FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA

septiembre 2023 – febrero 2024

BIOQUÍMICA

Bqf. Geovanny Barrera Luna, MSc.

 Enzimas y cinética enzimática

Renilla-luciferina 2-monooxigenasa

La actividad enzimática es responsable del resplandor de una medusa luminiscente. La

enzima aequorina cataliza la oxidación de un compuesto químico por el oxígeno en
presencia de Ca para liberar CO2 y luz.
 Enzimas
Biocatalizadores proteícos. Aceleran la llegada a un equilibrio.

Procesamiento de E e información en el interior de las células (miles de

reacciones químicas individuales).

Velocidad - satisfaga necesidades fisiológicas de la célula

Alta especificidad: un reactante concreto siempre debería generar un

producto determinado.

Todas las reacciones bioquímicas son catalizadas por enzimas.

 Enzimas

• Aceleran las reacciones de 103 a 1020 veces o más.

• Reacción sencilla: adición de H2O al CO2 (anhidrasa carbónica). Cada

molécula hidrata 106 moléculas de CO2 por segundo.

• Una enzima cataliza una única reacción química o conjunto de

reacciones estrechamente relacionadas.

• Enzimas proteolíticas difieren en su grado de especificidad hacia el

sustrato.
 Enzimas

Papaína: poco selectiva, hidroliza cualquier enlace peptídico sin

importarle mucho la identidad de las cadenas laterales adyacentes.

Tripsina: enzima digestiva, bastante selectiva cataliza hidrólisis de

enlaces peptídicos únicamente en el lado carboxilo de los residuos de
lisina y arginina.

Trombina: más específica, coagulación de la sangre.

 Partes del sistema enzimático

Sustrato y productos
• Sustrato: molécula actúa enzima: 1 o 2. máx. 3.
• Producto: molécula acción enzima sobre sustratos.

Holoenzima. Complejo funcional completo de una proteína, formada:

apoenzima y coenzima.

Apoenzima. Enzima propiamente dicha, naturaleza proteica, libre de

cofactores.
 Partes del sistema enzimático
Cofactor: Parte no proteínica. Se dividen en 2 grupos:

• pequeñas moléculas orgánicas coenzimas, sintetizadas a partir de

vitaminas

• metales Coenzimas fuertemente unidas grupo prostético

Activadores: iones metálicos: Mg2+, Cu2+, K+, Na+. Aceleran velocidad

reacción.

Inhibidores: disminuyen velocidad reacciones enzimáticas. Agentes

desnaturalizan: aniones complejos o metales pesados Zn2+, Pb2+, Ag+, etc.
Coenzimas
Transfieren e- o grupos químicos de un sustrato a otra molécula.
• PPT (Pirofosfato de tiamina)
• FAD (flavín adenín dinucleótido o dinucleótido de flavina y
adenina)
• NAD (nicotinamida adenina dinucleótido)
• Coenzima A
• PLP (Piridoxal fosfato)
• Biotina
• Tetrahidrofolato (THF)
 Enzimas: sitio activo

Sitio Activo: regiones de la enzima que participan en la

reacción enzimática.
Poseen grupos químicos especiales de residuos de
aminoácidos.
La porción de la molécula, fuera de sitios activos, no participa
directamente pero provee soporte y esqueleto a los sitios
activos.
 Sitio activo
Interacción entre enzima y sustrato promueven la formación del estado
de transición.
• Es una grieta o hendidura tridimensional.
• Representa una pequeña parte del V total de una enzima.
• Son microentornos únicos.
• Sustratos se unen a las enzimas mediante múltiples interacciones
débiles.
• La especificidad de la unión depende de la perfectamente definida
disposición de los átomos en un centro activo.
 Sitio activo
S+E (ES) E+P
• Modelo llave-cerradura: centro activo de la enzima libre tiene
la forma complementaria a la del substrato.

• Ajuste inducido: la enzima cambia de forma cuando se une al

sustrato. El centro activo adopta una forma complementaria a
la del sustrato solo después de haberse unido al sustrato.
 Nomenclatura de las enzimas
• Unión Internacional Bioquímica (UIB): reacción catalizada o sustrato,
terminación asa.
• Identificar tipo de reacción.
• Escribir nombre sustrato, nombre de la reacción con el sufijo “asa”.

ATP + glucosa --------------------->glucosa 6-fosfato + ADP

Transferencia grupo fosfato del ATP…glucosa a glucosa 6-fosfato

(glucosa 6-fosfotransferasa) (hexocinasa).
 Clasificación de las enzimas
Se clasifican en 6 grupos:

1. Oxidorreductasas.
2. Transferasas.
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
6. Ligasas
 Clasificación de las enzimas
1. Oxidorreductasas
Catalizan transferencia e- o átomos de H de un sistema redox:
deshidrogenadas, reductasas, oxidasas, peroxidasas, hidroxilasas y
oxigenasas. Coenzimas: NAD+ ,NADP+ .

2. Transferasas
Catalizan transferencia de grupos funcionales de un sustrato a otro:
aciltransferasas, fosfotransferasas, glicotransferasas,
fosforribotransferasas, pirofosfotransferasas y metiltransferasas.
Cinasas.
 Clasificación de las enzimas
3. Hidrolasas
Catalizan transferencia de grupos, pero la molécula aceptora es
exclusivamente una molécula de agua: esterasas, amidasas, peptidasas,
fosfatasas, glucosidasas, ureasas.

4. Liasas
Catalizan reacciones relacionadas con la adición o extracción de H2O,
NH3 o CO2 forman dobles enlaces: descarboxilasa, aldolasa, sintasas y
desaminasas.
 Clasificación de las enzimas

5. Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerización recolocando los átomos de una
molécula: isomerasas, racemasas, epimerasas y mutasas.

6. Ligasas
Utilizan ATP para catalizar reacciones de síntesis dependientes de
energía. Llamadas sintetasas.
 Distribución de las enzimas
Localización subcelular de sistemas enzimáticos:
 Mecanismo de acción enzimática

• Energía de activación: Diferencia entre energía libre de

reactantes y energía de estado de transición.
 Energía libre (G)
• Propiedad termodinámica que representa una medida de la E útil.

• E capaz de realizar un trabajo

1. diferencia de energía libre (ΔG) entre productos y reactantes
(reacción tendrá lugar en forma espontánea).
2. E libre necesaria para iniciar la conversión de los reactantes en
productos (determina la velocidad de la reacción).
 Incremento de energía libre
• Una reacción espontánea únicamente si ΔG es negativo.
- reacción sin aporte E, libera E, exergónica.
• No espontánea si ΔG es positivo
- aporte de E libre, endergónica.
• El ΔG de una reacción es independiente de la ruta que se ha seguido
durante transformación.
• El ΔG no proporciona ninguna información sobre la v de una reacción.
• Sistema en equilibrio ΔG es cero, no hay cambio neto en las
concentraciones de p y r.
Energía de activación y reacciones químicas
 Cinética y Regulación
• Estudio comportamiento de velocidad enzimas.

• Herramienta para calcular [C] de enzima.

• Compara actividad catalítica entre enzimas.

• Descripción cuantitativa de veneno o medicamento.

• Su velocidad se controla por [C] de enzima y sustrato.

 Cinética y Regulación
Se necesita comprender como funcionan las E y su actividad.
Cuantificar parámetros cinéticos:
• cómo de rápido puede funcionar una enzima.
• A qué v funcionará a las concentraciones presentes en una célula.
• Sobre qué sustrato actúa más fácilmente la enzima.

Enzimas alostéricas:
• regulan complejos metabólicos.
• Contribuyen a una integración del metabolismo eficaz.
 Cinética: velocidades de reacción
• Reacción sencilla:

A→P

• La v de la reacción, es la cantidad de reactante, A, que

desaparece en una unidad de tiempo, t, determinada.

•Equivale a la v a la que se forma el producto P.

•Reacciones en las que la v es directamente proporcional a la

concentración de reactante se denominan reacciones de primer
orden.
 Cinética: velocidades de reacción

• Reacción de segundo orden: “cuando la velocidad de

reacción es proporcional a la concentración de los dos
reactantes y de su tendencia a reaccionar”.

• Reacciones de orden cero: la velocidad de la reacción es

independiente de la concentración de los reactantes.
 Modelo cinético de Michaelis-Menten

• Reacción global:
Orden de reacción para una reacción
enzimática
• Concentración de enzima
constante.
• Al inicio (concentraciones bajas
de sustrato) se tiene una
reacción de primer orden.
• A concentraciones elevadas de
sustrato se vuelve una reacción
de orden cero.
 Modelo cinético de Michaelis-Menten

• Describe la dependencia de la v de la C de sustrato.

• Predice actividad de la enzima a cierta C de sustrato.
• Se aplica a la Vi y cuando todas las demás variables están
constantes.
• Parte de la suposición de que la reacción enzimática se lleva
a cabo en dos etapas.
 Modelo cinético de Michaelis-Menten

• El límite de la velocidad de reacción es un valor asintótico.

• Km es la concentración de sustrato a la que la reacción enzimática

alcanza la mitad de la velocidad máxima.

• Km es una medida de la afinidad entre una enzima y un sustrato, y

por tanto de la estabilidad del complejo E-S.

• Valores de Km altos indican poca afinidad de la enzima por el

sustrato. (útil en presencia de 2 sustratos)
 Significado de Km en el metabolismo
• Km se determina in vitro mediante enzimas purificadas.
• Cambios en [S] in vivo regulan la velocidad de formación del
producto si se acerca a Km. V no proporcional a [S] a valores
altos.
• Si [S] es significativamente menor a Km, no dará lugar a una
cantidad significativa de producto.
• Es posible elegir la enzima fisiológicamente más importante a
partir de Km. (isoenzimas)
 Factores que influyen en la velocidad de
reacción enzimática.
• Concentración de sustrato
• pH
• Temperatura
• Concentración de la enzima
• Activadores
• Inhibidores.
 Concentración de la enzima

• Manteniendo el pH,
temperatura y
concentración del
sustrato constantes, la
velocidad de reacción
enzimática es
directamente
proporcional a la
concentración de la
enzima.
 Efecto del pH
• pH óptimo: pH al cual la
enzima alcanza su máxima
actividad. Por encima de éste
o debajo de éste su actividad
disminuye.
• pH extremos desnaturalizan
la enzima.
• Muchas enzimas funciona
óptimamente a pH de 6,9 y
7,7.
 Efecto del pH

• [H+] afecta grado de ionización de

aa, del sustrato o complejo ES.

• Pepsina pH 2

• Poligalacturonasa (tomate) pH 4

• Polifenoloxidasa (durazno) pH6

• Quimotripsina pH 8
 Efecto de la temperatura
• > T > Velocidad de reacción,
pero solo dentro del rango de
estabilidad enzimática.
• T óptima: 30-45° C
• Inactivación a + 60° C
• Afectan también: la
solubilidad de gases, pH,
afinidad enzima-sustrato,
activadores e inhibidores.
 Efecto de la temperatura
• Manteniendo el pH constante, la
actividad enzimática aumenta
con el aumento de la
temperatura hasta llegar a un
máximo (T óptima) luego
decrece.

• Temperaturas altas
desnaturalizan la enzima. T muy
bajas las inhiben.
 Actividad enzimática
• Se obtiene determinando la velocidad de una reacción catalizada
bajo condiciones definidas.

• Velocidad de reacción (v) se expresa en forma de v de

conversión del S en P por minuto (mol/min).

• La cantidad de actividad enzimática que convierte 1 mol de S en

1 mol de P por segundo se denomina «katal» (1 kat = 1mol/s).
Muy pequeña, no es útil usarla.
 Actividad enzimática
• Unidad estándar de actividad se emplea la «unidad
internacional» que corresponde a una cifra mucho mayor (1
UI=1µmol/min).

• La actividad específica de una enzima expresada como

µmol/min/mg proteína o UI/mg proteína indica cantidad de
enzima en una muestra de proteína y estima su pureza.

• Cuanto + alta sea actividad específica de enzima, > pureza.

 Especificidad de reacción y de sustrato
• Determinada por residuos de aa en centro catalítico de la
enzima.

• Centro activo de la enzima formado por lugar de fijación del

sustrato y por centro catalítico.

• La especificidad de sustrato depende del tamaño, estructura,

cargas, polaridad y carácter hidrófobo de su lugar de fijación.
 Especificidad de reacción y de sustrato
• Enzimas muy específicas catalizan un solo tipo de reacción:
ureasa y catalasa.

• Enzimas con especificidad al sustrato + amplia: quimotripsina,

tripsina y elastasa.

• Isoenzimas catalizan la misma reacción, pero tienen estructura

primaria y/o composición subunitaria diferentes. En suero se
determinan para diagnóstico de niveles de enzimas e isoenzimas
específicas de tejidos.