UNIVERSIDAD DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
Y BIOQUÍMICA I

MACROMOLÉCULAS DE LA LEVADURA

El propósito de esta práctica es extraer e identificar cualitativamente las principales clases

de macromoléculas presentes en las células de la levadura de panadería (Saccharomyces
spp): proteínas, ácidos nucléicos y glucógeno.

Materiales y reactivos:

Levadura de panadería Arena lavada

Ácido tricloroacético al 5% (p/v) Mortero
Alcohol etílico del 96% Cuchara
Reactivo de yodo (lugol) Pipetas de 1.5 y 10 ml
Solución de almidón al 0.5% Probetas de 10 y 100 ml
Cloruro de sodio al 10% Centrífuga
Cloruro de sodio 0.15 M (0.85%) Tubos para centrífuga
Reactivo de orcinol Tubos de ensayo
Amortiguador salino (NaCl 0.15M, citrato Gradilla
de sodio 0.015M, pH 7.0) Baño de hielo
Solución patrón de ADN (100 mg/litro) Baño de agua hirviendo
Solución patrón de ARN (100 mg/litro) Varilla de vidrio
Sulfato cúprico 0.1 M Pinzas para tubos de ensayo
Hidróxido de sodio 10 M

Procedimientos:

1. En un mortero coloque el equivalente a una cucharadita a ras de levadura de

panadería. Agregue arena lavada (lo que quepa en la punta de la cucharita).
Triture cuidadosamente por unos cinco minutos.
Agregue 15 ml de ácido tricloroacético al 5% y siga triturando la levadura por tres
minutos más. Deje que la arena se asiente y decante la suspensión sobrenadante
dentro de un tubo de centrífuga.
Centrifugue a 3000 r.p.m. por 5 minutos (equilibre el peso de los tubos antes de
centrifugar).
El sedimento deberá contener ácidos nucléicos y proteínas. El sobrenadante
deberá contener glucógeno.

¿Cuál es el fundamento del uso del ácido tricloroacético?

2. Decante el sobrenadante en otro tubo (coloque el tubo con el sedimento sobre el
baño de hielo).
Precipite el glucógeno añadiendo al volumen del sobrenadante dos volúmenes de
alcohol etílico del 96% frio, agitando y manteniendo el recipiente en el baño de
hielo.
Deje reposar por 5 minutos.

¿Cuál es el fundamento del uso del alcohol etílico?

Observe si se presenta algún cambio en la apariencia del sobrenadante.

Traslade la suspensión a un tubo de centrífuga y centrifugue a 5000 r.p.m. por 3
minutos. ddd
Descarta el sobrenadante y observe las características del sedimento.
Disuelva el sedimento en 1 ml de agua destilada. En otro tubo de ensayo coloque
1 ml de agua destilada sola y en un tercero, 1 ml de solución de almidón al 0.5%.
Agregue a cada uno de los tres tubos 1 ml de reactivo de yodo. Compare la
coloración. Se identificó positivamente la presencia de glucógeno. Explique.

3. Ahora, tome el sedimento de ácidos nucléicos y proteínas y agregue 15 ml de

cloruro de sodio al 10%, agitando cuidadosamente.
Caliente la suspensión resultante por 10 minutos en un baño de agua hirviendo.
Deje enfriar y transfiera a un tubo de centrífuga.
Centrifugue a 5000 r.p.m. por 3 minutos.
El sedimento deberá contener las proteínas y el sobrenadante, los ácidos
nucléicos.
Decante el sobrenadante en otro tubo de ensayo.
Deje el precipitado proteico en el baño de hielo.
¿Cuál es el fundamento del uso del cloruro de sodio al 10% y del calentamiento en el
baño de agua hirviendo?

4. Precipite los ácidos nucléicos añadiendo 2 volúmenes de alcohol etílico del 96%,
frío, al volumen del sobrenadante, agitando y manteniendo el tubo en el baño de
hielo.
Deje reposar por 5 minutos. Observe si se presentan cambios de apariencia.
Centrifugue a 5000 r.p.m. por 3 minutos.
Descarte el sobrenadante. Observe las características del sedimento.
Disuelva el sedimento en 2 ml de amortiguador salino de pH 7.0.
En sendos tubos de ensayo coloque 2 ml de amortiguador salino solo, 2 ml de
solución patrón de ADN y 2 ml de solución patrón de ARN.
 Agregue a cada uno de los cuatro tubos, 3 ml del reactivo de orcinol. Caliente en
un baño de agua hirviendo por unos 10 minutos o hasta que aparezca un color
verde intenso en alguno o algunos de los tubos.
¿El resultado permitió la identificación positiva de ácidos nucléicos? Explique.

¿Cuál es el fundamento químico de la reacción con el orcinol?

5. Tome una pequeña porción del sedimento de proteínas y resuspéndalo en 2 ml de

la solución de cloruro de sodio 0.15 molar.
En otro tubo de ensayo coloque 2 ml de la solución salina 0.15 molar sola.
Añada a cada tubo 1 ml de la solución de sulfato cúprico 0.1 molar y 2 ml de
hidróxido de sodio 10 molar.
Mezcle bien y observe si se presentan cambios de coloración. La prueba, ¿resultó
positiva para la presencia de proteínas?

Esta prueba para proteínas se denomina de Biuret, ¿cuál es el fundamento químico de

esta reacción?

Es conveniente que haga un flujograma que esquematice los procedimientos de esta

práctica. El flujograma debe presentarse al comienzo de la práctica, anexarse al reporte e
incluirlo en el informe.

Bibliografía:

Plummer, D.T. 1978. Introducción a la Bioquímica práctica. McGraw-Hill, Bogotá.

Rendina, G. 1974. Técnicas de Bioquímica aplicada. Interamericana. México.
Alemany, M y Font, S. 1983. Prácticas de Bioquímica. Alhambra. Madrid.
Seguramente usted necesitará la consulta de textos de bioquímica y de química
orgánica para averiguar los fundamentos de las diversas reacciones.
UNIVERSIDAD DEL VALLE
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA
CELULAR Y BIOQUÍMICA I

REPORTE DE MACROMOLÉCULAS DE LA LEVADURA

Fecha_________
Asistentes (favor anotar únicamente a los que asistan a la práctica):

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Resultados:

Punto 1. Describa la apariencia del triturado, del sedimento y del sobrenadante:

Producto Apariencia
Triturado
Sedimento
Sobrenadante

Punto 2.

Tratamiento o producto Apariencia o resultado

Añadir 2 volúmenes de etanol del 96%
Sedimento después de centrifugar
Añadir 1 ml de reactivo de yodo Muestra: __________________________
Agua sola: ________________________
Almidón:
¿Se identificó la presencia del
glucógeno? Explique.

Punto 3.

Tratamiento o producto Apariencia o resultado

Calentamiento de la suspensión
Sedimento después de centrifugar
Sobrenadante
Punto 4.

Tratamiento o producto Apariencia o resultado

Añadir 2 volúmenes de etanol del 96%
Sedimento después de centrifugar
Añadir 3 ml del reactivo de orcinol y Muestra: _________________________
calentamiento Blanco: __________________________
Patrón ADN: ______________________
Patrón ARN:
¿Se identificó la presencia de ácidos
nucléicos? Explique.

¿Cuál podría ser la concentración aproximada del ácido nucléico? ¿Mayor o menor de
1.00 mg/litro?
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Punto 5.

Tratamiento o producto Apariencia o resultado

Añadir 1 ml de sulfato cúprico 0.1 M Muestra: _________________________
Blanco:
Añadir 2 ml de hidróxido de sodio 10 M Muestra: _________________________
Blanco.
¿Se identificó la presencia de
proteínas? Explique.

De acuerdo con sus observaciones en esta práctica, indique el orden de

abundancia relativa de los componentes moleculares analizados en el extracto de
levadura:

_____________________ > ____________________ > __________________

Este resultado, ¿corresponde a lo esperado? Explique. _____________________

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Otras observaciones y comentarios que desee agregar: _____________________

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