Enzimas

• Son catalizadores: Reducen la energia de

activacion de una reaccion mediante la creacion de
un mecanismo alterno.
• Muchas enzimas son proteinas (otras no: eg.
Ribonucleoproteinas)
• Estas macromoleculas se unen temporalmente a
uno o mas sustratos de la reaccion que catalizan.
Importancia

– Convierte Substratos en Productos

– Aumentan velocidad de la reacción hasta en 106

– Son específicos incluso hasta

estereoespecíficos

– Pueden cambiar substratos aquirales a

productos quirales
 Factores que afectan la accion
enzimatica
 pH
 Temperatura
 Concentracion de enzima
 Concentracion de sustrato
 Inhibidores & activadores
 Fuerza iónica del medio (eg. Salinidad)
Activación de Zimógeno
Las enzimas que son sintetizadas en una forma
inactiva se llaman proenzima o zimógeno.

Preproinsulin
• Para activarse el zimógeno necesita de un
cambio bioquímico en su estructura que le
lleve a conformar un centro activo, mediante
proteólisis en un lugar específico.

• El fragmento eliminado es llama “péptido de

activación”

• Esto regula la actividad de la enzima, al

mantenerla en forma no-funcional hasta
que se la necesite.
Algunos zimógenos conocidos:

• Tripsinógeno.
• Quimotripsinógeno.
• Pepsinógeno.
• Proteínas del sistema de coagulación.
• Proelastasa.
• Prolipasa.
• Procarboxipolipeptidasas.
La actividad enzimatica es afectada dramaticamente por
cambios en pH y Temperatura.

Cada enzima trabaja mejor a cierta temperatura y pH

 Su actividad disminuye fuera de cierto rango (de pH
& Temp). Esto se debe a una alteracion en la
estructura terciaria y a un cambio en las fuerzas no-
covalentes (puentes-H, interacciones ionicas, etc.)

Por ejemplo:
La pepsina (proteasa del estomago) trabaja
efectivamente a pH of 1-2

La Tripsina (proteasa del intestino delgado) no tiene

actividad a pH bajo, pero es activa a pH = 8.
• Cambios en pH afectan la ionizacion de
aminoacidos (e.g., Asp, Lys)

• Por otro lado, los puentes de hidrogeno son

facilmente rotos al aumentar la temperatura.
 Coenzimas y Cofactores y Grupos
Prostéticos
• Son especies no proteínicas asociadas a enzimas

• Ayudan o son imprescindibles para la reacción

• Ciertas enzimas solo contienen aminoacidos y son

activas. Otras enzimas requieren de una “especie”
quimica para tener actividad.
- Si la especie es inorganica (ion: Fe2+, Mn2+, Mg2+,
etc.) generalmente se lo llama cofactor.

- Si la especie es organica generalmente se la

llama coenzima. Estas son moleculas o iones
“ayudantes” que facilitan una transformacion
quimica.
• Una enzima sin cofactor es llamada “apoenzima”,
mientras que la enzima con su cofactor se la
conoce como “Holoenzima”:

Apoenzima + cofactor  Holoenzima

Grupos Prostéticos
• Cuando el cofactor o coenzima está fuertemente y
permanentemente ligado a la enzima, se lo llama
grupo prostetico
 Centro Activo
• Es una cavidad tridimensional, usualmente
inaccesible al solvente.
• Contiene un centro catalitico y uno de “union”
• Esta formado por residuos (aa’s) responsables por
la especificidad de la enzima, y acción catalitica.

Modelos
a) Lock & Key
b) Induced fit.
Lock & Key.- Asume que el centro activo tiene la
forma exacta de un sustrato especifico.

• Una vez que el sustrato se une a la enzima, no hay

mas modificaciones (reordenamiento interno)

Induced fit.- Asume que el centro activo es flexible y

los residuos (aa’s) “buscan” el sustrato correcto.

• Cuando el sustrato se une al centro activo, nuevos

cambios conformacionales ocurren.
• Los sustratos se unen al centro activo a través de
puentes-H, interacciones hidrofobicas, enlaces
covalente temporales, o una combinacion de todos
estos, dando lugar al complejo enzima-sustrato.

• Una vez que la reaccion ha ocurrido en el centro

activo, los productos son eliminados debido a
interacciones no-covalentes no favorables o
debido a efectos estericos.
 Enzimas Alostericas
• Enzima cuya actividad está regulada mediante un
centro alostérico, que es un sitio, distinto del
centro activo, al que se une un regulador (llamado
regulador alostérico) de manera reversible.

• La unión de este regulador modifica la estructura

tridimensional de la enzima y llega a afectar la
configuración del centro activo.

• Cuando el regulador incrementa la actividad de la

proteina, se lo llama activador alosterico, mientras
que si disminuye la actividad se lo llama inhibidor
alosterico.
Regulación alostérica
 Isoenzimas (Isozimas)

• Son enzimas que difieren en la secuencia de los

aminoacidos, pero catalizan la misma reaccion
quimica.

• Se las identifica por diferentes parametros (e.g. KM)

o diferentes propiedades reguladoras.

• Difieren en la sensibilidad al substrato, la velocidad

de la reacción o los sitios donde se utilizan
 Clasificacion Internacional de Enzimas

En general se identifican 6 tipos de enzimas de

acuerdo a su funcion (catalizan las siguientes
reacciones):
1) Oxidacion-reduccion
2) Reacciones de transferencia de grupos
3) hidrolisis
4) Lisis no-hidrolitica y no-oxidativa
5) Isomerizacion
6) Reacciones de “asociacion”

Es decir, estas son respectivamente:

1) Oxidoreductasas (deshidrogenasas)
Catalizan las reacciones redox:
L-lactato  piruvato
L-2-hidroxipropanoato + NAD+  propanoato-2-ona

• Una oxidacion requiere de un incremento en los atomos de

oxigeno, o una disminucion en los atomos de hidrogeno.
• Una reduccion involucra un incremento en los hidrogenos o
disminucion en los oxigenos.

Oxidacion de alcanos:
CH3–CH3 (etano)  CH3–CH2OH (etanol) 
CH3–COH (acetaldehide) 
CH3–COOH (a. acetico)
2) Transferasas
Catalizan las reacciones donde se produce la
transferencia de un grupo funcional:
3) Liasas
Catalizan en general la lisis de un sustrato, es decir
una rupture de un enlace:
4) Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrolisis: lisis con agua, es
decir ruptura de un enlace mediante agua
5) Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacion:
6) Ligasas (sintetasas)
Catalizan reacciones de sintesis (union de dos
sustratos) y generalmente requieren de ATP:
 Cinetica Enzimatica

• Cuando una enzima cataliza una reaccion, el

mecanismo involucra la formacion de un compuesto
intermedio llamado “complejo enzima-sustrato”, ES

• En una reaccion de un solo sustrato, la siguiente

secuencia se observa ( representa un
equilibrio)

E + S  ES  E + P
• El primer paso es un equilibrio rapido.
• El segundo paso es la formacion de producto del
complejo enzima-sustrato
• La enzima queda lista para volver a realizar otra
reaccion.

Por que la Eact es reducida por la enzima?

Porque el estado de transicion (complejo ES) es mas estable (menos E) debido a efectos electrostaticos y/o
dipolo-dipolo.
• En general, la asociacion y disociacion del equilibrio
son rapidas debido a que solo intervienen
interacciones no-covalentes. El segundo paso
involucra ruptura y formacion de enlaces, por lo
tanto es el paso determinante.
 Velocidad de una Reaccion Catalizada

Concentracion de Sustrato:
• La velocidad aumenta con
el incremento de substrato
(hiperbola)
• Llega a una vel. máxima
(Vmax), a partir de la cual
velrxn  [S]0

• El que la velocidad no
pueda seguirse
incrementando, refleja la
saturación del centro activo
con el substrato.
• La velocidad de la reaccion total esta limitada por el
paso ES  E + P, ya que el equilibrio inicial es
rapido.

La ley de la velocidad para este paso es:

vel = k2[ES]

• Por cuanto [ES] es un intermedio, la ley de

velocidad no puede expresarse en funcion de
[ES], sino solo en funcion de [E] y/o [S].
• Se asume que el sistema esta en un estado
estacionario respecto al complejo ES, es decir,
[ES]<<[E]<<[S].

• Por lo tanto, la velocidad de desaparicion de ES

expresada como cambio infinitesimal se aproxima a
cero:

Es decir,
Agrupando terminos tenemos:

Y despejando [ES],
Ahora sustituimos [ES] en vel = k2[ES]

Igualmente,
Notese que en

Todas las constantes estan agrupadas. Aqui se

define la constante de Michaelis-Menden, KM,
como:

Que corresponde a
Anteriormente definimos,

Sustituyendo KM,
Ya que la ley de la velocidad fue definida como,
vel = k2[ES]

Sustituyendo [ES] queda,

Usando [E0] porque siempre se conoce [E0]

El resultado es
Donde
De aqui, el grafico
Pero que significa “fisicamente”?

• KM es un indicador de la afinidad de una enzima

por cierto sustrato.

• Por lo tanto, KM, es un parametro que define la

tendencia de ES de asociarse y/o disociarse

• En KM, 50 % de los centros activos contienen

sustrato
Observacion importante:

• Como se hace una apropiada interpretacion y

cuantificacion de Vmax & KM ??

• Se lo hace transformando la ecuacion de

Michaelis-Menden en una ecuacion lineal:
Lineweaver-Burk plot (double reciprocal plot)
Que se representa una ecuacion de una
linea recta:
y = mx+b
El plot - Lineweaver-Burk produce:
 kcat (turnover number)

• La constante de velocidad del paso determinante

es tambien llamada kcat ya que de esta define el
número de moleculas de [S] transformadas a [P]
por unidad de tiempo (turnover number)

• Se calcula a partir de la velocidad máxima

 Inhibicion Enzimatica
• Inhibidores enzimaticos son moleculas que se
unen a enzimas y disminuyen su actividad.

• Muchisimos farmacos (y pesticidas) son

inhibidores enzimaticos

• La interaccion con un inhibidor puede

– evitar que un sustrato entre al centro activo
– detener la reaccion de catalisis
• La interacción con el inhibidor puede ser
reversible o irreversible.

• En general, la inhibicion irreversible ocurre

cuando cierto agente reacciona con la
enzima y produce cambios químicos o
estructurales

• En general, la inhibicion reversible ocurre

mediante interacciones no-covalentes.
• La enzima ALDH-2
(aldehído
deshidrogenasa-2) es
conocida por su
capacidad para reducir
el nivel de
acetaldehído, una
molécula que se
acumula con el
consumo de alcohol y
que es responsable de
los síntomas causados
por las resacas.
• La inhibicion irreversible es diferente de
la inactivacion irreversible. La primera
es específica y no es general para todas
las enzimas; la segunda ocurre cuando
hay destruccion de la estructura
cuaternaria y generalmente es general
para todas las enzimas (pH, calor, etc.)
 Inhibicion Reversible

• Estas sustancias se unen a la enzima en forma no-

covalente (puentes-H, atraccion electrostatica y
fuerzas de London)

• No sostienen cambios químicos

• Se remueven facilmente por dilución o dialisis

Inhibicion Competitiva
El sustrato [S] y el inhibidor [I] compiten por el
centro activo al poseer estructuras semejantes.
Usando el L-B plot, la inhibicion competitiva
produce:
Inhibicion No-competitiva
El inhibidor se une con igual afinidad a la enzima y
al complejo enzima-sustrato. También se le llama
inhibicion mixta.
Usando el L-B plot, la inhibicion no-competitiva
produce:
Inhibicion Anticompetitiva
Es poco comun. En estos casos [I] se une al
complejo [ES] en forma reversible.
• Agonista: Se une a un “receptor” y tiene
la misma función (imita) que el “ligando”
natural. Por lo tanto tiene un efecto
biológico similar.

• Antagonista: Compiten con el ligando

natural y actuan como inhibidores
reversibles competitivos, no-competitivos,
e irreversibles.
Enzymes as therapeutic agents
Enzyme Use
Asparaginase Leukaemia
Collagenase Skin ulcers
Glutaminase Leukaemia
Hyaluronidase Heart attack
Lysozyme Antibiotic
Rhodanase Cyanide poisoning
Ribonuclease Antiviral
b-Lactamase Penicillin allergy
Streptokinase Blood clots
Trypsin Inflammation
Uricase Gout
Urokinase Blood clots