ENZIMOLOGA CLNICA

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6.

INTRODUCCIN
CARACTERSTICAS
FUNCIONES
ACTIVIDAD CATALTICA
CLASIFICACIN DE ENZIMAS
APLICACIONES MDICAS.

1. INTRODUCCIN. Metabolismo enzimtico

En todos los organismos es preciso sintetizar macromolculas a partir de molculas sencillas, y
para establecer los enlaces entre stas se necesita energa. Esta energa se consigue rompiendo
los enlaces qumicos internos de otras macromolculas, sustancias de reserva o alimentos. Todo
ello comporta una serie de reacciones coordinadas cuyo conjunto se denomina metabolismo.
Dado que las sustancias que intervienen en estas reacciones son, generalmente, muy estables,
se requerira una gran cantidad de energa para que reaccionaran entre s, ya que, si no, la
velocidad de reaccin sera nula o demasiado lenta. Para acelerar la reaccin en un laboratorio
bastara con aumentar la temperatura o bien con aadir un catalizador, es decir, una sustancia
que aumente la velocidad de la reaccin.

METABOLISMO ENZIMTICO
En los seres vivos, un aumento de temperatura puede provocar la muerte, por lo que se opta por
la otra posibilidad, es decir, el concurso de catalizadores biolgicos o biocatalizadores. Las
molculas que desempean esta funcin son las enzimas.
Las enzimas son, protenas globulares capaces de catalizar las reacciones metablicas. En su
estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o ms cadenas polipeptdicas, que aportan un
pequeo grupo de aminocidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y
donde se realiza la reaccin.
Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud. Este
hecho asegura que la enzima no participa en reacciones equivocadas.
La enzima misma no se ve afectada por la reaccin. Cuando los productos se liberan, la enzima
vuelve a unirse con un nuevo sustrato.

2. CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS

Son solubles en agua y se difunden bien en los lquidos orgnicos. Pueden actuar a nivel
intracelular, es decir, en el interior de la clula donde se han formado, o a nivel extracelular, en
la zona donde se segregan.
Las enzimas cumplen las dos leyes comunes a todos los catalizadores: la primera es que durante
la reaccin no se alteran, y la segunda es que no desplazan la constante de equilibrio para que
se obtenga ms producto, sino que simplemente favorecen que la misma cantidad de producto
se obtenga en menos tiempo. Las enzimas, a diferencia de los catalizadores no biolgicos,
presentan una gran especificidad, actan a temperatura ambiente y consiguen un aumento de la
velocidad de reaccin de un milln a un trilln de veces.
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CONCEPTOS BSICOS DE CINTICA QUMICA

En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente

de la concentracin de sustrato: v = kEn una reaccin de primer orden la velocidad de
formacin de los productos es directamente proporcional a la concentracin del sustrato: v
= k [A]. As, en la reaccin:sacarosa + agua glucosa + fructosa.
La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la
concentracin de sacarosa. Dicho matemticamente, donde [A] es la concentracin de
sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice que sta es
una reaccin de primer orden.
Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del
producto depende de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de
condensacin): v = k [A1] [A2] del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato
(reaccin de dimerizacin): v = k [A]2

ACTIVIDAD ENZIMTICA.
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la
reaccin cataltica y de la especifidad del enzima. La velocidad
de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con
relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario
purificar o aislar el enzima. La medida se realiza siempre
en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia
de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de
sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin
observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la
aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.
Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato sobre la actividad
enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto
del complejo enzima-sustrato como intermediario del proceso de catlisis enzimtica. En 1913,
Leonor Michaelis y Maud Menten desarrollaron esta teora y propusieron una ecuacin de
velocidad que explica el comportamiento cintico de los enzimas.

Para explicar la relacin oservada entre la velocidad inicial (v0) y la concentracin inicial de
sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente
ocurren en dos etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la
segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el
enzima libre:

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de

sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de enzima
constante. Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una grfica como la de la Figura de la
derecha. Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la
concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden. A altas [S]0, el
enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S]0. En este
punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA

La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una hiprbola
(Figura de la izquierda). La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva
experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la
reaccin es la mitad de la Vmax.
Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar la
representacin doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea recta. Esta
representacin doble recproca recibe el nombre de representacin de Lineweaver-Burk
(Figura de abajo). Es una recta en la cual:
- La pendiente es KM/Vmax.
- La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM.
- La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular grficamente, los valores
de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos.

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE ENZIMA Y DEL pH SOBRE LA

VELOCIDAD DE REACCION
Efecto del pH: afecta al estado de disociacin de los grupos, aunque todas las protenas no se
ven afectadas de igual forma porque algunas no tienen grupos disociables. La mayor parte de los
enzimas tienen un pH ptimo. Si hay pequeos cambios de pH no se desnaturaliza el enzima.
La actividad enzimtica se mide en mol/t, y la unidad internacional en mol/min, cantidad de
enzima que transforma un micromol de sustrato en producto en un minuto en condiciones
ptimas. Otra unidad es la cantidad enzimtica que se requiere para transformar 1 mol/s y se la
llama katal. La idea bsica es que el centro activo de la enzima puede existir en tres estados de
ionizacin dependiendo de la fuerza cida,

MODOS DE ACCIN

Las enzimas pueden actuar de dos formas: unas, fijndose mediante enlaces fuertes
(covalentes) al sustrato, de modo que se debiliten sus enlaces y que no haga falta tanta
energa para romperlos; y otras, atrayendo a las sustancias reaccionantes hacia su
superficie de modo que aumente la posibilidad de encuentro y que la reaccin se produzca ms
fcilmente.
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Las enzimas, una vez que han realizado la transformacin del sustrato o sustratos en productos,
se liberan rpidamente de ellos para permitir el acceso a otros sustratos.

5. CLASIFICACIN DE LOS ENZIMAS

En funcin de su accin cataltica especfica, los enzimas se clasifican en 6 grandes grupos o
clases:
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Clase 2: TRANSFERASAS
Clase 3: HIDROLASAS
Clase 4: LIASAS
Clase 5: ISOMERASAS
Clase 6: LIGASAS

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia de hidrgeno (H) o electrones
(e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin general: (Ejemplos son la succinato deshidrogenasa
o la citocromo c oxidasa).

AH2 + B
Ared + Box

A + BH2
Aox + Bred

Clase 3: HIDROLASAS
-

Catalizan las reacciones de hidrlisis:

A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin:
Lactosa + agua glucosa + galactosa

Clase 4: LIASAS
-

Catalizan reacciones de ruptura de sustratos o enlaces moleculares:

A-B A + B
Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que cataliza la reaccin:
cido acetactico CO2 + acetona

Clase 5: ISOMERASAS
- Catalizan la interconversin de ismeros:A

B
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Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones
representadas en la tabla inferior:

Gliceraldehdo-3-fosfato

Gliceraldehdo-3-fosfato

Dihidroxiacetona-fosfato

dihidroxiacetona-fosfato

Clase 6: LIGASAS
- Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifosfato (ATP,
GTP, etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi
Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reaccin: piruvato + CO2 + ATP
oxaloacetato + ADP + Pi

Clase 2: TRANSFERASAS
-

Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del hidrgeno) de un sustrato a

otro, segn la reaccin:
A-B + C
A + C-B
Un ejemplo es la glucoquinasa, que cataliza la reaccin representada en la Figura:
Glucosa + ATP
ADP + glucosa-6-fosfato

6. APLICACIONES CLNICAS
La medicin de la actividad de las enzimas plasmticas es una importante herramienta en el
diagnstico y monitoreo del tratamiento de diversas enfermedades.
En la sangre se encuentran enzimas que tienen un papel fisiolgico en la sangre, pero adems,
se pueden encontrar pequenas cantidades de las enzimas que aparecen normalmente en los
tejidos.
El nivel en sangre de estas enzimas intracelulares aumenta en algunas enfermedades. Como
consecuencia de muerte celular o como cambios en la permeabilidad de las membranas, hay un
incremento de la liberacin de esas enzimas al plasma, por lo que su determinacion es un
importante indicio de dao celular en algunos tejidos.

Enzimas cuyo estudio se ha mostrado util en el diagnstico de enfermedades:

Alanina aminotransferasa (ALT). Enfermedades hepaticas y cardiacas.

Aldolasa. Enfermedades musculares.
Amilasa. Enfermedades pancreticas.
Aspartato aminotransferasa (AST). Enfermedades hepaticas y cardiacas.
Colinestarasa (pseudocolinestarasa). Intoxicacin organofosforada aguda.
Creatin Kinasa (CK o CPK). Enfermedades cardiacas y musculares.
Enzima Convertidora de Angiotensina Sarcoidosis.

Enzimas cuyo estudio se ha mostrado til en el diagnstico de enfermedades:

Fosfatasa cida. Enfermedades prostticas.

Fosfatasa alcalina. Enfermedades hepaticas y osea.
Gamma-Glutamyltransferase (GGT). Enfermedades hepaticas, monitoreo de reabilitacion
alcohlica.
Lactato Deshidrogenasa (LDH). Enfermedades hepaticas, cardiacas y dao cerebral.
Lipasa. Pancreatitis.
Lisozima Algunas leucemias agudas.

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