Tema 3: enzimas

ENZIMAS

ØLos enzimas son proteínas de los seres vivos cuya

función es catalizar reacciones químicas

ØUn catalizador es una sustancia que aumenta la

velocidad de una reacción química

ØLos enzimas hacen posible que se produzcan

reacciones que a temperatura ambiente lo harían a
velocidades muy bajas
 REACCIONES QUÍMICAS

La reacción química más sencilla -> conversión de A en B

A-------------> B

A: representa el/los reactivos o sustratos

B: representa el/los productos de la reacción

ØEl estado energético de las moléculas antes (reactivos) y después

(productos) de la reacción cambia
ØEs lo que se llama incremento de la energía libre (∆G’)
 REACCIONES QUÍMICAS
ØLas reacciones termodinámicamente favorables, ocurren
espontáneamente (exergónicas, -∆G), y el estado de los productos
es de menor energía libre
ØA-------------> B
ØLas reacciones no favorables, endergónicas (∆G) tienen que darse
bajo ciertas condiciones, o en presencia de reactivos químicos que
cedan energía
A <------------ B
 REACCIONES QUÍMICAS

Si tenemos una reacción

La constante de equilibrio Keq expresa la proporción

producto/sustrato cuando cesa la transformación espontánea

qSi la Keq >1 la reacción discurrirá espontáneamente hacia la

derecha, tanto más cuanto mayor sea
qSi Keq <1 discurrirá espontáneamente hacia la izquierda
 REACCIONES QUÍMICAS

Si ∆G (incremento de Energía libre) es bajo, se trata de una reacción

próxima al equilibrio (valores de Keq próximos a la unidad).
Si ∆G es alto, se trata de una reacción alejada del equilibrio (valores
de Keq alejados de la unidad)
 REACCIONES QUÍMICAS
Para sufrir la reacción los reactivos tienen que “activarse” -> estado
de transición o activación -> fase a través de la cual deben pasar las
moléculas de reactivo que reaccionan
 REACCIONES QUÍMICAS

Un catalizador reduce la Energía de Activación (Ea) con lo que

aumentan las moléculas de reactivo activas a temperatura ambiente
y acelera la reacción.
Las enzimas no modifican la constante de equililibrio Keq de la
reacción.

Keq = 5

Si se parte de iguales concentraciones de sustrato A y producto B, la

enzima facilita la reacción A->B hasta que la concentración de B sea
cinco veces mayor que la de A.

Pero si la concentración inicial de Producto B fuera más de cinco

veces la de el sustrato A la reacción fluirá espontáneamente hacia
A<-B.
 ENZIMAS
Una enzima se une una molécula de reactivo (sustrato) en una región
llamada SITIO ACTIVO. Debido a su estructura terciaria, acomoda
de forma específica el sustrato y lo induce a adoptar la
configuración necesaria para el estado de transición -> AJUSTE
INDUCIDO.

1)Une el sustrato
2)Reduce la G del estado de transición
3)Impulsa la reacción
4)Libera el producto y vuelve al estado original
 ENZIMAS

Modula la velocidad de actuación

de la enzima
ENZIMAS
 CAMBIOS CONFORMACIONALES
La actividad enzimática se basa en cambios conformacionales

Mediante cambios de forma se acerca el centro catalítico al sustrato una

vez ligado al centro de unión. Es el propio sustrato el que provoca el
cambio de forma

Una molécula de glucosa provoca el cambio de forma de un enzima

glucolítico
 CAMBIOS CONFORMACIONALES
La actividad enzimática se basa en cambios conformacionales

Mediante cambios de forma el sitio de unión pierde la afinidad por el

producto y lo libera.

Por cambios de forma provocados por fosforilación y/o una proteína

auxiliar, se bloquea o abre el acceso del sustrato a su lugar de unión, con
lo que se activa/inactiva el enzima
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
En función de su acción catalítica específica

• Oxidorreductasas: Transfieren electrones de un dador (reductor) a

un receptor (oxidante).
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
En función de su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en
6 grandes grupos:

• Oxidorreductasas: Transfieren electrones de un dador (reductor) a un

receptor (oxidante).
• Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico distinto
del hidrógenode un sustrato a otro, según la reacción:

A-B + C A + C-B
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
En función de su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en
6 grandes grupos:

• Oxidorreductasas: Transfieren electrones de un dador (reductor) a

un receptor (oxidante).
• Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico
(distinto del hidrógeno: amino, fosfato) de un sustrato a otro.
• Hidrolasas: Rompen enlaces covalentes añadiendo una molécula de
agua.
A-B + H2O AH + B-OH
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
En función de su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en
6 grandes grupos:

• Oxidorreductasas: Transfieren electrones de un dador (reductor) a

un receptor (oxidante).
• Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico
(distinto del hidrógeno: amino, fosfato) de un sustrato a otro.
• Hidrolasas: Rompen enlaces covalentes añadiendo una molécula de
agua.
• Liasas: Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos.

A-B A+B
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
En función de su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en 6
grandes grupos:

• Oxidorreductasas: Transfieren electrones de un dador (reductor) a un

receptor (oxidante).
• Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto
del hidrógeno: amino, fosfato) de un sustrato a otro.
• Hidrolasas: Rompen enlaces covalentes añadiendo una molécula de
agua.
• Liasas: Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos.
• Isomerasas: interconversión entre isómeros de una molécula (con igual
forma molecular, estructura química distinta).

D-Glucosa L-Glucosa
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
En función de su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en
6 grandes grupos:

• Oxidorreductasas: Transfieren electrones de un dador (reductor) a

un receptor (oxidante).
• Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo químico
(distinto del hidrógeno: amino, fosfato) de un sustrato a otro.
• Hidrolasas: Rompen enlaces covalentes añadiendo una molécula de
agua.
• Liasas: Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos.
• Isomerasas: interconversión entre isómeros de una molécula (con
igual forma molecular, estructura química distinta).
• Ligasas: Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea
de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP):

A + B + XTP A-B + XDP + Pi

 Temperatura y actividad enzimática
Cualquier reacción química es sensible a la temperatura, ya que al
aumentar ésta, aumentan las probabilidades de choques entre
moléculas.
 Temperatura y actividad enzimática
Las reacciones catalizadas también son influidas por la temperatura. La
relación es parabólica debido a que llega un límite en que la enzima se
desnaturaliza, cambia de forma y deja de ser activa.
 pH y actividad enzimática
El pH también influye en la actividad catalítica de los enzimas, ya que la
actividad de un enzima depende de su forma. La forma del enzima
depende entre otros factores de las relaciones de sus aminoácidos con
el medio. Los cambios en el pH provocan reorganizaciones.
Cada enzima tiene una predisposición a actuar en un pH determinado.
 Actividad enzimática

La actividad catalítica de un enzima puede ser estudiada desde el

punto de vista termodinámico → importan los estados iniciales y
finales de la reacción y los intercambios de energía.
 CINÉTICA ENZIMÁTICA
Desde el punto de vista cinético, se estudia la velocidad de la reacción
La velocidad de una reacción catalizada depende en primer lugar de la
cantidad de enzima presente en la solución, aunque también de la
cantidad de sustrato, entre otros factores
Para medir la velocidad de una reacción catalizada, con una cantidad
fija de enzima, se va variando la cantidad de sustrato, y se mide la
velocidad inicial de reacción.
 Ecuación de Michaelis-Menten
Esta curva se ajusta a una ecuación en la que la velocidad depende de la
concentración de sustrato, y dos constantes típicas para cada enzima a
unas condiciones de temperatura y pH fijas
 Ecuación de Michaelis-Menten
Km (concentración de sustrato a la cual la velocidad de catálisis es 1⁄2 de
la Vmax), puede ser considerado como una constante de afinidad del
enzima por el sustrato. Si la Km aumenta, la afinidad disminuye, ya que se
necesita mayor cantidad de sustrato presente en el medio para que la
reacción transcurra a una misma velocidad
REGULACIÓN DE ENZIMAS
 Regulación por concentraciones de sustrato/producto

Una enzima no modifica la constante de equilibrio de la reacción en la

que interviene, por lo cual la velocidad de la reacción se verá afectada
por las concentraciones de sustrato y producto en función de dicha
constante de equilibrio

La constante de equilibrio
Keq expresa la proporción
producto/sustrato cuando
cesa la transformación
espontánea.

Variaciones en la concentración de sustrato solo modificarán la

velocidad de la reacción si dichas concentraciones oscilan entorno a
la Km o menores, pero serán inefectivos si son valores saturantes (muy
superiores a la Km).
 Regulación por concentraciones de sustrato/producto

La Aldolasa del cerebro tiene una Km baja (mucha afinidad por el sustrato)
la fructosa 1-6 bisfosfato. Las concentraciones en las neuronas son altas.
Esta enzima trabaja siempre a concentraciones saturantes de sustrato,
siempre a Vmax, siendo insensible a variaciones de concentración.
 Regulacion por concentraciones de sustrato/producto

La aldolasa muscular tiene una Km por el mismo sustrato (Fructosa 1,6

Bisfosfato) de 100μM mientras que las concentraciones de trabajo son de
30μM. Esto supone que pequeñas variaciones en la cantidad de F1,6P en
el medio van a variar sensiblemente la velocidad de la reacción.
Regulacion por concentraciones de sustrato/producto

La presencia de los productos finales puede hacer que la reacción

sea más lenta, o incluso invertir su sentido.
Regulacion ON/OFF
Regulación gradual
 Regulacion por inhibidores isostéricos

Inhibidores isostéricos: moléculas que actúan sobre el centro de unión

del sustrato, disminuyendo la velocidad de las enzimas.

Tres formas de inhibición isostérica:

• Competitiva
• No competitiva
• Incompetitiva
 Regulación por inhibidores isostéricos competitiva
El inhibidor tiene una afinidad por el centro de unión del sustrato
comparable a la del propio sustrato, de manera que compite con él

Formación de complejo transitorio ES

que se escinde para liberar el enzima
y el producto

Formación del complejo EI estable

mientras que la cocentración de
inhibidor permanezca constante, que
impide la unión ES.
 Regulación por inhibidores isostéricos competitiva
Si la concentración de sustrato es mayor que la de inhibidor, logra
desplazarlo. La Vmax no queda alterada y el efecto del inhibidor equivale
a un aumento de la Km, es decir, a una disminución aparente de la
afinidad del enzima por el sustrato

Con distintas
concentraciones de
inhibidor, cuanto
mayor es la
concentración, mayor es
la Km, su afinidad
aparente por el sustrato
es menor. Aumenta la
Km, pero solo hay una
Vmax.
 Regulación por inhibidores isostéricos no competitiva
El inhibidor se une al complejo enzima-sustrato. Por mucho sustrato que
haya no podrá nunca evitar la acción del inhibidor, porque no compiten
 Regulacion por inhibidores isostéricos no competitiva
El inhibidor actúa como si hiciera desaparecer enzima del medio, es
decir, disminuyendo la Vmax. Así pues, la presencia de inhibidor
competitivo genera una Vmax aparente y no modifica la Km

Con distintas
concentraciones
de inhibidor, una
Vmax para cada
[I].
 Regulación por inhibidores isostéricos incompetitiva
El inhibidor puede unirse tanto al centro activo como al complejo
enzima-sustrato. El sustrato también puede unirse al complejo enzima-
inhibidor
 Regulacion por inhibidores isostéricos incompetitiva

El inhibidor puede unirse tanto al centro activo como al complejo

enzima-sustrato. El sustrato también puede unirse al complejo enzima-
inhibidor

Tanto la Vmax
como la Km
modificadas por la
presencia de
inhibidor
 Regulacion por cooperatividad homotrópica

Sólo en enzimas con mas de un protómero -> formados por dos o más
polipéptidos, cada uno con su centro de unión con el sustrato
(estructura cuaternaria).

La cooperatividad es un cambio en la afinidad de los protómeros por el

sustrato.

• Cooperatividad positiva: Cuando los centros de unión de los

protómeros están vacíos presentan baja afinidad por el sustrato. Al
unirse una molécula de sustrato a uno de los protómeros, se produce
un cambio conformacional en el resto que aumenta su afinidad y la
velocidad de catálisis.
• Cooperatividad negativa: la unión del sustrato provoca una
disminución de la afinidad del resto de los protómeros.
 Regulacion por cooperatividad homotrópica
• Concertado: Los protómeros cambian al unísono de afinidad en cuanto se une
el primer sustrato

Baja afinidad Alta afinidad

• Secuencial: Los protómeros cambian progresivamente a estados

conformacionales cada vez más activos. Cada protómero provoca en los
adyacentes cambios de forma que aumentan su afinidad por el sustrato de
forma progresiva
 Regulacion por cooperatividad homotrópica
Los enzimas con cooperatividad positiva presentan una cinética
sigmoidea frente a la cinética hiperbólica de los enzimas no
cooperativos.

Cinética
hiperbólica en no
cooperativos
 Regulacion por cooperatividad homotrópica
Los enzimas con cooperatividad positiva presentan una cinética sigmoidea
frente a la cinética hiperbólica de los enzimas no cooperativos.

En un rango
determinado de
concentración
de sustrato,
pequeños
cambios en la
concentración
provocan
importantes
cambios en la
velocidad de la
reacción
 Regulación alostérica
La regulación de la velocidad de catálisis se produce por los cambios
conformacionales causados por la unión de un efector alostérico al enzima
(inhibidor o activador).
 Regulacion alostérica
En enzimas con más de un protómero la unión de un efector alostérico
puede provocar un efecto cooperativo heterotrópico.
La unión de un efector al centro alostérico de uno de los protómeros
provoca el cambio de forma en el otro
 Regulación alostérica
Puede darse simultáneamente cooperatividad homotrópica y alosterismo.
El efector alostérico modifica la pendiente de la curva sigmoide
provocada por la cooperatividad homotrópica (modifica su afinidad por
el sustrato)

Coop.
homotrópica

alosterismo
GUIA PARA EL ESTUDIO

1. Define la constante de equilibrio.

2. Explica cuales son los puntos clave de una enzima y
cómo se modula su actividad.
3. Explica brevemente como se modula la actividad de
una enzima.
4. Realiza un esquema con la clasificación de las
enzimas según su función y explica brevemente
(en una frase) cuál es la función de cada una.
5. Explica la ecuación de Michaelis-Menten y define
cada uno de sus términos (realiza un gráfico de
apoyo a la explicación).
6. Pon en un cuadro las formas de regulación de las
reacciones catalizadas.
7. Explica brevemente los tipos de regulación de las
reacciones catalizadas