Diagnóstico d laboratorio

sábado, 26 de agosto de 2023 12:34 p. m.

RECOGIDA, TRASNPORTE Y PROCESAMIENTO

SANGRE - bacteriemia + fungemias = Septicemia. - La mayoría de las muestras se inoculan

HAY DOS TIPOS directamente en frascos que contienen caldos
- HEMOCULTIVO -> procedimiento
- septicemia continua -> En px con infecciones nutrientes enriquecidos.
importante
intravasculares (p. ej., endocarditis,
- Factor importante en el éxito de la
tromboflebitis séptica, infecciones asociadas con - Para asegurarse la máxima recuperación de oos
prueba = VOL de sangre
un catéter intravascular) o con una sepsis importantes, se debe inocular dos frascos de
procesada
fulminante (p. ej., shock séptico). medios para cada cultivo (10 ml de sangre por
¿Por qué ? + de la mitad de px sépticos
- septicemia intermitente-> en px con infecciones frasco).
tienen menos de un oo por ml de sangre.
localizadas (p. ej., pulmones, tracto urinario,
tejidos blandos). - en el laboratorio, se incuban a 37 °C y se
- Se deben recoger
- El momento de la recogida de la muestra de inspeccionan a intervalos regulares en busca de
aproximadamente 20 ml de
sangre es importante en px con septicemia signos de crecimiento microbiano.
sangre de un adulto por cada
intermitente
frasco de hemocultivo, y se deben
- Cuando se detecta crecimiento, se sub cultivan los
recoger volúmenes
- dado que los signos clínicos de la sepsis se dan caldos para aislar el oo xra su identificación y a las
proporcionalmente más pequeños
hasta 1 hora después de que oo se hayan pruebas de sensibilidad antimicrobiana.
de niños y de neonatos.
introducido en la sangre, puede que en el - La mayoría de los aislados clínicamente
- IMPORTANTE Realizar una momento en que el paciente se vuelve febril significativos se detectan entre el primer y el
desinfección cuidadosa del px ->
haya pocos oos, o ninguno, en la sangre. se segundo día de incubación; sin embargo, todos los
muchos px hospitalizados son
recomienda la recogida de dos o tres muestras cultivos deben incubarse durante un mínimo de 5 a
susceptibles a infecciones X OO
de sangre en momentos aleatorios durante un 7 días.
que colonizan la piel
período de tiempo de 24 horas.
- ¿Tincion de gram ? NO SE REALIZA Xq x lo general
hay escasos oo en la sangre de un paciente séptico,
LCR
Otros Lq esteriles
meningitis bacteriana = enf grave con alta morbilidad y
mortalidad si se retrasa el diagnóstico causal. Se pueden recoger otros lqs para cultivo bacteriológico = los líquidos
abdominal (peritoneal), torácico (pleural), sinovial y pericárdico.
- las muestras de LCR deben ser procesadas
inmediatamente después de su obtención. Debido a la - Si se puede recoger un gran volumen de líquido por aspiración (p. ej.,
labilidad (FALTA DE ESTABILIDAD) de algunos líquido abdominal o torácico), se debe inocular en frascos para
patógenos comunes (p. ej., Neisseria meningitidis, hemocultivo que contengan medios nutrientes.
Streptococcus pneumoniae)
- Bajo ningún concepto se debe refrigerar la muestra - se debe remitir al laboratorio una pequeña porción en un tubo estéril
o colocarla directamente en una incubadora. de modo que se puedan preparar tinciones apropiadas (p. ej., Gram,
ácido-alcohol resistencia).
- Se Desinfecta la piel del pX antes de realizar la - Muchos oos se asocian con infecciones en estas localizaciones, incluidas
punción lumbar, y se recoge el LCR en tubos estériles las mezclas polimicrobianas de oos aerobios y anaerobios. Por dicho
con tapones de rosca. motivo, la tinción biológica es útil para identificar los organismos
- Cuando se reciba la muestra en el laboratorio de responsables de la infección.
microbiología, se concentra por centrifugación y se - Dado que en la muestra puede haber una cantidad relativamente
utiliza el sedimento para inocular medios escasa de oos (por la dilución de los microorganismos o por eliminación
bacteriológicos y preparar una tinción de Gram. SI SE microbiana por la respuesta inmunitaria del hospedador), IMPORTANTE
HACE TINCION DE GRAM cultivar un volumen de líquido tan grande como sea posible.
- El técnico del laboratorio debe notificar - si sólo se recogen pequeñas cantidades --> inocular la muestra
inmediatamente al médico si se observan directamente en medios con agar y en un tubo con medio en caldo
microorganismos por microscopia o en cultivo enriquecido.
- Dado que también puede haber anaerobios en la muestra--> la muestra
no debe quedar expuesta al oxígeno
tracto
respiratorio sup
Aunque estas pruebas son muy específicas y están
SEGÚN LA BTA fácilmente disponibles, no presentan la suficiente
- La mayoría de las infecciones bacterianas de la faringe
- En caso de haber una sensibilidad para excluir con fiabilidad el diagnóstico de
están causadas por Streptococcus del grupo A.
seudomembrana (p. ej., faringitis estreptocócica A. En otras palabras, un
infecciones por C. diphtheriae), se ensayo negativo ha de ser confirmado por cultivo.
- Otras causantes de faringitis ->Corynebacterium
debe separar una porción y Otras infecciones del tracto respiratorio superior
diphtheriae, Bordetella pertussis, Neisseria gonorrhoeae,
remitirla para cultivo. pueden afectar a la epiglotis y a los senos. Se puede
Chlamydophila pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae.
- Los estreptococos del grupo A y precipitar una obstrucción completa de las vías
- Otras bacterias potencialmente patógenas -->
C. diphtheriae son muy resistentes respiratorias al intentar obtener un cultivo de la
Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae,
a la desecación; por tanto, no se epiglotis (sobre todo en niños); por ello, nunca se debe
Haemophilus influenzae, enterobacterias y Pseudomonas
requieren precauciones realizar este tipo de cultivos.
ae ruginosa, pueden estar presentes en la orofaringe pero
especiales en cuanto al transporte - S. pneumoniae, H. influenzae, Moraxella
rara vez causan faringitis.
de la muestra al laboratorio. catarrhalis, S. aureus y los anaerobios son los
- las muestras recogidas para el patógenos más frecuentes causantes de sinusitis.
PROCESOS
- SE DEBE utilizar una torunda de dacrón o de alginato de aislamiento de B. pertussis y de N.
gonorrhoeae se deben inocular El diagnóstico específico de una infección sinusal
calcio para recoger muestras faríngeas.
en medios de cultivo requiere
- SE DEBE obtener muestras de las áreas amigdalinas, de la
inmediatamente después de su 1) la aspiración directa del seno,
faringe posterior y de cualquier exudado o área
2) un transporte anaeróbico apropiado de la muestra

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PROCESOS - las muestras recogidas para el
- SE DEBE utilizar una torunda de dacrón o de alginato de aislamiento de B. pertussis y de N.
gonorrhoeae se deben inocular El diagnóstico específico de una infección sinusal
calcio para recoger muestras faríngeas.
en medios de cultivo requiere
- SE DEBE obtener muestras de las áreas amigdalinas, de la
inmediatamente después de su 1) la aspiración directa del seno,
faringe posterior y de cualquier exudado o área
obtención y antes de que se 2) un transporte anaeróbico apropiado de la muestra
ulcerativa.
remitan al laboratorio. al laboratorio (con empleo de un sistema que evite la
- Se debe evitar la contaminación de la muestra con
exposición de los anaerobios al oxígeno y a la
saliva --> las bacterias de la saliva pueden crecer en exceso - Las muestras obtenidas para el
aislamiento de C. pneumoniae y M. desecación)
o inhibir el crecimiento de los estreptococos del grupo A.
pneumoniae deben ser 3) un rápido procesamiento de la muestra.
- Se pueden detectar directamente los estreptococos del
grupo A en la muestra clínica por el empleo de transportadas en un medio de
transporte especial. IMPORTANTE El cultivo de la nasofaringe o de la
inmunoensayos en relación con el antígeno específico de
orofaringe carece de utilidad y no debe realizarse.
grupo.
Oido
tracto respiratorio
- Se precisa la timpanocentesis ( aspiración de líquido del oído medio) xra
inferior
conseguir diagnóstico específico de infecciones de oído medio
- Sin embargo, no es tan necesario, pq la mayoría de los patógenos más
Técnicas -> expectoración, la inducción con solución salina, la broncoscopia frecuentes que causan estas infecciones (S. pneumoniae, H. influenzae y M.
y la aspiración directa a través de la pared torácica. catarrhalis) pueden ser tratados de modo empírico
- Dado que las bacterias de las vías respiratorias superiores pueden - . Las infecciones del oído externo están causadas por lo general por P.
contaminar el esputo expectorado, se deben inspeccionar las muestras aeruginosa («oído de nadador») o S. aureus.
microscópicamente para valorar la magnitud de la contaminación oral. - La muestra apropiada que debe obtenerse para cultivo es un raspado del
área auditiva afectada.
- Las muestras que contengan muchas células epiteliales escamosas y en
OJO
las que no haya un predominio bacteriano en asociación con PMS no
deben ser procesadas para cultivo. La presencia de células epiteliales - Es difícil la recogida de muestras pq x lo general la muestra obtenida es
escamosas indica que la muestra ha quedado contaminada con la muy pequeña y puede haber en ella una cantidad relativamente pequeña
saliva. de oos.
- COMO EVITAR LA CONTAMINACION ? si se obtiene la muestra con - Las muestras de la superficie ocular deben ser recogidas con una torunda
broncoscopios especialmente diseñados o por medio de una aspiración antes de la aplicación de anestésicos tópicos, seguido de raspados
pulmonar directa. corneales cuando sea necesario.

Si se sospecha una infección pulmonar por anaerobios, hay que utilizar es tos - Las muestras intraoculares se recogen por aspiración directa del ojo.
procedimientos invasivos porque la contaminación de la muestra con - Se deben inocular los medios de cultivo cuando se recojan las muestras y
microbios del tracto respiratorio superior haría que la muestra perdiera todo antes de que se remitan al laboratorio.
su valor. - Aunque la mayoría de los patógenos oculares crecen rápidamente (p. ej.,
S. aureus, S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, Bacillus cereus),
- La mayoría de los patógenos del tracto respiratorio inferior crecen algunos pueden precisar una incubación prolongada (p. ej., estafilococos
rápidamente (en 2 o 3 días); sin embargo, algunas bacterias de coagulasa-negativos) o el empleo de medios de cultivos especiales (N.
crecimiento lento, como las micobacterias o nocardias, requieren una gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis)
ampliación de la incubación
-Se puede recoger por aspiración material de drenaje de infecciones de los
tejidos blandos.
Heridas, abscesos y - Si no se obtiene material de drenaje, se puede infundir una pequeña
tejidos cantidad de suero salino en el tejido y a continuación retirarla para
proceder a cultivarla.
- No se debe emplear solución salina que contenga un conservante
Con frecuencia, las heridas abiertas que drenan pueden estar contaminadas con oos
bactericida.
potencialmente patógenos que no guardan relación con el proceso infeccioso
- Se deben obtener los tejidos a partir de porciones representativas
específico.
del proceso infeccioso, y cuando sea posible se recogerán múltiples
-
muestras.
- IMPORTANTE -> recoger muestras de la profundidad de la herida después de haber
limpiado la superficie. - Se debe transportar la muestra de tejido en un recipiente estéril con
tapón de rosca, y se debe añadir solución salina para evitar la
- debe evitarse el empleo de una torunda porque es difícil obtener una muestra
desecación si se ha recogido una muestra de pequeño tamaño (p.
representativa sin contaminación con OOS que colonizan la superficie.
ej., muestra de biopsia).
-
Igualmente, se deben recoger aspirados a partir de un absceso cerrado tanto del - También debe remitirse una muestra de tejido para examen
-
histológico.
centro como de la pared del absceso.
- Dado que la recogida de muestras tisulares requiere procedimientos
- Recoger sencillamente pus de un absceso por lo general es improductivo
invasivos, se debe hacer todo lo posible para recoger la muestra
porque la mayoría de los OO se replican activamente en la base del absceso
apropiada y asegurarse de que se cultiva para todos los microorganismos
más que en el centro.
clínicamente significativos que puedan ser responsables de la infección.

Orina
- muestras que con mayor frecuencia se remiten para cultivo.
- Debido a que la uretra está colonizada por bacterias
potencialmente patógenas, debe desecharse la primera
porción de la orina recogida por micción o cateterización.
- patógenos del tracto urinario pueden crecer también en la
orina; por tanto, no debe producirse retraso en el transporte
de las muestras al laboratorio.
- Si no puede cultivarse inmediatamente la muestra, debe ser
refrigerada o colocada en un bolsa con conservante
bacteriostático de orina.
- Una vez se haya recibido la muestra en el laboratorio, se
inocula de 1 a 10 yl en cada medio de cultivo (por lo general
un medio de agar no selectivo y un medio de agar selectivo).
- Se hace para que se pueda cuantificar el # oo presentes en la
orina, lo cual es de utilidad para valorar la significación de un
aislado, aunque unas pequeñas cifras de microorganismos en
un paciente con piuria pueden ser clínicamente significativas.
- Son numerosas los procedimientos elaborados de cribado de
orina (p. ej., pruebas bioquímicas, tinciones microscópicas) y
se utilizan ampliamente; sin embargo, no se pueden
recomendar los procedimientos actuales porque son
Muestras genitales
A pesar de la variedad de bacterias que se asocian con ETS, la mayoría de los laboratorios se
concentran en la detección de N. gonorrhoeae y C. tra chomatis.
• Tradicionalmente SE inocula la muestra en un sistema de cultivo selectivo en relación con
estos organismos.
• se trata de un proceso lento, que lleva 2 o más días para obtener un cultivo positivo e
incluso más tiempo en relación con la identificación definitiva de los aislados.
• Se ha observado también que los cultivos son insensibles porque los OO son
extraordinariamente lábiles y se mueren rápidamente durante el tránsito en condiciones
subóptimas.
• Por estas razones, se utiliza en la actualidad una variedad de métodos sin cultivo.
• Los métodos más populares -> procedimientos de amplificación de ácidos nucleicos (p. ej.,
amplificación de secuencias de ácido desoxirribonucleico [ADN] específicas de especie por la
reacción en cadena de la polimerasa u otros métodos) .
• - puede producirse una contaminación cruzada si no se controlan cuidadosamente los
procedimientos de la prueba.
• Si se utiliza la orina para estas pruebas, se debe analizar la primera porción de la orina
miccionada y no la porción media del chorro de orina, como se emplea en relación con el
cultivo de orina.
La otra bacteria importante -> Treponema pallidum, el agente causal de la sífilis. no puede ser

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 un paciente con piuria pueden ser clínicamente significativas.
- Son numerosas los procedimientos elaborados de cribado de
orina (p. ej., pruebas bioquímicas, tinciones microscópicas) y
se utilizan ampliamente; sin embargo, no se pueden
recomendar los procedimientos actuales porque son
invariablemente insensibles para detectar una bacteriuria de
bajo grado clínicamente significativa.
Muestras fecales
• Una amplia variedad de bacterias puede producir infecciones
gastrointestinales. Para poder aislar estas bacterias en cultivo ha
de recogerse una muestra fecal adecuada
• No deben remitirse muestras rectales obtenidas con torunda
porque han de inocularse múltiples medios selectivos para aislar
los diversos patógenos posibles. La cantidad de heces recogida
con una torunda sería insuficiente.
• Las muestras deben ser recogidas en un recipiente amplio y
limpio y luego ser transferidas a un recipiente impermeable muy
bien cerrado.
• Se deben transportar Rápidamente al lab para evitar cambios
ácidos en las heces (causados por el metabolismo bacteriano),
que son tóxicos para algunos microorganismos (p. ej., Shigella).
• Si se prevé un retraso en el envío, las heces deben ser mezcladas
con un conservante, como amortiguador fosfato mezclado con
glicerol o medio de transporte de Cary-Blair.
• Es importante notificar al laboratorio la sospecha de un
patógeno intestinal particular XRA seleccionar el medio de cultivo
especializado apropiado.
• Si se utiliza la orina para estas pruebas, se debe analizar la primera porción de la orina
miccionada y no la porción media del chorro de orina, como se emplea en relación con el
cultivo de orina.
La otra bacteria importante -> Treponema pallidum, el agente causal de la sífilis. no puede ser
cultivado en el laboratorio clínico, SE DIAGNOSTICA X la microscopia o de la serología. Debe
examinarse CON la microscopia de campo oscuro porque el microorganismo es demasiado fino.
Además, se muere rápidamente cuando se expone al aire o a condiciones de desecación; por
consiguiente, ha de efectuarse el examen En el momento de la recogida de la muestra.
• Por ejemplo, Escherichia coli enterotoxigénica puede crecer en medios de
cultivo de rutina pero no sería fácilmente distinguible de E. coli no
patógeno. Igualmente, no se esperaría la presencia de otros
microorganismos en una muestra fecal porque la enfermedad está
causada por la toxina producida en el alimento y no por el crecimiento del
microorganismo en el tracto gastrointestinal (p. ej., S. aureus, B. cereus).
• Clostridium difficile es una causa significativa de enfermedad
gastrointestinal asociada a antibióticos. Aunque puede cultivarse el OO a
partir de muestras fecales, si se remiten con celeridad al laboratorio, el
modo más específico para diagnosticar la infección es por la detección de
las toxinas de C. difficile en extractos fecales responsables de la
enfermedad o de los genes que codifican estas toxinas.
• Dado que son muchas las bacterias, tanto patógenas como no patógenas,
que se hallan presentes en las muestras fecales, con frecuencia el
aislamiento y la identificación del patógeno llevan más de 3 días. Por ello,
se utilizan los coprocultivos para confirmar el diagnóstico clínico, y el
tratamiento, en caso de estar indicado, no debe retrasarse a la espera de
los resultados de los cultivos.

Pruebas de sensibilidad

DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN antimicrobiana

BACTERIANAS
Son 5 procedimientos
1) microscopia
2) detección de antígenos bacterianos
3) detección de ácidos nucleicos bacterianos específicos
4) cultivo
5) detección de la respuesta de anticuerpos a las bacterias (serología).
• Aunque muchos microorganismos pueden ser identificados de modo
específico por una variedad de técnicas, el procedimiento más común
utilizado en los laboratorios diagnósticos es la identificación de un organismo
aislado en cultivo por pruebas bioquímicas.
• En los grandes laboratorios de los hospitales docentes y en los laboratorios de
referencia,los procedimientos han sido sustituidos por la secuenciación de
genes bacterianos específicos o por empleo de herramientas proteómicas,
como la espectrometría de masas, para identificar los microorganismos.
Es importante -> el tratamiento antimicrobiano empírico puede mejorarse a tenor
de la identificación preliminar de un microorganismo con empleo de la morfología
microscópica y macroscópica y de pruebas bioquímicas seleccionadas y rápidas.
Los resultados son valiosos para seleccionar los agentes quimioterápicos
activos frente al oo infeccioso.
- las pruebas in vitro son sencillamente una determinación del efecto del
antibiótico frente al microorganismo en unas condiciones específicas.
- La selección de un antibiótico y el desenlace del paciente se ven influidos
por una variedad de factores interrelacionados -> las propiedades
farmacocinéticas de los antibióticos, la toxicidad del fármaco, la
enfermedad clínica y el estado médico general del paciente. Así, algunos
oo que son «sensibles» a un antibiótico persistirán en la infección, y
algunos oo que son «resistentes» a un antibiótico serán eliminados.
En el laboratorio clínico se llevan a cabo dos formasd pruebas de sensibilidad
antimicrobiana:
- pruebas de dilución en caldo, se preparan diluciones seriadas de un
antibiótico en un medio nutriente y a continuación se inocula con una
concentración estandarizada de la bacteria en estudio. Después de una
noche de incubación, la mínima concentración de antibiótico capaz de
inhibir el crecimiento de las bacterias recibe la denominación de
concentración mínima inhibidora (CMI).
- las pruebas de difusión en agar, se vierte sobre la superficie del medio
con agar una concentración estandarizada de bacterias y a
continuación se colocan sobre la superficie de agar discos o tiras de
papel impregnados con antibióticos. Después de una noche de incubación
se observa una zona de inhibición del crecimiento que rodea los discos o
las tiras de papel. El tamaño del diámetro de inhibición se corresponde
con la actividad del antibiótico; cuanto más sensible sea el oo al
antibiótico, mayor es el diámetro de inhibición del crecimiento q
corresponde al valor de la CMI.
- Las pruebas de dilución en caldo fueron llevadas a cabo originalmente
en tubos de ensayo y eran muy laboriosas. En la actualidad se dispone
de sistemas preparados comercialmente en donde las diluciones de
antibióticos se preparan en bandejas de microtitulación preparadas, y la
inoculación de las bandejas y la interpretación de las CMI están
automatizadas.
- Las pruebas de difusión son laboriosas y la interpretación del tamaño del
área de inhibición puede ser subjetiva; sin embargo, la ventajas de estas
pruebas es que puede probarse prácticamente cualquier antibiótico.
- La capacidad de ambos métodos de sensibilidad para predecir la
respuesta clínica a un antibiótico es equivalente; por tanto, la selección
de las pruebas viene determinada por consideraciones de tipo práctico

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