Dieguez, Kevin - Pre Laboratorio 2B

FACULTAD DE INGENIERÍA
Departamento: Ingeniería Química

Materia: BIOQUÍMICA LABORATORIO
Docente: CARMEN GARCÍA
Nombre y
Kevin Daniel Diéguez Ordoñez 1210819
carné
Unidad: Sección 5 grupo B Actividad: Practica 2 Fecha: 19/6/2021
Investigación o
Tema: Reporte Pre laboratorio Actividad enzimática.
caso:
ÍNDICE
INTRODUCCIón ....................................................................................................................... 1
FUNDAMENTO TEóRICO ........................................................................................................ 2
MARCO TEÓRICO ................................................................................................................ 2
ENZIMAS ........................................................................................................................... 2
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA ................................................................................................. 2
CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS ................................................................................. 3
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA ............................................. 4
USO DE ENZIMAS A NIVEL INDUSTRIAL ....................................................................... 4
CATALASA......................................................................................................................... 5
FICHAS DE SEGURIDAD ........................................................................................................ 8
OBJETIVOS .............................................................................................................................. 9
GENERAL .......................................................................................................................... 9
ESPECÍFICOS ................................................................................................................... 9
METODOLOGÍA ..................................................................................................................... 10
DIAGRAMA DE EQUIPO ........................................................................................................ 12
REACCIONES ........................................................................................................................ 13
BIBLIOGRAFÍA ....................................................................................................................... 14
LIBROS ............................................................................................................................... 14
EGRAFIAS .......................................................................................................................... 14
ANEXOS ................................................................................................................................. 15
CALCULOS ......................................................................................................................... 15
PREGUNTAS DE PRE-LABORATORIO ............................................................................. 15
Nombre y
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Investigación o
caso:
INTRODUCCIÓN
La práctica de laboratorio No 1 denominada “actividad enzimática” se llevará a cabo el día 19

de junio del 2021. La práctica tiene como objetivo general conocer las caracteristicas generales
de las enzimas como catalizadores biologicos mediante la determinación de la actividad
catalítica de la catalasa.
La práctica tiene cómo objetivos específicos; Emplear la enzima de catalasa para analizar
aspectos de la cinetica enzimática mediante la descomposición de H2O2 y determinar factores
que inciden sobre la actividad enzimática de la catalasa.
Las enzimas son proteínas con capacidad de catalizar reacciones biológicas. Igual que los
catalizadores inorgánicos, aumentan la velocidad para alcanzar el equilibrio de la reacción. La
catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios la
cual cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno.
La importancia de la práctica radica en el comprender el funcionamiento de la actividad

enzimática, los factores que la afectan y sus caracteristicas.
Para llevar a cabo la práctica se realizarán 2 procedimientos, para llevar a cabo el primer
procedimiento se preparará un sistema generador de gases y se intriduzirá dentro higado
conrtado en trozos pequeños, luego se cargará una jeringa con 1 mL de peróxido de hidrógeno
y se inyectará al tubo generador de gases a través del agujero del tapón, asegurandose que
caiga sobre los trozos del material. Posterior, se agitará el tubo y se determinara el volumen
de agua desplazado de la probeta y los cambios del desplazamiento de agua por el oxígeno.
Por último se calculará el porcentaje de oxigeno generado.
Para el segundo procedimiento se colocara en un mortero trozos de higado bovino,

añadiendole agua para posteriormente ser triturados. Luego, se filtrará la mezcla y se rotularán
dos tubos de ensayo respectivamente con las letras A y B y se les colocará 2 mL del filtrado a
cada tubo de ensayo. Posterior, se calentará el tubo B con un mechero durante 1 minuto, por
último, se añadiran algunas gotas de peróxido de hidrógeno a los tubos de ensayo A y B.
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Investigación o
caso:
FUNDAMENTO TEÓRICO
MARCO TEÓRICO
ENZIMAS
Los enzimas son en su mayoria proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres
vivos. Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una
reacción, aumentan notablemente su velocidad. No hacen factibles las reacciones imposibles,
sino que sólamente aceleran las que espontáneamente podrían producirse debido a que
disminuyen la energía de activación que se requiere para la reacción química. Ello hace posible
que en condiciones fisiológicas tengan lugar reacciones que sin catalizador requerirían
condiciones extremas de presión, temperatura o pH. (McKee, 2014)
Fuente: Porton, A. c.f

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Cada tipo de enzima contiene una superficie de unión única e intrincada, que se denomina sitio
activo. Cada sitio activo es una hendidura o grieta en una gran molécula de proteína en la que
se pueden unir moléculas de sustrato en una orientación que favorece la catálisis. Sin
embargo, el sitio activo es más que un sitio de unión. Varias de las cadenas laterales de los
aminoácidos que recubren este sitio participan de forma activa en el proceso catalítico.
(McKee, 2014)
La forma y la distribución de la carga del sitio activo de una enzima limitan los movimientos y
las conformaciones permitidas del sustrato, haciendo que éste se asemeje más al estado de
transición. En otras palabras, la estructura del sitio activo se utiliza para orientar de forma
óptima al sustrato. Como resultado, el complejo enzima-sustrato se convierte en producto y
enzima libre sin el requerimiento de alta energía del estado de transición limitado. Como
2
Nombre y
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Investigación o
caso:
consecuencia, la velocidad de reacción se incrementa en grado significativo respecto a la de

la reacción no catalizada. (McKee, 2014)
En una variante moderna del modelo de llave y cerradura propuesta por Daniel Koshland,
denominada modelo de ajuste inducido, se toma en cuenta la estructura flexible de las
proteínas. En este modelo, el sustrato no se ajusta con precisión a un sitio activo rígido. En
vez de ello, las interacciones no covalentes entre la enzima y el sustrato modifican la estructura
tridimensional del sitio activo, adecuando la forma de éste a la del sustrato en su conformación
de estado de transición. (McKee, 2014)
Aunque la actividad catalítica de algunas enzimas sólo depende de las interacciones entre los
aminoácidos del sitio activo y el sustrato, otras enzimas requieren componentes no proteínicos
para realizar sus actividades. Los cofactores enzimáticos pueden ser iones, como el Mg2+ o
el Zn2+, o moléculas orgánicas complejas denominadas coenzimas. (McKee, 2014)
Los organismos pueden controlar las actividades enzimáticas de forma directa, principalmente
mediante la unión de activadores o inhibidores, la modificación covalente de las moléculas
enzimáticas, o de manera indirecta regulando la síntesis de enzimas. (McKee, 2014)
Fuente: genome.gov
CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS
Las seis categorias de enzimas principales son: (McKee, 2014)
• Oxidorreductasas. Las oxidorreductasas catalizan reacciones redox en las cuales
cambia el estado de oxidación de uno o más átomos en una molécula.
• Transferasas. Las transferasas transfieren grupos moleculares de una molécu- la
donadora a una aceptora.
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Nombre y
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Investigación o
caso:
• Hidrolasas. Las hidrolasas catalizan reacciones en las que se logra la rotura de enlaces
por la adición de agua.
• Liasas. Las liasas catalizan reacciones en las que ciertos grupos se eliminan para
formar un doble enlace, o se añaden a un doble enlace.
• Isomerasas. Las isomerasas, son un grupo heterogéneo de enzimas, que catalizan
varios tipos de reordenamientos intramoleculares.
• Ligasas. Las ligasas catalizan la formación de enlaces entre dos moléculas de sustrato.
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La actividad de una enzima describe qué tan rápido ésta cataliza la reacción que convierte un
sustrato en producto. Esta actividad depende en gran medida de las condiciones de la
reacción, que incluyen temperatura, pH, concentración de la enzima y concentración del
sustrato.
• Temperatura: Las enzimas son muy sensibles a la temperatura. A bajas temperaturas,

la mayor parte de las enzimas muestra poca actividad porque no hay suficiente cantidad
de energía para que tenga lugar la reacción catalizada. A temperaturas más altas, la
actividad enzimática aumenta a medida que las moléculas reactantes se mueven más
rápido para generar más colisiones con las enzimas. (Timberlake, K. 2013)
• pH: Las enzimas son más activas a su pH óptimo, el pH que mantiene la estructura
terciaria adecuada de la proteína. Si un valor de pH está arriba o abajo del pH óptimo,
se alteran las interacciones delos grupos R, lo que destruye la estructura terciaria y el
sitio activo. Como resultado, la enzima ya no puede unirse a un sustrato de manera
adecuada y no ocurren reacciones. (Timberlake, K. 2013)
• Concentración de la enzima y sustrato: En cualquier reacción catalizada, el sustrato

debe unirse primero con la enzima para formar el complejo enzima-sustrato. Para una
concentración de sustrato particular, un aumento en la concentración enzimática
aumenta la velocidad de la reacción catalizada. A concentraciones enzimáticas más
altas, más moléculas están disponibles para unirse al sustrato y catalizar la reacción.
Mientras la concentración de sustrato sea mayor que la concentración de la enzima, hay
una relación directa entre la concentración de la enzima y la actividad enzimática
(Timberlake, K. 2013)
USO DE ENZIMAS A NIVEL INDUSTRIAL
La alta selectividad con la que las enzimas participan en diferentes procesos de transformación
química y las condiciones suaves de reacción en las que se operan dichos procesos
4
Nombre y
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Investigación o
caso:
industriales, traen en consecuencia un ahorro energético y económico. En los últimos años, el

uso de las enzimas a nivel industrial ha impactado en sectores estratégicos tales como el de
la química fina o el de los biocarburantes. Esta participación industrial ha contribuido al
desarrollo de nuevas áreas de investigación en biotecnología tales como el de la biotecnología
verde y el de la biotecnología blanca. (Rodríguez, E, 2014).
El desarrollo de procesos industriales utilizando enzimas inmovilizadas se ha incrementado de

manera sustancial en las últimas décadas. Esto se debe a que no sólo se ha comprobado que
la inmovilización de las enzimas permite reciclar el catalizador, sino que, además, la
inmovilización contribuye de manera importante a incrementar la estabilidad operacional
biocatalizador, permite un diseño más racional del reactor y en algunos casos, a mejorar
incluso su eficiencia catalítica. (Rodríguez, E, 2014).
A pesar de la variedad de funciones enzimáticas existentes en la naturaleza, la biotecnología

moderna se enfrenta continuamente con la necesidad de sustancias con nuevas capacidades
catalíticas o enzimas que actúen con especificidades diferentes o en condiciones poco
habituales. Estas necesidades han generado un campo, que está todavía en su inicio, de
diseño e ingeniería enzimáticas. Se están realizando diversas estrategias en este campo, que
tiene un enorme potencial en la industria y la medicina. (Chirsthoper k. Mathews, 2002)
CATALASA
La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios.
Cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. La mayoría de
estas enzimas son homotetrámeros con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha
determinado la estructura cristalográfica de nueve catalasas. (Diaz. A, c.f)
Fuente: alamy.es
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Nombre y
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Investigación o
caso:
FUNCION
Las especies de oxígeno reactivas como el radical superóxido, el radical hidroxilo y el peróxido
de hidrógeno (H2O2) se forman durante la reducción del dioxígeno en agua. Estas especies
pueden dañar las proteínas, los lípidos y los ácidos nucleicos, por lo que se requieren sistemas
antioxidantes eficientes, entre los que se incluyen ciertas enzimas. El peróxido de hidrógeno
se forma por la dismutación del radical superóxido y también en la reacción de algunas
oxidasas. Hay varias enzimas capaces de degradar el peróxido de hidrógeno: las catalasas,
las peroxidasas y las peroxirredoxinas (1, 2). Las peroxidasas eliminan el H2O2 usándolo para
oxidar otros sustratos. A diferencia de las otras enzimas, que requieren de un sustrato
reducido, las catalasas dismutan el peróxido de hidrógeno. (Diaz. A, c.f)
La mayoría de los organismos aerobios tienen catalasas monofuncionales. Las catalasas

catalizan la dismutación del peróxido de hidrógeno en agua y dioxígeno evitando así que se
forme el radical hidroxilo y el oxígeno singulete, especies de oxígeno que son muy reactivas.
En el hombre, la catalasa protege la hemoglobina del peróxido de hidrógeno que se genera en
los eritrocitos. También tiene un papel de protección en la inflamación, en la prevención de
mutaciones, evita el envejecimiento y cierto tipo de cáncer. (Diaz. A, c.f)
REACCIONES QUÍMICAS QUE CATALIZA

En la reacción de la catalasa ocurre la transferencia de dos electrones entre dos moléculas de
peróxido de hidrógeno en la cual una funciona como donador y otra como aceptor de
electrones. El mecanismo de reacción se lleva a cabo en dos pasos. En el primero la catalasa
se oxida por una molécula de peróxido formando un intermediario llamado compuesto I. (Diaz.
A, c.f)
El compuesto I se caracteriza por tener un grupo ferroxilo con Fe (IV) y un radical catiónico de
porfirina. En esta reacción se produce una molécula de agua. En el segundo paso de la
reacción, el compuesto I es reducido por otra molécula de peróxido regresando la catalasa a
su estado inicial y produciendo agua y dioxígeno. En ciertas condiciones el compuesto I puede
captar un electrón originando el compuesto II. El compuesto II tiene un estado de oxidación
intermedio a los observados en el compuesto I y la catalasa en reposo. Al reaccionar con una
molécula de H2O2 forma el compuesto III, que tiene un estado de oxidación FeVI. El
compuesto II y el compuesto III son inactivos cataliticamente. La catalasa también puede
catalizar ciertas reacciones como peroxidasa. (Diaz. A, c.f)
En la reacción de peroxidasa de la catalasa, el compuesto I puede oxidar el metanol, el etanol,

el formato o el nitrato utilizando una molécula de H2O2 como oxidante.. En el cerebro, la
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Investigación o
caso:
reacción de la catalasa con el etanol forma acetaldehído, que explica algunos de los efectos
neurológicos del alcohol en humanos. (Diaz. A, c.f)
Fuente: Diaz. A, c.f
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Investigación o
caso:
FICHAS DE SEGURIDAD
Tabla No : fichas de seguridad
Nombre del reactivo Peroxido de hidrogeno Agua destilada
Formula química H2O2 H2O
Equipo de protección personal al Gafas de seguridad ajustadas No se requiere protección

manipularlo al contorno del rostro.
Material: Guantes de látex
espesura mínima de capa:
0.6 mm
Toxicidad Toxicidad aguda, Oral Mayor a 8L al dia en humanos.
Lesiones oculares graves.
Nocivo en caso de ingestión.
Tóxico para los organismos
acuáticos.
Consideraciones ante emergencia Enjuagar con agua Por ingesta tomar diurético.
cuidadosamente durante
varios minutos. Quitar las
lentes de contacto cuando
estén presentes. Tras
inhalación: aire fresco. En
caso de contacto con la piel:
Quitar inmediatamente todas
las prendas contaminadas.
En caso de incendio, explosión o No existen limitaciones de Sustancia no peligrosa, en caso
derarame. agentes extinguidores para de derrames absorber con
esta sustancia/mezcla. material inerte
Fuente: Merck, 2021
8
Nombre y
carné
Investigación o
caso:
OBJETIVOS
GENERAL
Conocer las caracteristicas generales de las enzimas como catalizadores biologicos mediante
la determinación de la actividad catalítica de la catalasa.
ESPECÍFICOS
1. Emplear la enzima de catalasa para analizar aspectos de la cinetica enzimática
mediante la descomposición de H2O2.
2. Determinar factores que inciden sobre la actividad enzimática de la catalasa.
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Nombre y
carné
Investigación o
caso:
METODOLOGÍA
Diagrama No 1: preparación de instrumento generador de gases.
Fuente propia
Diagrama No 2: procedimiento 1.
’
Fuente propia
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carné
Investigación o
caso:
Diagrama No 3: procedimiento 2.
Fuente propia
11
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Investigación o
caso:
DIAGRAMA DE EQUIPO
Diagrama No 4: Sistema generador de gases.
SOPORTE
UNIVERSAL
AGUJA
PINZAS
TUBO DE PROBETA
ENSAYO
TUBO
MANGUERA FORMA J
BEAKER
Fuente: Manual de laboratorio de bioquímica, 2021
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carné
Investigación o
caso:
REACCIONES
Descomposición de peroxido de hidrogeno con catalasa.
Fuente: Cedillo. J, c.f
13
Nombre y
carné
Investigación o
caso:
BIBLIOGRAFÍA
LIBROS
1. Trudy, McKee y James, R. McKee (2014) Bioquímica: las bases moleculares de la vida,
(5ta. Ed) Mc Graw Hill Education, México.
2. Chirsthoper k. Mathews, Kensal E. Van Hole y Kevin G. Ahern (2002) Bioquímica, (3ra.
Ed) Pearson Educatión, Madrid, España.
3. Timberlake, K. (2013). Química general, orgánica y biológica: estructuras de la vida.

México: Pearson Educación.
EGRAFIAS
1. Cedillo, Jiménez; Hernández, López (c.f) Determinación de la actividad enzimatica de
peroxidasas (catalasa), Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de
Querétaro, disponible en:
https://www.uaq.mx/investigacion/difusion/veranos/memorias-
2010/12%20Verano%20Ciencia%20Region%20Centro/UAQ%20Cedillo%20Jimenez.p
df
2. Rodríguez, E. (2014). Enzimas aplicadas en procesos industriales. Unam.mx.

http://www.revista.unam.mx/vol.15/num12/art96/
3. Diaz, A (C.F) la estructura de la catalasa, disponible en:

http://www3.uacj.mx/ICB/redcib/Documents/REB_DOC/2003/06/2003-
2_LA%20ESTRUC_.pdf
14
Nombre y
carné
Investigación o
caso:
ANEXOS
CALCULOS
Porcentaje de oxigeno:
V"!
%O! = ∗ 100
V#! $
Donde Vo2 es el volumen de O2 desplazado y VH2O es el volumen de agua desplazado.
PREGUNTAS DE PRE-LABORATORIO
N/A
15

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Departamento: Ingeniería Química

La práctica de laboratorio No 1 denominada “actividad enzimática” se llevará a cabo el día 19

La importancia de la práctica radica en el comprender el funcionamiento de la actividad

Para el segundo procedimiento se colocara en un mortero trozos de higado bovino,

Fuente: Porton, A. c.f

consecuencia, la velocidad de reacción se incrementa en grado significativo respecto a la de

• Temperatura: Las enzimas son muy sensibles a la temperatura. A bajas temperaturas,

• Concentración de la enzima y sustrato: En cualquier reacción catalizada, el sustrato

industriales, traen en consecuencia un ahorro energético y económico. En los últimos años, el

El desarrollo de procesos industriales utilizando enzimas inmovilizadas se ha incrementado de

A pesar de la variedad de funciones enzimáticas existentes en la naturaleza, la biotecnología

La mayoría de los organismos aerobios tienen catalasas monofuncionales. Las catalasas

REACCIONES QUÍMICAS QUE CATALIZA

En la reacción de peroxidasa de la catalasa, el compuesto I puede oxidar el metanol, el etanol,

Fuente: Diaz. A, c.f

Tabla No : fichas de seguridad

Nombre del reactivo Peroxido de hidrogeno Agua destilada

Formula química H2O2 H2O

Equipo de protección personal al Gafas de seguridad ajustadas No se requiere protección

2. Determinar factores que inciden sobre la actividad enzimática de la catalasa.

Diagrama No 4: Sistema generador de gases.

Fuente: Manual de laboratorio de bioquímica, 2021

Fuente: Cedillo. J, c.f

3. Timberlake, K. (2013). Química general, orgánica y biológica: estructuras de la vida.

2. Rodríguez, E. (2014). Enzimas aplicadas en procesos industriales. Unam.mx.

3. Diaz, A (C.F) la estructura de la catalasa, disponible en:

Donde Vo2 es el volumen de O2 desplazado y VH2O es el volumen de agua desplazado.

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