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Reporte SS
Reporte SS
DE EXTRACTOS VEGETALES Y
COMPUESTOS ORGANICOS SINTETICOS
1. Introducción
2. Metodología
2.1. Preparación de extractos
2.1.1. Blueberry
El proceso de obtención de la muestra de blueberry para su posterior análisis se lleva a cabo
siguiendo los siguientes pasos:
2.1.2. Muicle
Procedimiento para la obtención del polvo de muicle:
2.1.3. Ciruela
Obtención de polvo de ciruela:
2.1.4. Guayaba
2.2. Preparación de compuestos sintéticos
2.2.1. Peso de los compuestos
Se utiliza una balanza analítica para pesar cada compuesto y registrar su peso neto. Con los
pesos registrados, se transfiere cada compuesto a un tubo Eppendorf ámbar designado para
su posterior manipulación y trabajo.
Es importante tener en cuenta que la solución de trabajo solo es válida para su uso durante
un día. Después de ese período, se recomienda preparar una nueva solución.
Las concentraciones que se utilizarán en los tubos son las siguientes: 0, 25, 50, 200, 400,
600, 800 y 1000 µM. En cada uno de los 8 tubos eppendorf ámbar, se preparará una
solución con una concentración diferente utilizando los valores mencionados anteriormente.
Estos tubos contendrán una única muestra de cada concentración.
0 µL 1000 µL
de trolox de metanol
Representación:
Se agregan los volúmenes de
acuerdo a los valores de la tabla.
Para preparar los 24 tubos de las tres réplicas, el procedimiento consiste en tomar los 8
tubos que contienen las concentraciones previamente preparadas. A cada uno de estos
tubos, se le añade 100 µL de la concentración correspondiente. Esto significa que cada una
de las 8 concentraciones se agregará tres veces, una vez en cada réplica (A, B, C).
Para completar el volumen total en cada tubo, se agregan 1900 µL de solución de trabajo.
Este volumen asegurará que cada tubo tenga un total de 2000 µL de contenido.
Representación:
A B C
100 µL
de 1900 µL
concentrac
ión (0µM),
+ de solución
Una vez que han transcurrido 15 minutos desde el iniciodede la reacción, se procede a servir
trabajo.
de acuerdo
las muestras en celdas para medir la absorbancia en el espectrofotómetro. Este instrumento
permite cuantificar la cantidad de luz absorbida por las muestras a través de un rango de
longitudes de onda específicas. Durante este proceso, se registran cuidadosamente las
absorbancias obtenidas de cada muestra ya que estos datos serán posteriormente utilizados
para reportar los resultados del experimento. Se sigue utilizando como blanco 1000 µL de
metanol.
Para llevar a cabo las diluciones, se utilizan tubos Eppendorf ámbar. Se necesitarán 2 tubos
para las dilucioes. En cada uno de estos tubos, se agrega 900 µL de etanol, que actuará
como el agente diluyente. Posteriormente, se añaden 100 µL de la concentración
correspondiente al tubo, es decir, el extracto vegetal que se está evaluando. Este proceso se
repite para cada una de las concentraciones.
100 µL 100 µL
1:10 1:100
Concentra
ción
de extracto 900 µL de
metanol a realizar dos réplicas,
Una vez obtenidas las diluciones requeridas, se procede
denominadas A y B, tanto de las concentraciones originales como de las diluciones
preparadas. Para llevar a cabo esto, se utilizan 6 tubos Eppendorf ámbar.
En cada uno de estos tubos, se añaden 100 µL de las muestras trabajadas previamente, ya
sea las concentraciones originales o las diluciones. Posteriormente, se agrega 1900 µL de
solución de trabajo.
100 µL A B
Muestra
1900 µL de
solución de
Después de haber transcurrido 15 minutos desde el inicio de la reacción, se lleva a cabo el
paso siguiente, que consiste en servir las muestras en celdas para medir la absorbancia. Para
establecer un punto de referencia, se utiliza una cantidad de 1000 µL de metanol. Cada
muestra se coloca en una celda y se mide su absorbancia en relación con el blanco de
metanol, durante este proceso se registra la absorbancia obtenida de cada muestra.
100 µL A B
Concentra
cióntranscurrir
Tras de 15 minutos desde el inicio de la reacción, se procede a realizar la lectura de
muestras. Con el fin de establecer puntos de1900
compuesto
las µL de se utiliza un blanco que consiste
referencia,
sintético. solución de
en 1000 µL de metanol. Además del blanco se utilizan dos controles para el análisis, para el
control negativo (-), se emplean 100 µL de DMSO junto con 1900 µL del radical DPPH.
Por otro lado, para el control positivo (+), se utiliza una cantidad de 100 µL de trolox en
combinación con 1900 µL del radical DPPH. Establecido todos los controles se toma
lectura de la absorbancia de cada muestra.
3. Resultados
Concentraciones µM A B
0 1.068 1.066
Tabla 1: Concentraciones de
100 0.934 0.927
trolox.
200 0.817 0.803
400 0.569 0.611
600 0.320 0.311
800 0.118 0.098
1000 0.079 0.088
Curva de trolox
1.2
1
Longitud de onda (abs)
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 200 400 600 800 1000 1200
Concentraciones de Trolox
ac ti v i d ad anti ox i d an t e ( g u y ab a)
1.2
0.931 0.971 0.935 0.972
1
Concentracione 0.91 0.899
Longitud ded onda (ABS)
s
0.8 (A) (B) (C)
1:10 0.589 0.589 0.570
0.57 0.559 0.559
0.6
1:100 0.931 0.910 0.899
1:1000
0.4 0.971 0.935 0.972
0.2
0
1^10 (A) 1^100 (A) 1^1000 1^10 (B) 1^100 (B) 1^1000 1^10 C 1^100 C 1^1000 C
(A) (B)
Concentraciones
Concentracione
s A B
Madre 0.881 0.862
1:10 1.075 1.05
1:100 1.095 1.084
A c ti v i d ad A n ti o x i d an t e ( B l u e be r r y )
Longitud de onda (Abs)
Ta
Concentraciones
0.8
0.6
0.2
0
Madre 1^10 (A) 1^100 (A) Madre 1^10 (B) 1^100 (B)
Concentraciones
Concentraciones del extracto de (Muicle).
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
Madre 1^10 1^100 1^1000 Madre 1^10 1^100 1^1000 Madre 1^10 C 1^100 1^1000
(A) (A) (A) (B) (B) (B) C C
Conceentraciones
Concentracione
s (A) (B) (C)
Madre 0.184 0.139 0.140
1:10 0.789 0.768 0.761
1:100 0.929 0.910 0.930
1:1000 0.939 0.942 0.937
1.4
1.2
1 f(x) = 0.0197175438596491 x + 0.752561403508772
R² = 0.144692680098084
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
MMT-8 1.028 15
MMT-9 1.039 17.39130435
MMT-10 1.051 20
MMT-11 1.039 17.39130435
MMT-12 1.122 35.43478261
MMT-13 0.464 -107.608696
MMT-14 1.053 20.43478261
MMT-15 1.040 17.60869565
MMT-16 1.039 17.39130435
MMT-17 1.436 103.6956522
MMT-18 0.876 -18.0434783
Grafica 6 curva de compuestos orgánicos
DPPH T
150
100
50
Eq de trolox
0
s 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 1 2 3 4 5 6 7 8
s to MT- MT- MT- MT- MT- MT- MT- MT- MT- T-1 T-1 T-1 T-1 T-1 T-1 T-1 T-1 T-1
pue M M M M M M M M M M M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
M
m-50
Co
-100
-150
Concentraciones µM A B
0 0.655 0.671
100 0.614 0.625
200 0.510 0.528
400 0.336 0.347
600 0.294 0.279
800 0.092 0.119
1000 0.050 0.052
Curva de trolox
0.8
0.7
Longitud de onda (ABS)
Concentraciones de Trolox
A c ti v i dad anti o x i d an t e ( M u i c l e )
0.7
Longitud de onda (ABS)
0.622 0.64
0.6
0.511 0.489
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.023Grafica0.021
9 Actividad antioxidante del Mucile.
0
Madre (A) Madre (B) 1^10 (A) 1^10 (B) 1^100 (A) 1^100 (B)
Tabla 9:
Concentraciones
A c ti v i d a d a n ti o x i d a n t e ( m o r a a z u l )
0.8
0.7
Longitud de onda (ABS)
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
Madre (A) Madre (B) 1^10 (A) 1^10 (B) 1^100 (A) 1^100 (B)
-0.1
Tabla 11:
Concentraciones, controles y actividad antioxidante de la Guayaba por (ABTS)
Guayaba
Control (-) 0.643
Control (+) 0.08
Acti v i dad anti o x id an t e (guay aba)
Madre (A) 0.061 0.7
Longitud de onda (ABS)
Abts
0.8
0.7
0.6
Longitud de onda (ABS)
2000
1000
Eq de trolox
0
MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT MMT
-1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 -10 -11 -12 -13 -14 -15 -16 -17 -18
-1000
-2000
-3000
-4000
Grafica 14 Actividad antioxidante de compuestos orgánicos sintéticos.
3. Bibliografia