterias bajo la forma de iones a
concentraciones muy bajas.

Clasificación según su composición física

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Clasificación según su composición física

 Sólidos Semisólidos Líquidos

*Necesita agar Llegar el 50% de agar del Infusiones/caldos

medio de cultivo sólido
14gr/L Sin agar
7gr/L
*Cajas Petri/ tubos de En tubos de ensayo
ensayo Tubo de ensayo

Sólidos. Corresponden aquellos medios donde la proporción en agar es mayor al

15%. La importancia pues de los medios sólidos es muy grande ya que nos permite
el aislamiento, purificación y visualización de su crecimiento en colonias; así como
su posible identificación a través de medios específicos y diferenciales de
caracteres sólidos. Estos son elaborados en cajas Petri o tubos de ensayo.
Semisólidos. Es la mezcla del medio de cultivo sólido y el medio líquido, como su
nombre lo dice tiene una consistencia sólida pero no al 100%, por ende el
contenido de agar es de 50% a la cantidad que debe de haber en el medio sólido
complejo y menos hidratación de la que hay en un medio líquido.
Líquidos. Corresponden a los que también se denominan caldos, no contienen
agar y su composición además de agua, suele contener al menos una fuente de
carbono, sales minerales y en algunas ocasiones, según las características del
medio, factores de crecimiento, proteínas, aminoácidos, etc.

Clasificación según su composición 8

Naturales. Son todos aquellos medios de cultivos que su composición química se
basa en ingredientes naturas, como su nombre lo dice, no lleva dentro de su
composición sustancias elaboradas artificialmente.

Químicamente puros/Sintéticos. Corresponden a estructuras sintéticas puras y

químicamente definidas, qué están o pueden estar disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas de forma que se obtenga una solución adecuada para
permitir el crecimiento del tipo o tipos de microorganismos que se desee.

Semisintéticos. Para la creación de este se necesita una base sintética específica y

a dicha base se le agrega un ingrediente natural en otras palabras son medios
donde parte de su composición corresponden a extractos naturales, puede ser
levadura, leche, sangre, etc. Y la mayor parte del medio de cultivo corresponderá a
una base sintética, químicamente definido para el crecimiento microbiano que se
busca desarrollar.

Cárnicos, huevo, vegetales, leche,

Naturales sangre, productos lácteos, suero,
frutas, granos, seres vivos,

Son a base de productos químicos

Por su Químico puro/ cómo: peptona, Lactosa, glucosa
composición sintético

Está conformado por una base

Semisintético
sintética con un ingrediente natural

Clasificación según su uso

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Primarios/generales. Son aquellos medios de cultivo que no están destinados
exclusivamente para un microorganismo en específico, sino que dentro de este
pueden desarrollarse ya sean diversos tipos de bacterias, protozoos, hongos, etc.
Esto sucede gracias a que:
 No contienen sustancias inhibidoras.
 No contienen sustancias indicadoras de pH.
Aunque si, estos medios de cultivos están altamente enriquecidos con nutrientes,
no pueden cumplir ninguna otra función en específica para un cierto tipo de
microorganismo debido a que no contiene esas sustancias.

Secundarios/diferenciales. Este medio de cultivo es utilizado para diferenciar una

de otras los microorganismos que hayan sido inyectados, dentro de este sólo
pueden desarrollarse si hablamos de bacterias, las bacterias Gram -, gracias a que
contiene:
 Sustancias inhibidoras, cómo NaCl y sales binares, que inhiben el
crecimiento y desarrollo de las bacterias Gram +.
 Si contienen sustancias indicadoras de pH.

Selectivos. Estos medio de cultivo son diseñados exclusivamente y únicamente un

solo tipo de microorganismo, dentro de este medio de cultivo no puede crecer otra
cosa más que el microorganismo para el cual está hecho.
 Contiene inhibidores
 Contiene antibióticos
Estos dos componentes del medio de cultivo no deben dañar a lo que nosotros
queremos reproducir dentro de él.

Transporte. Se utiliza para el traslado de muestras tomadas con isopo, para ser
llevado a otro medio de cultivo o laboratorio.
 No contienen sustancias inhibidoras
 No contienen sustancias indicadoras de pH
 Pobremente enriquecidos (para que el microorganismo no se reproduzca
masivamente.
 Se trabaja en tubos de ensayo
 Es eficaz entre las 24 y 48hrs.
Principales medios de cultivos utilizados en microbiología
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Agua peptonada.
 Indicación: determinación de la producción de indol debido a su alto
contenido en triptófano.
 Composición: peptona en medio acuoso con pH 7.
 Modo de utilización: incubación a 37°C durante 24-48hrs.
Se determinara el indol tras la adición de 5 o 6 gotas de reactivos de Kovacs en
medio de potasa (KOH 40%); la aparición de color rojo de la superficie (anillo)
indicará indol positivo.

Caldo de azida y etil violeta (Medio Litsky)

 Indicación: determinación de streptococcus faecalis en agua. Analítica de
agua
 Composición: por litro, 20 gramos de bio-lysat, 5 gramos de ClNa, 2.7
gramos de fosfato biotásico, 2.7 gramos de fosfato monopotasico, 0.4
gramos de azida sódica, y 0.83 miligramos de etil violeta.
 Modo de utilización: este medio es muy selectivo ya que la azida sódica
inhibe el crecimiento de las bacterias Gram – y de muchas Gram +
permitiendo el crecimiento de streptococcus faecalis cuya presencia en el
medio indicaría contaminación fecal. Los tubos se inoculan por triplicado a
las diluciones adecuadas de las aguas que se van a estudiar incubándolas a
37°C durante 48hrs.
La presencia de turbidez y en ocasiones la formación de un deposito ligeramente
violácido en el fondo del tubo indica prueba positiva.

Medio Rothe
 Indicación: determinación de streptococcus faecalis en agua. Analítica de
agua.
 Composición: por litro, 15 gramos de peptona, 4.5 gramos de extracto de
carne de buey, 7.5 de glucosa, 7.5 de cloruro sódico, y 0.5 de azida sódica.
 Modo de utilización: la azida sódica proporciona propiedades selectivas. Se
utiliza para la determinación cuanticualitativa de estreptococos en aguas y
alimentos y cualquier producto sustentable de ser contaminado por líquidos
residuales.

Medio Loeffler

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  Indicaciones: determinación del bacilo diftérico. (corinebacterium
diptheriae)
 Composición: por litro, 70 gramos de suero de buey, 2,5 gramos de caldo
 Modo de utilización: sembrar lo antes posible los tubos a 37 °C y examinar
hacia las 24 horas.
Revelado de la prueba o lectura: superficie blanquecina.

Medio Macconckey
 Indicación: aislamiento e identificación de enterobacterias.
 Composición: por litro, 20 gramos e mezcla de peptonas, 1,5 gramos de
sales biliares, 10 gramos de lactosa, 5 gramos de cloruro de sódico, 0,03
gramos de rojo neutro, 0,001 gramos de cristal violeta y 12,5 gramos de
agar, o algo superior.
 Modo de utilización: sembrar directamente en placa, incubar a 37 °C en
estufa de cultivo y dejar 24-48 horas.
Colonias rojas o rosadas son características de E. coli. Colonias rosadas y mucosas
son características de Enterobacter aerogenes. Colonias incoloras no
fermentadoras de lactosa son características de salmonella, shigella y
pseudomonas. Este medio en general es empleado para el aislamiento de géneros
patógenos del intestino. Las sales biliares y el cristal violeta son dos componentes
que van a inhibir a los gérmenes Gram+.

Medio Mueller Hinton

 Indicación: aislamiento de Neiserias. Para la realización de antibiograma.
 Composición: Por litro, 300 gramos de infusión de carne de buey, 1,5 gramos
de almidón, 17,5 gramos de peptona de caseína y 17 gramos de agar.
 Modo de utilización: Se suele utilizar para el cultivo de meningococos y
gonococos. Si se cultiva meningococo se recomienda añadir una mezcla de
VCN (vancomicina-Nistatina) que inhibe prácticamente la mayor parte de los
microorganismos permitiendo el crecimiento de meningococos. Si se cultiva
gonococo también es recomendable añadir VCN e incubar en atmosfera
húmeda y enriquecida con dióxido de carbono al 10%.
Revelado de la prueba o lectura: sub crecimiento en las placas.

Medio Eosina Azul de metileno

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  Indicación: Aislamiento de enterobacterias.
 Composición: Por litro, 10 gramos de lactosa, 10 gramos de peptona de
gelatina, 2 gramos de fosfato bipotásico, 0,4 de eosina, 0,065 de azul de
metileno y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: Este medio se utiliza para diferenciar las
enterobacterias que fermentan la lactosa (coliformes) de las que no la
fermentan (no coliformes). Tras inoculación en placa por agotamiento se
incubará en estufa de cultivo a 37°C durante 24-48 horas.
Las colonias negruzcas con un color verde metálico serán características de E. Coli.
Las colonias parduzcas y mucosas rosadas serán características de enterobacteria
aerogenes. Las colonias transparentes o ambarinas serán características de
salmonella y Shigella (no coliformes)

Medio base Baird Parker

 Indicación: se utiliza para el aislamiento y recuento de Staphylococcus
coagulosa positivo en productos alimenticios.
 Composición: por litro, 10 gramos de peptona trípsica de caceína, 5 gramos
de extracto de carne, 1 gramo de extracto de levadura, 10 gramos de
piruvato sódico, 12 gramos de glicocola, 5 de cloruro de litio, y 17 gramos de
agar.
 Modo de utilización: sembrar en placa e incubar a 37°C durante al menos
unas 24hrs.
Las colonias de staphylococcus aureus son negras brillantes y con un halo claro de
unos 5mm de diámetro. Otros gérmenes que podrían aparecer serían levaduras en
forma de colonias blancas, ciertos bacilos en forma de colonias marrones mates o
micrococos como colonias con aspecto pardo negruzco mate.

Agar lactosado con púrpura de bromocresol

 Indicación: para el aislamiento de coliformes (enterobacterias lactosa
positiva).
 Composición: por litro, 3 gramos de extracto de carne, 10 gramos de lactosa,
5 gramos de peptona trípsica de caseína, 25 miligramos de púrpura de
bromocresol y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: se utiliza para aislar coliformes, estos al fermentar la
lactosa producen medio ácido lo que provocara el viraje del purpura de
bromocresol. Incubar a 37°C tras su siembra en placa durante 24hrs.

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El viraje de púrpura de bromocresol da lugar a colonias amarillas (coliformes).
Pueden aparecer colonias azules indicando enterobacterias lactosa negativo u
otros microorganismos y, por tanto no coliformes.

Caldo de bilis y verde brillante

 Indicación: aislamiento e identificación de coliformes.
 Composición: por litro, 20 gramos de bilis de buey, 10 gramos de peptona de
gelatina, 10 gramos de lactosa, 13.3 miligramos de verde brillante.
 Modo de utilización: el caldo bilis verde brillante está indicando como test
de presunción para la investigación de coliformes en la leche y otros
alimentos. Tras su inoculación e incubación a 37°C deberá permanecer en
estufa de cultivo al menos 24hrs.
Bilis y verde brillante inhiben el crecimiento de las bacterias Gram+ y muchas
Gram- facilitando el crecimiento de coliformes. La aparición en el medio antes
de 48hrs indica que han fermentado la lactosa y por tanto la presencia de
coliformes.

Medio base bordet-gengou

 Indicación: para el aislamiento de bordetella Pertussis, agente teológico de
la tosferina
 Composición: por litro 120 gramos de infusión de patata, 5 gramos de
peptona de carme, 5.5 de cloruro sódico, 5 gramos de peptona trípsica de
caseína, y 20 gramos de agar.
 Modo de utilización: colocar la caja petri abierta a unos 10 cm de la boca del
enfermo y pedirle que espectore o siembre con una torunda dónde se a
recogido previamente la muestra. Incubar a 37°C en estufa de cultivo y
examinar en 48hrs.
Colonias de color metálico (gotitas de mercurio), lisas, opacas y muy pequeñas que
indican la presencia de bordetella pertussis. Si el medio contuviera al menos 30%
de sangre aparecería además, en torno a las colonias una zona hemólisis.

Agar brucella modificado

 Indicación: para el aislamiento selectivo de Brucellas.
 Composición: por litro, 10 gramos de peptona trípsica de caseína, q gramo
de glucosa, 10 gramos de peptona pépsica de carne, 2 gramos de extracto
de levadura, 01 gramo de bisulfito sódico, 5 gramos de cloruro sódico, 1.4
miligramos de etil violeta y 17 gramos de agar. Al ser el medio modificado

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 incluye además polimixina B (3,000 unidades), bacitracina (12,500
unidades) y cicloheximida (50 gramos).
 Modo de utilización: este medio ya viene preparado para el aislamiento
selectivo de Brucellas a partir de muestras contaminadas, por ejemplo hes,
leche y muestras de autopsia. En su composición presenta etil violeta y
antibióticos que permiten la inhibición de muchos microorganismos
facilitando el crecimiento selectivo de esta. Se recomienda sembrar en una
placa atmósfera enriquecida con CO2 al 10%.
La revelación de la prueba es su propio crecimiento, ya que los demás gérmenes se
encuentran inhibidos.

Medio Chapman
 Indicación: aislamiento de especies de género Staphylococcus.
 Composición: por litro, 1 gramo de extracto de carne, 5 gramos de peptona
tripsina de caseína, 5 gramos de peptona de carne, 75 gramos de cloruro
sódico, 15 gramos de D-manitol, 25 gramos de rojo fenol, y 15 gramos de
agar.
 Modo de utilización: la presencia de cloruro sódico, a concentración tan alta
va a impedir el crecimiento de muchos gérmenes. El manitol es un azúcar
especialmente utilizado por ciertos estafilococcus con la siguiente
producción de acidez, hecho que se pone de manifiesto al virar el rojo fenol,
en medio ácido amarillo, su incubación se realizara a 37°C en estufa de
cultivo durante 24-48hrs.
La colonias de Staphylococcus aureus son algo grandes y al fermentar en manitol
presentan un aspecto amanillo dorado. Staphylococcus epidermides son pequeñas
y no presentan el manitol, observándose de color rojizo o purpúreo. Esta prueba es
orientada y debe complementarse con el estudio de la coagulosa.

Agar chocolate. Medio de Thayer y Martin.

 Indicación: es un medio que permite el crecimiento de muchos
microorganismos pero es muy utilizado para el aislamiento de gonococos y
meningococos a través de una serie de modificaciones en el medio.
 Composición: por litro, 10 gramos de hemoglobina, 4 gramos de fosfato
dipotásico, 1 gramo de fosfato monopotasico, 1 gramo de almidón, 5
gramos de cloruro sódico, 15 gramos de bio-Polytone, y fórmula Polyvimex
formada por vitamina B12, adenina, cistina, tiamina, cisteína, nitrato férrico,
glucosa, vancomicina, etc.

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  Modo de utilización: incubar a 35°C en medios muy húmedos y enriquecidos
con CO2.
Los gonococos, crecerán hasta las 24hrs como pequeñas colonias grises con bordes
enteros o festeonados. Los meningococos aparecerán entre 16 y 24hrs, como
colonias opacas blanquecidas o amarillentas con bordes irregulares y a veces con
aspecto mucoso.

Medio para Haemophillus (agar chocolate polyvitex)

 Indicación: aislamiento y estudio del género Haemophillus.
 Composición: corresponde al medio agar chocolate polyvitex.
 Modo de utilización: se siembra en medios de cultivo donde es frecuente
que se adicionen factores de crecimiento V y X, incubando a 37°C durante
24-48hrs.
El revelado o prueba de lectura indica el crecimiento de de colonias donde es muy
característico el amplio halo de hemólisis.

Medio base Christensen

 Indicación: para la realización de la prueba de la ureasa.
 Composición: por litro, 1 gramo de glucosa, 20 gramos de fosfato
monopotásico, 1 gramo de peptona de gelatina, 5 gramos de cloruro sódico,
20 gramos de urea, 12 miligramos de rojo fenol, y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: incubación a 37°C tras la siembra en tubo, en superficie
y picadura.
A partir de unas 18hrs hasta los 6 días, las cepas de ureasa positiva romperán la
urea formando amoniaco, y alcalinizando el medio de tal forma que el rojo fenol
virará a rosa intenso.

Medio citrato de Simmons

 Indicación: prueba de citrato. Esta prueba es muy utilizada para la
investigación de bacilos Gram-.
 Composición: por litro, 1 gramo de fosfato amoniaco, 2 gramos de citrato
sódico, 5 gramos de cloruro sódico, 1 gramo de fosfato bipotásico, 0.08
gramos de azul de bromotimol, 0.20 gramos de sulfato magnésico, y 15
gramos de agar.
 Modo de utilización: sembrar el medio en tubo de picadura y superficie
incubándolo entre 30 y 37°C durante 24-48hrs, se puede dejar hasta 10 días.

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Los gérmenes que utilicen el citrato como fuente de energía podrán crecer en este
medio produciendo un cambio a color azul.

Medio Clark y Lubs

 Indicación: determinación en el microorganismo problema de la producción
de acetoína o acetil metil carbinol (prueba de Voges-Proskauer).
 Composición: Por litro de agua, 5 gramos de glucosa, 7 gramos de peptona y
5 gramos de fosfato potásico.
 Modo de utilización: tras siembra de los tubos de medio líquido dejar
incubar a 37°C en estufa de cultivo durante 24-48hrs.
La determinación de acetoína requiere, tras la incubación de un proceso de
revelado que consiste en añadir gotas de alfa-naftol al 6% en alcohol de 90° y a
continuación en el mismo medio, unas gotas de KOH al 40%, agitar y esperar unos
minutos. La presencia de un color rojo asalmonado indica que hay acetoína y por
tanto, la prueba es positiva.

Medio Cled
 Indicación: para el recuento e identificación de gérmenes en las vías
urinarias.
 Composición: por litro, 4 gramos de peptona trípsica de caseína, 4 gramos
de peptona de gelatina, 10 gramos de lactosa, 10 gramos de extracto de
carne, 0.128 gramos de L-cistina, 0.020 gramos de azul bromotimol, y 15
gramos de agar.
 Modo de utilización: sobre el medio en placa se añade el inoculo y se
extiende con el asa de siembra o de Digrasky. Se inocula a 37°C en estufa de
cultivo y la lectura se realiza entre 18-24hrs tras la siembra.
Son muchos los gérmenes causales de infecciones y cuando hay infección suele ser
originada por una sola especie. Las colonias más frecuentes con E. coli (colonias
amarillas, pequeñas, opacas y con centro ligeramente oscuro), Proteus (colonias
azules y traslucidas), Klebsiella (amarillas o azuladas pero muy mucosas)
Pseudomonas aerulis (muy pequeñas o puntiformes amarillas) y Staphylococcus
aureus (pequeñas y de amarillo muy intenso u oscuro).

Medio agar Columbia

 Indicación: Investigación de microorganismos hemolíticos.
 Composición: Por litro, 5 gramos e peptona trípsica de caseína, 5 gramos de
peptona de carne, 3 gramos de peptona trípsica del corazón, 5% de carne de

17
 cordero, 1 gramos de almidón de maíz, 5 gramos de cloruro sódico, y 13.5
gramos de agar.
 Modo de utilización: es un medio adecuado para el aislamiento de
estreptococos y pneumococos. Consiste en una mezcla de peptona donde
tras la siembra, generalmente por agotamiento en placa y incubación a unos
37°C en la estufa de cultivo durante 24-48hrs, se observan zonas de
hemólisis en torno a la colonia más o menos neta.
Los gérmenes hemolíticos se observan como colonias con amplias y claras zonas de
hemólisis alrededor de sus colonias. Los gérmenes hemolíticos se observan como
colonias con zonas ligeras o difusas de hemólisis entorno a sus colonias. Los
gérmenes Y hemolíticos se observan como colonias sin halos de transparencia.

Agar de D-cocosel
 Indicaciones: aislamiento selectivo de estreptococos del grupo D.
 Composición: por litro, 5 gramos de extracto de levadura, 10 gramos de bilis,
20 gramos de mezcla de peptonas, 1 gramo de cloruro sódico, 1 gramo de
esculina, 0.5 gramos de citrato férrico amoniacal, 0.25 de azida sódica, y
13.5 de agar.
 Modo de utilización: sembrar por agotamiento e incubar a 37°C realizando la
lectura al cabo de 24-48hrs.
Los estreptococos del grupo D se encuentran en forma de pequeñas colonias
traslucidas rodeadas por un halo negro. En ciertas ocasiones se podrían confundir
con Listerias.

Agar desoxicolato citrato

 Indicación: aislar enterobacterias patógenas.
 Composición: por litro, 17 gramos de desoxicolato sódico, 20 gramos de
citrato sódico, 1 gramo de citrato férrico, 10 gramos de lactosa, 10 gramos
de peptona, 375 gramos de extracto de carne, 0.05 de rojo neutro, y 17
gramos de agar.
 Modo de utilización: la muestra de heces, orina y otros productos, sembrar
por agotamiento e incubar en estufa de cultivo a 37°C durante 24 y 48hrs
El citrato y desoxicolato sódico van a inhibir todos los gérmenes Gram+ y ciertos
Gram- de tal forma que se pueden observar colonias transparentes (Salmonellas
tíficas y síguelas), colonias rojas, y grandes (gérmenes lactosa + como, por ejemplo

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Escherichia) colonias anaranjadas rojizas muy pequeñas y puntiformes (Yersinia
pestis) y colonias grandes y amarillas (Yersinia pseudotuberculosis).
Medio agar DCLS (Dexicolato-Citrato-Lactosa-Sacarosa)
 Indicación: aislamiento de salmonella, Shigella, y Vibrio.
 Composición: por litro, 2.5 gramos de desoxicolato sódico, 10.5 gramos de
citrato sódico, 5 gramos de sacarosa, 5 gramos de lactosa, 3 extracto de
carne, 7 gramos de pepona, 5 gramos de tiosulfato sódico, 0.03 de rojo
neutro y 12 gramos de agar. La proporción de agar puede estar algo más
aumentada.
 Modo de utilización: el medio agar DCLS se utiliza para aislar especies
patógenas de enterobacterias. Tras la siembra en placa se incuba en estufa
de cultivo a 37°C entre 18 y 24hrs.
Las colonias rojas indican la presencia de coliformes y proteus. Las colonias
transparentes o ligeramente rosadas son características de Salmonella y Shigella.

Medio de agar Endo

 Indicación: para el aislamiento de coliformes y otras entorobacterias.
 Composición: por litro, 10 gramos de lactosa, 10 gramos de peptona, 2.5
gramos de sulfito sódico, 10 gramos de fosfato bipotásico, 0.5 gramos de
fuchsina básica y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: se emplea en placas Petri y tras la siembra se incuba
37°C en estufa durante 24-48hrs.
Las colonias rosas o rosadas son características de coliformes (enterobacterias
lactosa positiva). Las colonias incoloras y traslúcidas son características de bacterias
Gram- lactosa negativo.

Medio de Lownnstein-Jensen.
 Indicación: para el cultivo de Mycobaterium tuberculosis y otras
microbacterias.
 Composición: por litro, 2.5 gramos de fosfato monopotásico, 0.24 gramos de
sulfato magnésico, 30 gramos de fécula de patata, 3.6 gramos de
asparragina, 0.6 gramos de citrato magnésico y 0.4 gramos de verde
malaquita.
 Modo de utilización: aunque se comercializa en forma de tubos o placas
perfectamente cerradas suelen utilizarse preferiblemente en tubos como
medida cautelar. Su siembra se realiza por estría en un total de 4 tubos y se
incuba a 35-37°C en posición horizontal examinándose a los 4 días y a la
19
 semana con el fin de poder detectar las primeras microbacterias, a partir de
aquí se observaran los días 14,21 y 28.
El verde malaquita o el rojo congo que puede llevar el medio de cultivo inhibe el
crecimiento de la mayor parte de las bacterias proporcionándoles una gran
selectividad. Sí pues el crecimiento en este medio de colonias sería indicativo de
microbacterias. Deberá de todas formas confirmarse con otras pruebas, como por
ejemplo, tinción de ácido alcohol resistencia.

Medio coletsos.
 Indicación: para el cultivo de microbacterias
 Composición: es muy compleja y contiene prácticamente una composición
análoga a la del medio anterior más pirubato sódico, azul de tornasol,
glicerina, huevo completo, cenizas de antracida, oseína, etc.
 Modo de utilización: el medio coletso es especialmente apropiado para el
cultivo de microbacerias antípicas. Con respecto a la siembra es microbial es
exactamente igual al caso anterior.
Dan buenos resultados y permite el crecimiento es muy selectivos de
microbacterias, inhibiendo el resto de microorganismos. Su crecimiento es rápido
hacía la primera semana.

Medio agar patata

 Indicación: es utilizado para el aislamiento, cultivo y recuento de levaduras y
hongos en general.
 Composición: por litro, 20 gramos de glucosa, 200 gramos de infusión de
patata y 15-17 gramos de agar.
 Modo de utilización: consiste en sembrar las placas Petri e incubar a
temperaturas comprendidas entre 28 y 37°C (la mayor parte de ellas crecen
mejor y más rápidamente a temperatura de 28°C), durante 24 y 48hrs.
Las colonias que aparecen pueden ser muy diferentes según la cepa microbial, por
lo general los hongos (forman micelares) suelen dar colonias secas generalmente
grandes (que suelen llegar a ocupar toda la placa)y de aspecto algodonoso y las
formas levaduriformes suelen dar colonias grandes y de aspecto muy cremoso o
mucoso, aunque en estas últimas hay muchas excepciones.

Medio sabouraud 20
  Indicación: es utilizado para el aislamiento e identificación de hongos
(formas micelares y formas levaduriformes)
 Composición: por litro, 10 gramos de mezclas de peptona de caseína y carne
entre 20 y 40 gramos de glucosa (si lleva 40 gramos el medio se llamará
saboraud glucosano) y entre 15 y 17 gramos de agar.
 Modo de utilización: en general todos los hongos crecen muy bien en
medios muy azucarados (Por ejemplo las mermeladas nunca se pudren, se
enmohecen). Estos medios con alta proporción de glucosa van a inhibir el
crecimiento de las bacterias facilitando el crecimiento de hongos. En este
sentido tras la siembra de agotamiento o estría de las placas Petri o tubos se
incuban preferiblemente a 28°C en estufa de cultivo entre 24 y 48hrs.
Tras este tiempo y dependiendo del tipo de microorganismos se observara el
crecimiento de colonias que serán muy diferentes según el tipo de levadura,
aunque estas suelen presentar un aspecto cremoso brillante o mucoso y el tipo de
hongos que suelen dar colonias que fácilmente pueden cubrir oda la placa o tubo
presentan un aspecto algodonoso (por la presencia de sus micelios).

Medio agar esculina

 Indicación: para la diferencia de Listeria monocytogenes y Erypsipetothrix
 Composición: por litro, 1 gramo de esculina, 20 gramos de peptona, 0.5
gramos de citrato de hierro amoniacal y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: se siembra en tubo por picadura. Se incuba en estufa a
37°C y se establece la lectura después de 24 y 48hrs de su incubación,
pudiéndose dejar hasta 4 horas para detectar reacciones tardías.
Si el tubo se ennegrece es característico de Listeria monocitogenes y sí, no,
Erysipelothrix.

Medio de agar Haktoen

 Indicación: aislamiento de enterobacterias patógenas.
 Composición: por litro, 9 gramos de sales biliares, 3 gramos de extracto de
levadura, 12 gramos de lactosa, 12 gramos de sacarosa, 2 gramos de
salicina, 12 gramos de peptona, 5 gramos de cloruro sódico, 5 gramos de
hiposulfito sódico, 1.5 gramos de citrato férrico amoniacal, 0.064 de azul de
bromotimol, 0.040 de fuchsina ácida y 13.5 gramos de agar.
 Modo de utilización: incubar a 37°C después de la siembra en placa y dejar
entre 24-48hrs en estufa de cultivo.

21
Colonias amarillas salmón son características de Escherichia, Serratia, Klebsiella,
Citobacter, Enterobacter, y Vibrio cholerae. Colonias verdes azuladas son
características de Shigella, Salmonella, Providencia, y Proteus morgais. Colonias
azules parduzcas son características de Pseudoma.

Medio base de Hugh y Leiffson

 Indicación: para conocer el metabolismo oxidativo y/o fermentativo de los
gérmenes a estudio.
 Composición: por litro, 5 gramos de cloruro sódico, 2 gramos de peptonas,
0.3 gramos de fosfato dipotasico, 0.03 gramos de azul bromotimol, y 2.5
gramos de agar.
 Modo de utilización: tras la siembra por picadura de 2 tubos de medio O/F a
uno de los cuales se le añade una capa de aceite de parafina estéril con el fin
de crear un ambiente anaerobio, se dejan es estufa de cultivo a 37°C
durante 48hrs.
Se observara en cual de los dos o en los dos se ha producido ácido y, por tanto,
viraje amarillo, así como la producción de pequeñas burbujas (gas). Habrá
fermentación (germen anaerobio facultativo) si ambos tubos presentan color
amarillo. Habrá oxidación (germen aerobio estricto) cuando haya virado a amarillo
el tubo sin parafina.

Medio King A
 Indicación: para la identificación de Pseudomonas aeruginosa.
 Composición: por litro, 1.4 gramos de cloruro magnésico, 10 gramos de
sulfato potásico, 20 gramos de peptona de gelatina y 13.6 gramos de agar.
La proporción en agar puede ser superior.
 Modo de utilización: se siembran los tubos en superficie y por picadura y se
incuban entre 30 y 37°C durante 24-48hrs.
El color verde del cultivo indica la presencia de piocianina, típico de Pseudomonas
aeruginosa. Se pueden añadir unas gotas de cloroformo en cuyo caso pasará a
color azul. En ocasiones, puede aparecer un rojo marrón en el medio debido a la
formación de piorrubina.

Medio King B
 Indicación: identificación en general de Pseudomonas.
 Composición: por litro, 1.5 gramos de sulfato magnésico, 1.5 gramos de
sulfato bipotásico, 20 gramos de mezclas de peptonas, y 14 gramos de agar.

22
  Modo de utilización: igual que en el caso anterior.
Se favorece la producción de pioverdina que es un pigmento verde fluorescente
insoluble con el cloroformo, lo que le diferencia de la piocianina. Este medio sirve
para diferenciar Pseaudomonas fluorescens de Pseudomonas aeruginosa.

Medio orditina movilidad

 Indicación: identificación de la movilidad bacteriana. Prueba especialmente
útil para el estudio de enterobacterias.
 Composición: r litro, su composición es exactamente igual a la del medio
Mueller, sirve para investigar la presencia e de descarboxilasas, al que se le
añade L-ornitina al 1% y agar al 0.35%
 Modo de utilización: en el medio ya preparado y estéril se sembrar en tubos
por picadura central con un asa en hilo recto y se incubara a 37°C en estufa
de cultivo durante 18-24hrs, aunque si no aparecen resultados en ese
tiempo se puede prolongar la incubación a 48hrs, a partir de aquí la prueba
se da finalizada.
Las enterobacterias que todas fermentan la glucosa producirán una acidicación del
medio lo que originara un cambio de color o viraje de violaceno amarillo. En estos
casos, la ODC (Ornitín DesCarboxilasa) es negativa. Si el fondo del tubo queda sin
virar, es decir, violaceno, se tratara de ODC positiva, habiendo utilizado la bacteria
la ornitia y alcalinizando al medio.
El germen móvil dará lugar a una discusión lateral de la estría por picadura central
de la siembra.

Medio agar sangre

 Indicación: cultivo en general de muchos gérmenes.
 Composición: por litro, 375 gramos de infusión de corazón y músculo, de
cloruro sódico, 10 gramos de peptona pépsica de carne, 15 gramos de agar y
del 5 al 10% del volumen total de sangre desfibrinada estéril.
 Modo de utilización: sembrar en placa Petri e incubar a 37°C en estufa de
cultivo durante 18 y 24hrs.
El crecimiento de las colonias cuyo aspecto morfológico así como su posible
hemólisis es variable según el tipo de germen crecido.

Medio agar sangre azida.

 Indicación: es un medio enriquecido con azida sódica que inhibe el
crecimiento de las bacterias Gram- y muchas Gram+ permitiendo el

23
 aislamiento de Streptococcus y Staphilococcus así como para investigar
simultáneamente los procesos de hemólisis
 Composición: por litro, igual que el medio agar sangre al que se le añade una
pequeña cantidad de azida sódica
 Modo de utilización: análogo a la siembra del medio anterior.
La presencia de las pruebas en el medio seria en el medio seria indicativo de
Streptococcus y Staphilococcus, ya que el resto están inhibidos.

Medio agar nutritivo

 Indicación: es un medio de uso corriente para el cultivo de gérmenes en
general, así como su recuento
 Composición: por litro, 3 gramos de extracto de carne de buey, 5 gramos de
peptona tripsina de gelatina, 15 gramos de agar y pequeñas cantidades de
cloruro de sodio y glucosa.
 Modo de utilización: tras la siembra en tubos o en placas se incubaran a
temperaturas comprendidas entre 28°C y 37°C durante 24-48hrs. Es un
medio muy general y no requiere de exigencias particulares.
Visualización de las colonias que podrán ser muy variables según el tipo de
microorganismos que ha crecido.

Medio agar F-selenito

 Indicación: medio enriquecido para el aislamiento de Salmonella
 Composición: por litro, 5 gramos de mezcla de peptonas de caseína y carne,
4 gramos de lactosa, 10 gramos de fosfato sódico, y 4 de selenito sódico.
 Modo de utilización: se puede utilizar a partir de muestras de heces u orina.
Si es de heces se añadirá al tubo de unos 10 a 15 mililitros de caldo de Selito,
1 o 2 gramos de heces, agitar e incubará a 35°C en estufa de cultivo durante
12-24hrs. No conviene dejarlo más de 24hrs porque a partir de este tiempo
pueden crecer otros microorganismos. Si la muestra es de orina a un
volumen de medio caldo Selenito doble concentrado se le añade un
volumen igual de orina, se agita e incuba a 35°C en estufa de cultivo durante
12-24hrs.
Deberá realizarse entre 12 y 24hrs ya que si hubiera enterobacterias tíficas y
paratíficas se desarrollarían muchos, más rápidas y abundantes que los coliformes,
pero a partir de las 24grs el número de coliformes es tan grande que dificulta la
lectura.

24
Medio agar S-S
 Indicación: medio de aislamiento para Salmonella y Shigella
 Composición: por litro, 5 gramos de mezcla de peptonas de caseína y carne,
5 gramos de extracto de carne de buey, 10 gramos de lactosa, 8.5 gramos de
citrato sódico, 8.5 de tiosulfato sódico, 1 gramo de citrato de hierro, 8.5
gramos de sales biliares, 0.025 gramos de rojo neutro, 15 gramos de agar y
0.330 de verde brillante.
 Modo de utilización: el agar S-S puede sembrarse a partir de cualquier
muestra orgánica susceptible de contener Salmonella y Shigella; una vez
sembrado generalmente por agotamiento en estría en placas Petri, incubar
a 37°C en estufa de cultivo durante 24-48hrs.
Las colonias que fermentan la bacteria como los coliformes son rojas o rosada. Las
colonias que no fermentan las bacterias son incoloras. Las colonias que producen
SH2 son la presencia de tiosulfato y citrato férrico del medio producen un
precipitado negro en sus colonias.

Medio Kliger o KIA (Kliger Iron Agar)

 Indicación: para realizar la prueba de la lactosa, glucosa, gas y SH 2. Es muy
utilizado para la identificación de bacilos y cocobacilos Gram-
(enterobacterias)
 Composición: por litro, 10 gramos de lactosa, 20 gramos de mezclas de
peptona, 5 gramos de cloruro sódico, 1 gramos de lactosa, 0.5 gramos de
citrato férrico amoniacal, , 0.5 gramos de tiosulfato sódico, 0.025 gramos de
rojo fenol y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: los tubos de agar inclinados con KIA se siembran por
picadura y superficie y se incuban a 37°C en estufa de cultivo durante 24 a
48hrs.
Si fermenta solo la glucosa, acidifica solo el tubo del fondo virando el rojo fenol a
amarillo en esta zona. Si fermenta solo la lactosa, el viraje amarillo del rojo fenol
aparece solo en la parte superior del tubo. Si el agar se rompe o forma una cámara
de aire en el fondo del tubo indica la presencia de gas. Si aparece un precipitado
negro en cualquier parte del tubo, especialmente en el fondo, indica la presencia
de SH2.

25
Caldo lactosado.
 Indicación: aislamiento de coliformes y gérmenes lactosa positivo
  Composición: por litro, 3 gramos de extracto de carne, 5 gramos de peptona
de gelatina, 5 gramos de lactosa, 0.86 gramos de púrpura de bromocresol.
 Modo de utilización: su uso se establece al poner de manifiesto la presencia
de coliformes.
Viraje amarillo de púrpura de bromocresol por la acción del medio ácido cuando
fermenta la lactosa.

Medio agar verde brillante

 Indicación: aislamiento de Salmonella, excepto Salmonella typhi y
Salmonella paratyphi.
 Composición: por litro, 10 gramos de mezcla de peptona de caseína y carne,
10 gramos de lactosa, 10 gramos de sacarosa, 3 gramos de extracto de
levadura, 5 gramos de cloruro sódico, 0.08 de rojo fenol, 20 gramos de agar
y 12.5 miligramos de verde brillante.
 Modo de utilización: sembrar abundantemente por agotamiento en estría e
incubar a 37°C
Las placas se examinan después de 48hrs donde se observaran colonias
características de Salmonella de color rojizas, rosadas o casi blanquecinas
dependiendo del tiempo de incubación. Los gérmenes sacarosa positiva o lactosa
positiva (no Salmonella) dan colonias verdosas rodeadas de una zona brillante
amarillo verdoso.

Medio Wilson y Blair modificado

 Indicación: medio complejo enriquecido con sulfito de bismuto empleado
para el aislamiento selectivo de Salmonella.
 Composición: por litro, 5 gramos de extracto de carne de buey, 5 gramos de
glucosa, 10 gramos de mezcla de peptonas de caseína y carne, 4 gramos de
fosfato disódico, 0.4 gramos de sulfato ferroso, 0.025 gramos de verde
brillante, 8 gramos de sulfito bismuto, y 20 gramos de agar.
 Modo de utilización: sembrar por agotamiento e incubar a 35°C en estufa de
cultivo durante 48hrs.
Las colonias negras son reflejos metálicos característicos de la Salmonella typhi. Las
colonias verdes son típicas de Salmonella paratyphi y Salmonella chalerasesuis. Las
colonias negras sin reflejos metálicos, son características de Salmonella enteritidis.
Los coliformes estarán prácticamente inhibidos por la acción del sulfito bismuto,
Shigella podría crecer en este medio, aunque mal y sus colonias son color pardo
verdoso. 26
Medio agar XLD (agar xilosa-lisina-dexicolato)
 Indicación: es utilizado para el aislamiento de enterobacterias patógenas
 Composición: por litro, 3 gramos de extracto de levadura, 5 gramos de
cloruro sódico, 3.5 gramos de xilosa, 5 gramos de L-lisina, 7.5 gramos de
lactosa, 7.5 gramos de sacarosa, 0.08 gramos de fenol rojo, 6.8 gramos de
tiosulfato sódico, 0.8 gramos de citrato de hierro amoniacal, 2.5 gramos de
dexicolato sódico, y 15 gramos de agar.
 Modo de utilización: este medio se recomienda para aislar enterobacterias
patógenas, especialmente las correspondientes al género Shigella. Tras la
siembra en placa por agotamiento en estría se encubará a 37°C en estufa de
cultivo durante 18-24hrs.
Para realizar la lectura deben considerarse los siguientes criterios:
1) La descarboxilación de la lisina convirtiéndola en cadaverina, que es un
producto básico que alcaliniza el medio prolongando un cambio del
indicador de pH, el rojo fenol a rojo, es decir, en estos casos las colonias
serán rojas, hecho que es característico de Shigella, Providencia y Salmonella
SH2 negativas.
2) Fermentación de azucares (xilosa, lactosa y sacarosa), produciendo acidez
en el medio con el consiguiente viraje de amarillo del indicado de pH rojo
fenol, en este caso las colonias que fermentan al menos dos azucares serán
amarillas, hecho que es característico de Escherichia, Citrobacter, Serratía,
Proteus, Enterobacter y klebsiela.
3) Si producen SH2, con la presencia de tiosulfato sódico y el citrato férrico
formaran un precipitado negro. Así pues los microorganismos en cuyo
metabolismo se producen SH2 en sus colonias aparecerá en el centro un
precipitado negro, esto es característico de Salmonella SH2 +, Arizona,
Proteus y Edwardsiella

Medio caldo Columbia

 Indicación: caldo para hemocultivos
 Composición: existen diferentes medios, unos permiten el crecimiento de
gérmenes aerobios y otros anaerobios. Suelen contener cantidades variables
de peptonas, glucosa, ciertos aminoácidos, sales como cloruro sódico,
sulfato ferroso, fosfato sódico, etc. Así como sangre con un anticoagulante
adecuado, como por ejemplo, el polianetol sulfato que evita que se formen
coágulos que podrían englobar alguna bacteria en su seno. Pueden también
llevar infusiones o caldos de corazón y cerebro así como una atmosfera de27
 CO2 que puede favorecer el cultivo de las bacterias en general. Es también
importante decir que existen ciertos componentes que neutralizan la
actividad bactericida que pudiera existir en el suero (anticuerpos, fagocitos,
etc.) hecho que facilita el poner de manifiesto los microorganismos.
 Modo de utilización: suelen presentarse a modo de frascos con una cierta
presión reducida para evitar la contaminación exterior y facilitar la toma de
sangre que se realiza con dispositivos especiales de extracción. Estos vasos
presentan siempre unos obturadores de caucho perfectamente estancos
con diferente color según se trate de un cultivo aerobio o anaerobio.
La siembra se realizará con un dispositivo para punción intravenosa y
conviene que se tome de la misma muestra un cultivo aerobio y uno
anaerobio.
Este dispositivo sobre el que se realizara la siembra consta de dos agujas
para punción intravenosa en cada uno de sus extremos. Para ello
actuaremos de la siguiente forma

*Preparamos dos frascos, uno aerobio y otro anaerobio, quitando sus

tapones de baquelita y desinfectando los obturadores de caucho con
torunda empapada en alcohol de 70°, volveremos a enroscarlos dejándolos
flojos.

*Preparar el brazo del paciente poniendo inicialmente el compresor y

desinfectando cuidadosamente la epidermis (no palpar ni soplar después).

*Quitar el protector adecuado para la aguja intravenosa y picar en la vena

dejando a continuación el interruptor abierto para que la sangre fluya por
toda la gomita hasta alcanzar la segunda aguja; cuando esto a sucedido,
cerrar el interruptor.

*Quitar el tapón de baquelita del frasco de hemocultivo anaerobio y retirar

el protector de la segunda aguja; acto seguido, atravesar con ella el
obturador de caucho del frasco anaerobio.

*Abrir el interruptor y dejar fluir sangre hasta la señal del frasco (suele
corresponder a unos 10 mililitros)

*Cerrar el interruptor del dispositivo intravenoso. 28

 *Retirar la aguja del frasco anaerobio y punzar inmediatamente después el
obturador de caucho del frasco de hemocultivo aerobio.

*Abrir el interruptor del dispositivo intravenoso y dejar fluir la sangre hasta

la señal marcada en el frasco.

*Cerrar el interruptor y retirar la aguja de la vena.

*Retirar la aguja del obturador de este segundo frasco.

Una vez realizada la siembra, incubar en estufa de cultivo a temperatura de

35 a 37°C durante aproximadamente 2 semanas, observando su posible
crecimiento todos los días, en caso de no crecimiento, se mantendrá hasta
un 1 y se observarán los días 14, 21 y 28; por ejemplo Brucella suele crecer
después de las 3 semanas.

Revelado de la prueba: examen visual de los frascos que permite observar el

desarrollo microbiano. Hay que observar turbidez, hemólisis, producción de gas,
sedimento hemático, aparición de color violáceo, etc. Siempre deberá completarse
con estudios como tinciones, exámenes en frasco, etc.

Medio casteñada
 Indicación: búsqueda de gérmenes, especialmente Brucella, Vibrios y
Pasteurella en sangre.
 Composición: es un sistema difásico, donde se asocia agar como medio
sólido y caldo como medio líquido, permitiendo con ello una determinación
más rápida del microorganismo buscado. Por litro, tenemos en la fase
líquida 17 gramos de glucosa, 5 gramos de cloruro sódico, 2.5 gramos de
fosfato bipotásico y 0.25 gramos de sustancias inhibidoras de la posible
actividad bacteriana del suero; en la fase sólida 5 gramos de peptona de
soja, 15 gramos de peptona trípsica de caseína, 5 gramos de cloruro sódico y
18 gramos de agar.
 Modo de utilización: se comercializan principalmente en forma de frascos
estancos igual que el caso anterior y la siembra análoga a la del caldo
Columbia. Una vez incubados estos medios a 35 a 37°C en posición vertical
se examinaran todos los días durante la primera semana y posteriormente
los días 14, 21 y 28.
29
La aparición de turbidez, hemólisis, gas en el caldo o colonias en el medio sólido
indican crecimiento microbiano. Las colonias fundamentalmente aparecen en el
límite a nivel del caldo.

Medio Sabouraud gentamicina tetrazolium

 Indicación: es utilizado para aislamiento e identificación de Candida.
 Composición: por litro, 10 gramos de mezclas de peptonas de caseína y
carne, 20 gramos de glucosa, 0.1 gramos de gentamicina, 0.05 gramos de
clorhidrato de trifenil tetrazolium y de 15 a 17 gramos de agar.
 Modo de utilización: a partir de colonias levaduriformes sospechosas de
Candidas, se siembra en medio sabouraud gentamicina tetrazolium, y se
incuba a 28°C en estufa de cultivo.
Tras 48grs es cuando teóricamente hay un mayor desarrollo de levaduras, se
observa su posible pigmentación, que será distinta según haya o no reducido el
clorhidrato de trifenil tetrazolium. Así pues encontraremos colonias blancas
cremosas o algo rosadas típicas de Candida pseudotropicalis y colonias rojo
violácelas de Candida tropicalis.

Medio Schaedler con vitamina K3

 Indicación: cultivo de anaerobios. Es un medio muy reductor, rico en ciertos
factores de crecimiento tales cómo vitamina K 3, hemina y extracto de
levadura, muy adecuado para el crecimiento de anaerobios
(microorganismos en los cuales su metabolismo no necesita oxigeno).
 Composición: puede encontrarse como caldo o como medio sólido, la
diferencia se encuentra solamente en la presencia o no de agar, por ejemplo
el medio sólido, por litro nos encontramos con 5 gramos de peptonas de
caseína y carne, 5 gramos de extracto de levadura, 10 graos de peptona
tríptica de caseína, 5 gramos de glucosa, 3 gramos de hidroximetil amino
metano, 4 gramos de cistina, 0.01 gramos de hemina, 0.5 miligramos de
vitamina K3 y 17 gramos de agar.
 Modo de utilización: es adecuado añadir a este medio cuando vaya hacer
utilizado, un 5% de gramos de cordero, ya que en estas condiciones el
crecimiento de gérmenes anaerobios es mayor. Así pues en condiciones
completamente estériles se dejara el preparado a baño María hirviendo,
posteriormente cuando su temperatura baje a 45°C es cuando se le añadirá
el 5% de sangre de cordero mezclado uniformemente y vertiendo en
condiciones de esterilidad en placas Petri estériles. Se sembrarán las placas30
 por estría o agotamiento en estría y se incubaran a 37°C entre 48 y 72hrs en
jarras con atmosfera anaerobia.
El revelado de prueba o lectura es la visualización de las colonias.

Medio agar sangre Columbia

 Indicación: medio utilizado para determinación de microorganismos
hemolítico aerobios y anaerobios.
 Composición: por litro, 10 gramos de peptonas trípscia de lactoalbumina, 10
gramos de peptonas de caseína y carne, 3 gramos de peptona trípsica de
corazón, 5 gramos de cloruro sódico, 1 gramo de almidón, 5% de sangre de
cordero y 17 gramos de agar.
 Modo de utilización: se puede utilizar como agar sangre o como agar
chocolate. En el último caso el agar Columbia se le suela añadir el 10% de
sangre estéril de cordero, calentando después a 80°C por 15min y agitando,
seguidamente verter en placas Petri estériles.
En general estos medios se usan la búsqueda de gérmenes hemolíticos y así
determinar el tipo de hemólisis. En estos medios suelen crecer diversos tipos de
microorganismos y suelen dar colonias más voluminosas que en otros medios
pudiéndose observar sus halos de mayor a menos transparencia típicos de sus
hemolisis.

31