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Enzimas

Historia
1700s estudios en la digestin de carne
1800s conversin del almidn en azcar por la saliva y
extractos de plantas
1850s Louis Pasteur la fermentacin, del azcar hasta
alcohol es catalizado por fermentos
1897 Eduard Buchner fermentacin es promovida por
molculas. Frederick W. Kuhne llam a estas molculas
ENZIMAS.
1962 Cristalizacin de la ureasa James Sumner

Qu es una enzima?
Es un tipo de protena que acta como catalizador de
reacciones qumicas.
Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el
punto de equilibrio.
Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 103 a
104 molculas por segundo.
Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de
modo tal que no genere ms producto que el necesario.

Qu hace un catalizador?
Reduce la barrera de energa para una reaccin
por lo que ms molculas alcanzan la energa de
transicin. No tiene efecto sobre la posicin de
equilibrio

Como lo hace?
Forzando la molcula a
un estado intermediario
que se parece al de
transicin
pero
de
menor energa.
Puede
reunir
dos
molculas reactivas en
la orientacin adecuada,
aumentando
su
reactividad
Orienta partes de la
molcula de forma
adecuada para alcanzar
la transicin.

Modelos de actividad Enzimtica


Enzima y sustrato se unen a travs de un sitio activo. Este
es una hendidura en la protena, rodeada de cadenas
laterales de aminocidos que se unen al sustrato y de
otras cadenas laterales que intervienen en la catlisis. El
ajuste es muy estrecho por lo que explica la especificidad.
Modelo cerradura-llave: explica la especificidad, pero no
la catlisis. Emil Fischer
Modelo de ajuste inducido: la enzima no acepta
simplemente el sustrato, sino que exige que este se
distorsione a algo cercano al estado de transicin.

Modelos de actividad Enzimtica

Importante
Todas las enzimas son protenas con excepcin de un pequeo
grupo de molculas catalticas de RNA
Se conocen mas de 3000 enzimas.
Las enzimas son catalizadores biolgicos que aceleran la reaccin.
Las enzimas son altamente especificas y reaccionan solo con un
sustrato para formar un producto y puede acelerar la reaccin en
ms de 1017.

Importante
Las enzimas tienen un rango de magnitud de incrementar la reaccin
de 5 a 17 ordenes de magnitud

Tipos de enzimas por accin


Enzimas extracelulares, exocelulares o
exoenzimas.- tienen accin cataltica fuera
de la clula. Ejemplo amilasa
Enzimas intracelulares, endocelulares o
endoenzimas. Cuya accin cataltica se
limita al interior de la clula.

Cofactores / coenzima
Algunas
enzimas
requieren
un
componente
quimico
adicional
denominado cofactores.
Las coenzimas actan como portadores
transitorios de grupos funcionales
especficos

Cofactor / coenzima
Un cofactor o coenzima que es muy relacionado o se
enlaza covalentemente a una protena enzimtica es
llamada grupo prosttico.
La enzima activa o completa es llamada holoenzima

La Parte proteica (sin cofactor y/o coenzima): apoenzima


o apoproteina

Clasificacin de las Enzimas


Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada
Oxidoreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas

Reacciones que transfieren electrones de un sustrato


a otro.xido reduccin
Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra.
Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas
con la adicin de una molcula de agua.
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
molcula de agua.
Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo
funcional de una posicin a otra.
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
molculas con gasto de energa.

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de transferencia de hidrgeno (H) o
electrones (e-) de un sustrato a otro
AH2 + B

Ared + Box

A + BH2

Aox + Bred

Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del
hidrgeno) de un sustrato a otro

A-B +

A + C-B

Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis

A-B

H2O

AH + B-OH

Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o unin de sustratos

A-B

A + B

Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros
A

Fosfoglucosa isomerasa
EC 5.

Clase 6: LIGASAS

Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea


de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.)

A + B + XTP

A-B + XDP + Pi

Especificidad y sitio activo


Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
El sitio activo es una porcin
espacial de la enzima creada
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de aminocidos especficos. Estos
pueden
no
estar
en
secuencia, pero los dobleces
de la protena enzimtica los
aproximan.

enzima

sustrato

productos
enzima

Localizacin enzimtica
Na/K ATPasa

membrana

Retculo endoplasma
Glucosa 6 fosfatasa

Alfa manosidasa
Complejo Golgi

Catalasa
Peroxisoma

Las enzimas ejercen su


funcin predominantemente
en el interior celular. Mas
an lo hacen en determinado
organelo de la clula.
Las
enzimas
que
se
encuentran en el plasma o
lquidos
diversos
corresponden a aquellas que
se estn eliminando y muy
pocas como la LCAT (Lecitina
colesterol acil transferasa),
LLP (Lipasa lipoproteica),
ejercen su funcin a nivel
plasmtico.

Succinato deshidrogenasa.Citocromo oxidasa

Mitocondria

Factores que modifican la reaccin


enzimtica
La velocidad de una reaccin mediada por
enzimas est influenciada por:

Temperatura del medio


El pH del medio
Concentracin de la enzima
Concentracin del sustrato

No existe actividad enzimtica a -273C


o cero absoluto.
A partir de esa temperatura los incrementos provocan mayor actividad enzimtica. La que se expresa como coeficiente de temperatura o Q10. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10C
de aumento de temperatura.
En trminos generales Q10 = 2, es decir
que por cada 10C de temperatura la
velocidad se dobla.
Existe una temperatura ptima tras la
cual
los
aumentos
provocan
desnaturalizacin
de
la
protena
enzimtica y prdida de la actividad.

actividad

Temperatura

temperatura

70

pH

Cada enzima tiene un pH


ptimo de trabajo, el cul es
variable. Las enzimas intracelulares trabajan entre 5 y 9 ,
las enzimas digestivas pueden
trabajar en pH diferentes.
Los extremos de pH afectan la
ionizacin de los centros
activos
(-COO- (glutamico,
aspartico)
NH3+ (arginina,
lisina,histidina) SH (Cisteina,
metionina)).
0

pH

Enzima YXHH Enzima YX H Enzima YX


pH cido (inac)

pH ptimo (activo)

pH alcalino (inac)

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Concentracin de la enzima y
constante de equilibrio
La concentracin de la enzima incrementa la velocidad de la
reaccin, pero no modifica la constante de equilibrio.
As, si la reaccin se produce en ausencia de la enzima...
K1

SP
K 1

La constante de equilibrio ser:

K1
( P)
Keq

K 1 (S )

Y, si la reaccin se produce en presencia de la enzima...


K1

Enz S Enz P
K 1

La constante de equilibrio ser:

Keq

K1
K 1

( Enz )( P )
( Enz )(S )

( P)
(S )

Cintica qumica: cintica enzimtica


Las reacciones qumicas son:
De primer orden si son dependientes de la concentracin de
sustrato
De orden cero si son independientes de la concentracin de
sustrato

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las


reacciones catalizadas por enzimas, manteniendo
condiciones ptimas en la mayora de factores: pH
temp, tiempo, concent.de enzima, conc. De sustrato etc

Cintica enzimtica.....

Concentracin del sustrato


Si se aumenta la concentracin
del sustrato, manteniendo constante las dems variables, la
velocidad inicial de reaccin (Vi)
aumenta hasta un valor mximo
(Vmax) el que se estabiliza.
Se dice bajo estas condiciones
que la enzima est saturada con
el sustrato. Esto se produce de
acuerdo a la afinidad enzima
sustrato.

Vmax

Vmax/2

Km.
Primer
orden

S
Orden
cero

Leonor Michelis y Maud Menten (1913)

Ecuacin de Michaelis Menten


La relacin entre velocidad de reaccin y concentracin de
sustrato se describe en la frmula:

Vmax[ S ]
Km [ S ]

Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos
estn llenos de sustrato. Toda la enzima est bajo la forma de [ES] y la
Km se define como concentracin de sustrato a Vmax/2
Vmax: es un ndice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando
todos los sitios activos estn saturados, y es proporcional a la
concentracin de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad.
Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato.
Una baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de
Km son unidades de concentracin.

Km: expresin de afinidad


Vmax

Vmax/2

Km. Km
Hexoquinasa
(cerebro)

Glucoquinasa
(hgado)

La aplicacin de la ecuacin de
Michaelis Menten se basa en...
K1

K3

K2

K4

E S ES E P
La concentracin de sustrato es tan grande con respecto a la de
enzima, que la formacin de ES no altera significativamente la
concentracin de sustrato.
Al inicio de la reaccin la concentracin del producto es tan
insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser
ignorada.
La velocidad de transformacin de ES en E+P(k3) es el factor
limitante de la reaccin.
La formacin de ES es rpida y reversible y es igual a la velocidad
de desaparicin de ES.

Reacciones de multisustrato
Captacin indistinta..Cada sustrato ser captado en
su momento, generalmente uno es preferente:

Hexoquinasa, glucosa? Galactosa?

Reacciones de multisustrato
Captacin ordenada de sustratos para unir
un sustrato debe unirse otro primero

Reacciones de oxidorreduccin cocatalizadas por NAD

Reacciones de multisustrato
Mecanismo ping-pong cuando existe una secuencia
cataltica. La enzima se modifica por persistencia de un
fragmento del primer sustrato.

Enzimas proteolticas

Grfica de Lineweaver Burk


La grfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
Se usa la inversa de la ecuacin de Michaelis Menten.

1/v

1
km 1
1

v Vmax [ S ] Vmax
Cuando 1/v se grafica frente a
1/s se obtiene una recta,
donde la pendiente es
Km/Vmax.
-1/Km
La interseccin en el eje de y
es igual a 1/Vmax y la del eje
de x es igual a 1/Km.

1/Vmax
1/[S]

Inhibidores competitivos
Estructuras semejantes al sustrato que compiten con l por el mismo
centro activo.
Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentracin del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.

La Vmax no cambia, pero si el Km porque se


necesita ms sustrato.
1/V

inhibidor
1/Vmax

[S]

-1/Km

1/[S]

Inhibidores competitivos

Inhibidores no competitivos
Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio independiente de la enzima.
Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiempo. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentracin del
sustrato.

No tiene efecto sobre la Km pero s sobre la Vmax.

1/V
V
inhibidor
1/Vmax

[S]

-1/Km

1/[S]

Inhibicin
no competitiva

Inhibidores irreversibles
Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminocido
de la enzima, para formar un complejo estable permanentemente
inactivado.
Se les llama tambin substratos suicidas.
Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.

Efecto clnico de los Inhibidores


Droga
Lovastatina
5-fluouracil
Metrotexate
Alopurinol
Cumadin
Aspirina
Captopril

Uso teraputico
Hipercolesterolemia
Cncer
Cncer
Gota
Anticoagulante
Antiinflamatorio
Hipertensin art.

Enzima afectada
HMGCoA reductasa
Timidilato sintetasa
Dihidrofolato reductasa
Xantino oxidasa
Glutamil carboxilasa
Ciclooxigenasa
Enz.convert.angiotensina

Tipo de inhibidor
Competitiva
Irreversible
Competitiva
Irreversible
Competitiva
Irreversible
Competitiva

Papel Clnico de las Enzimas


Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
lquidos biolgicos con cierta frecuencia.
Todas las enzimas plasmticas, las del LCR o
Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentracin actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destruccin heptica o eliminacin renal.
nicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lpidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulacin ejercen su actividad en el plasma o
suero.

Elevacin enzimtica en el
plasma...
La actividad enzimtica en el plasma y otros lquidos biolgicos
se produce por:
Necrosis: destruccin celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
Sobre produccin: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
Menor eliminacin: no se elimina normalmente
-obstruccin biliar-.
Incremento de clulas inflamatorias: en lquidos como
Pleural los exudados se acompaan de aumento de actividad
enzimtica.

Origen de las enzimas


en el plasma
Enzimas
Especficas del plasma
Secretadas
Del metabolismo celular

Ejemplos
Protrombina, plasmingeno,ceruloplasmina,
Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa
Amilasas, fosfatasa prosttica, pepsingeno
Lctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
alanina transferasa.

Uso de Enzimas en el diagnstico


Clnico

Uso de Enzimas en el diagnstico


Clnico

Uso de Enzimas en el diagnstico


Clnico

Uso de Enzimas en el diagnstico


Clnico

Uso de Enzimas en el diagnstico


Clnico

Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura
qumica y propiedades cinticas.
Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dmeros o tetrmeros- .

Isoenzimas LDH

Bazo

Pulmones

Eritrocitos

Msculo

Miocardio

Rin

LDH1
LDH2
LDH3
LDH4
LDH5

Hgado

100%
%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa lctica
(LDH). Cada una es un oligmero con cuatro protmeros de los tipos H y M y
tiene un PM de 34 000.
Los protmeros se combinan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia.
El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos.

Isoenzima SubunidadesTejido predominante


LDH1
HHHH
corazn
LDH2
HHHM
corazn
LDH3
HHMM
rin, pulmn
LDH4
HMMM
hgado
LDH5
MMMM
hgado

normal

infarto

Creatino fosfokinasa
Isoenzima
CK1
Ck2
CK3

Subunidades
BB
MB
MM

Existen tres isoenzimas de


la creatino fosfokinasa.
Cada una es un dmero
formado por la combinacin de protmeros M y B.
Cada dmero representa a
un tejido en particular.

Tejido predominante
Cerebro
Msculo cardiaco
Msculo esqueltico
(+)
CK1
CK2
CK3

(-)

Modelo imaginario para catalizar la ruptura de una barra de metal

Moderna nocin de catlisis enzimtica Michael Polanyi 1921, Haldane 1930 y


elaborado finalmente por Linus Pauling 1946: La enzima debe ser complementario
al estado de transicion