I-Clase - Metabolismo de CHOS-HC

Bioquímica I– MB-159
Heidy Cabrera MSc. ; Olinda Núñez MSc.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
BIOQUÍMICA CLÍNICA I – MB-159
DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA
• Describir el metabolismo de glucosa
• Describir la regulación hormonal de glucosa
• Enumerar las principales patologías asociadas al metabolismo de glucosa
• Describir las pruebas de laboratorio que se utilizan para el diagnóstico,
monitoreo y pronóstico de estas patologías.
• Objetivo del metabolismo
de glucosa: proveer energía
para la célula.
Fuentes de glucosa:
• Dieta (azúcares simples,
compuestos, polisacáridos)
• Degradación de triglicéridos
• Degradación de
aminoácidos glucogénicos
• La glucosa también es precursor de:
GLUCOSA
Triglicéridos
Dependiendo de la célula diana
Glucosa circulante en sangre

(Glicemia)
• Ingreso de la glucosa a través de proteínas
transportadoras GLUT o SGLT
Díaz D. y Burgos L., 2002.
• Mecanismo de liberación de innsulina por el
páncreas
Fuente: Fernández Lorenzo JR et al.
Preproinsulina 110aa proinsulina 86 aa insulina activa 56 aa + péptido C
RER A. Golgi Gránulos de secreción
Laboratorio:
medición de insulina en suero (evaluar niveles)
medición de péptido C: evaluar la síntesis de insulina.
¿En qué células sucede?
Células que contengan receptor para
insulina.
Insulina regulará el transportador
GLUT4
• Músculo esquelético
• Músculo cardiaco
• Tejido adiposo
• Endometrio
CAPTACIÓN DE GLUCOSA
INSULINA
Mecanismo de acción de IR
insulina en la entrada de IR
GLUT4
glucosa a través de GLUT4 p
p
IRS-1
PI3K
p GLUCOSA-6-P
p
PDK1 AKT p
AS160 p
OTRAS
VÍAS
AMPK p
GLUT4
GLUT4
Modificado de Cabrera-Cruz et al.
NÚCLEO
AJPENDO. 2019
REGULACIÓN
Tejido Músculo Músculo
adiposo esquelético cardiaco
Cerebro Fibroblastos Leucocitos…
• Pruebas de laboratorio para evaluar el metabolismo de glucosa
Diagnóstico - monitoreo y control
• Cuantificación de glucosa sérica: método de glucosa oxidasa; método de

hexoquinasa.
• Cuantificación de hemoglobina glicosilada
• Cuantificación de glucosa urinaria.
• Cuantificación de insulina sérica.
• Detección de cuerpos cetónicos en orina.
• Determinación de péptido C.
• Glucosa oxidasa • Hexoquinasa
• Enzima GOP es altamente específica • Hexoquinasa es específica para α-D-
para β-D-Glucosa Glucosa y β-D-Glucosa.
• En solución 36% es α-D-Glucosa y • Segunda reacción es específica y no
64% es β-D-Glucosa. presenta interferencias de reacción
• La segunda reacción es inespecífica. cruzada.
• Ácido ascórbico, bilirrubina, • Interfieren bilirrubina, hemoglobina y
glutationa compiten con el sustrato lipemia en cantidades elevadas.
en la segunda reacción. • Metabolitos en la orina presentan
• Metabolitos de la orina presentan menos interferencias en comparación
interferencias significativas. al método GOP
• Glucosa en suero o plasma • Glucosa en Orina
Interferencias en la muestra:
• Ayuno mínimo: 8 h • Contenedor contaminado
• Ayuno máximo: 12 h con agentes oxidantes (cloro,
detergentes)
• Valor de referencia: 70-99 mg/dL.
• Niveles elevado de cetonas,
• Glicólisis disminuye los niveles de gravedad específica > 1.040
glucosa 5-7% por hora, a T°ambiente. causa falsos positivos.
• Fluoruro de sodio como • Muestras de orina analizadas
anticoagulante previene la glicólisis. a T°< 12 °C causa
disminución de la reacción.
• Hemoglobina A1c:
Formada por la
glicosilación con
glucosa en el amino
terminal de valina en
la cadena β de la
hemoglobina.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Vida media del eritrocito = vida media de HbA1c

HbA1c representa el promedio de las glicemias ayunas y post
prandial de los últimos 3 meses.
• Otras proteínas como fructosamina y albúmina

también sufren glicosilaciones dependientes de la
los carbohidratos circulantes en sangre y son otra
opción para determinación en el laboratorio.
• La tasa de formación de HbA1c refleja los
niveles de glucosa de los últimos 3 meses.
• Valor de referencia: <5.6%
Sin embargo, los niveles de HbA1c están estrechamente Promedio de glucosa estimada: (mg/dL) = 28.7 ×
relacionados con los niveles circulantes de glucosa en HbA1c – 46.7
tiempo real.
Importante al validar resultados pero no es una regla.
Adaptado de Bishop. Clinical Biochemistry, correlations and techiniques. 7th Edition.
• Muestra: sangre total tomada con EDTA. Otros anticoagulantes pueden ser utilizados
según el método utilizado y las indicaciones del fabricante.
• Variabilidad biológica: después de los 30 años, la HbA1c aumenta 0.1% por década.
Afroamericanos e hispanos presentan valores ligeramente mayores dentro del valor
de referencia.
• Valores <4% o >15% sospechar probable interferencia.
Para actualizarse constantemente sobre HbA1c visitar: http://www.ngsp.org/
1. Eritropoyesis
 : Deficiencia Fe, Vit B12, eritropoyesis disminuida.
 : Administración eritropoyetina, Fe, B12, reticulocitosis, enfermedad hepática crónica.
2. Hemoglobinopatías (S,C,D,E); Hb F, Metahemoglobina, carboxihemoglobina.
- En pacientes diabéticos con diálisis, la medición de HbA1c es sub-óptima para control glicémico.
3. Glicosilación
: alcoholismo, enfermedad renal crónica.
: aspirina, vit C y E
4. Destrucción eritrocitaria
: incremento de vida media de GR—esplenectomía
: reducción de vida media de GR---- Hemoglobinopatías, artritis reumatoide, medicamentos como antiretrovirales.
5. Interferencia técnica
: hiperbilirrubinemia, alcoholismo, opiáceos
: hipertrigliceridemia.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Fuente: Vanegas M. 2018

Muy utilizado en HON.
Muy utilizado en HON.
Aumentando su
implementación
en HON. Actualmente es el método recomendado por expertos.
Adaptado de Bishop. Clinical Biochemistry, correlations and techiniques. 7th Edition.
• Se basa en la separación de las Hb de acuerdo a su carga y su
estabilidad/labilidad.
• Los cambios de pH del protocolo inducen la selección y separación de HbA1c.
• Al depender del pH, los cambios de T° afectan el desempeño del método.
• Hemoglobina S, C, D, E pueden tener igual patrón de elución que HbA1c.
• Se basa en la unión del grupo glicado con la matriz de boronato, que
permitirán una separación por afinidad.
• Otras hemoglobinas no interfieren.
• No es T° dependiente.
• No diferencia los tipos de Hb glicosiladas.
• Uno de los métodos mas utilizados en los últimos 5 años.
• Es el único método que permite separar los distintos tipos de Hb
glicosiladas.
• Actualmente es el método recomendado por el National
Glycohemoglobin Standarization Program (NGSP).
%HbA1c= área sHbA1c/Área total de HbA La identificación y la separación se basan considerando el
tiempo de retención que es específico para cada variante de
la hemoglobina.
• Principales cetonas:
• β-hidroxibutirato (78%)
• Acetoacetato (20%)
• Acetona (2%)
• La mayoría de los
métodos detectan
acetoacetato.
Método: Nitroprusiato de sodio Método: enzimático
• Químico colorimétrico • Enzimático-UV
Nitroprusiato reacciona con
acetoacetato en medio alcalino para Mide la formación de NADH en
formar un cromógeno púrpura. presencia de 3- β-hidroxibutirato
Si se añade glicina a la muestra deshidrogenasa.
acetona también reaccionará. Método mas común en los equipos
β-hidroxibutirato no reacciona en automatizados.
este método.
• Grupo de enfermedades metabólicas caracterizado por hiperglicemia por
defectos en la secreción de la insulina, mecanismo de acción de la
insulina o ambas.
Harding, J.L., Pavkov, M.E., Magliano, D.J. et al. Diabetologia (2019) 62: 3. https://doi.org/10.1007/s00125-
018-4711-2
Organización mundial de la salud 2017
Glovaci, D., Fan, W. & Wong, N.D. Curr Cardiol Rep (2019) 21: 21.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA https://doi.org/10.1007/s11886-019-1107-y
Un problema de salud pública
3. Diabetes Mellitus 4. Diabetes por otras
1. Diabetes tipo 1 2. Diabetes tipo 2
Gestacional (DMG) causas
• Destrucción de • Pérdida progresiva • Diabetes que se • MODY, fibrosis
células β del de la secreción de diagnostica en el quística,
páncreas con insulina segundo o tercer pancreatitis,
déficit absoluto de generalmente trimestre del diabetes inducida
insulina acompañada de embarazo por medicamentos
resistencia a la
insulina
• Linfocitos B producen autoanticuerpos contra los islotes de Langerhans,
destruyendo la célula beta; esto impide la producción de insulina.
• Principalmente hereditaria, se puede manifestar en la • Los pacientes no producen insulina adecuadamente, lo que genera
edad temprana hiperglicemia. Los pacientes DM tipo I son INSULINODEPENDIENTES.
• Los pacientes DM-I pueden producir
uno o más anticuerpos en el desarrollo
de la enfermedad, dependiendo del
tipo de anticuerpo y de la cantidad de
anticuerpos distintos producidos, la
destrucción del páncreas puede ser de
Leve- moderada – severa.
Faccinetti et al. Detección y caracterización de autoanticuerpos
anti-ZnT8 en pacientes argentinos con diabetes mellitus tipo 1.
2016
• La condición de Obesidad es uno
de los factores más importantes
en la generación de inflamación y
estrés oxidativo.
• Esto genera un estado de
resistencia a la insulina en los
tejidos diana.
• Las células no responden a la
insulina y la glucosa no es
captada.
• En DM-II se presenta
hiperglicemia e hiperinsulinemia.
• Los pacientes DM-II utilizan
principalmente fármacos
hipoglucemiantes distintos a
insulina, por ejemplo:
Metformina.
Tríada clásica de la Diabetes Mellitus : PPP – Poliuria, Polidipsia, Polifagia.
Hallazgos de laboratorio DM-I DM-II
Hiperglicemia ++ +++
Hiperinsulinemia Raro +++
HbA1c >6,5% >6.5%
Péptido C Generalmente ++
indetectable
Anticuerpos ICA, IA2, GAD +++ Raro
Dislipidemia Generalmente +++
ausente
Cetoacidosis +++ (mal control) +
Prueba Condiciones Valor de Criterios diagnóstico
referencia
Glucosa en ayunas en 8-10 horas de ayuno 70-99 mg/dL 100-125 mg/dL – Prediabetes.
suero >126 mg/dL – Diabetes mellitus
Glucosa al azar en suero Cualquier hora >200 mg/dL – diabetes + 1 PPP
Consideraciones
• Muestra: suero (tubo tapón rojo). Separar el suero en menos de 1 hora para evitar glicólisis. Plasma
obtenido con fluoruro de sodio (tapón gris)
• Prueba de tolerancia oral a la glucosa
(PTOG)
• Evalúa la respuesta del páncreas para regular la
hiperglicemia en presencia de a una sobrecarga de
glucosa.
1. Paciente se debe presentar en ayuno de 8-12 h.
2. Tomar muestra en ayunas.
3. Se le administra al paciente una sobrecarga de
glucosa de 75 g para adultos y 1.75 g/kg peso en
niños.
4. Tomar muestra a la 1 hora y luego toma de muestra
a las 2 horas post sobrecarga.
Trutol – glucosa - dextrosa
Factores a considerar: Muestra en
• No restringir la alimentación los tres días previos al ayunas
examen.
• 8 a 12 horas de ayuno. Administrar
• No medicamentos el día de la prueba 75g de glucosa
• El paciente debe beberse el trutol sentado y
durante un lapso de 5 minutos.
• Durante el tiempo de espera después de la carga de Muestra 1ra h
glucosa el paciente debe permanecer en reposo.
• A los menores de 18 años se les administra 1,75 g
de glucosa por kg de peso, con 75 g como máximo
Muestra 2da h
Prueba Valor de referencia Criterios diagnóstico DM
en adultos ADA, 2019
Glucosa en ayunas en suero 70-99 mg/dL 100-125 mg/dL – Prediabetes.
>126 mg/dL – Diabetes mellitus
Glucosa al azar en suero <200 mg/dL >200 mg/dL + síntomas PPP – diabetes mellitus
2da hora de la PTOG <140 mg/dL 140-199 mg/dL – Prediabetes.
>200 mg/dL – Diabetes mellitus
HbA1c <5.6% 5.7-6.4% - Prediabetes
>6.5% - Diabetes mellitus
ADA: Asociación Americana de Diabetes.
Asociación Americana de Diabetes, 2019 (ADA)
• IMC ≥ 25 kg/m2 y con factores de riesgo adicionales (Inactividad física,
familiar, raza/etnia, mujeres post-parto diagnosticadas con diabetes
gestacional, hipertensión, HDL < 35 mg/dL y/o triglicéridos > 250 mg/dL;
síndrome de ovario poliquístico).
• Pacientes > 45 años.
Diabetes que es diagnosticada por primera vez en
el II – III trimestre de embarazo. Sin pre-existencia
de DM-I o DM-II (ADA, 2019)
Realizar tamizaje a las 24-28 semanas de gestación.
Estrategia de un paso Estrategia de dos pasos
Screening con
Ayunas (8h): >92 mg/dL
50 g de glucosa 24-28 semana gestación
PTOG con 75 g de glucosa

¿1ra hora >130 mg/dL? NO FIN
SI
Criterios DX DMG
PTOG Carpenter NDDG
1ra hora: >180 mg/dL
PTOG con 100 g de glucosa Ayunas 95mg/dL 105mg/dL
1h 180mg/dL 190mg/dL
2h 155mg/dL 165mg/dL
2da hora: >153 mg/dL
1ra,Ayunas (8h)
2da, 3ra hora 3h 140mg/dL 145mg/dL
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Al menos 2 resultados= Dx

Control Prevención de
glicémico complicaciones
Glucómetro
(control diario) Cetonuria
Complicaciones agudas
(en conjunto con el
Glucosa 2 horas perfil ácido-básico)
A los pacientes diagnosticados se les Glucosuria
realiza estudios de monitoreo:
postprandial
HbA1c Microalbuminuria
Complicaciones
Glucosa en crónicas
ayunas Perfil renal
Perfil lipídico
• Provee información sobre el metabolismo
Toma de muestra de la glucosa después de la ingesta de
en ayunas alimentos (postprandial).
• Antes era una prueba diagnóstica. Ahora
es una prueba de control.
Paciente consume • Principal aplicación actual: regulación de

una comida ligera Horas después de la ingesta de alimentos
las dosis de los tratamientos
hipoglucemiantes. Establecer las metas de
Glucosa 2HPP cada paciente en conjunto con HbA1c.
Paciente no diabético 2HPP <140 mg/dL
Valor objetivo del 2HPP <180 mg/dL • El metabolismo postprandial de la glucosa
Toma de muestra paciente diabético puede variar entre cada paciente. La
a las 2 horas post
Paciente diabético no >200 mg/dL glucosa 2HPP permite personalizar el
prandial
controlado control diabético.
Glucosa
Glucosa
en HbA1c
2HPP < 7% en
ayunas 80-130 <180 pacientes no
mg/dL mg/dL complicados
<8% en
- Enfoque de automonitoreo en - Evaluar el metabolismo pacientes con
casa. postprandial complicaciones
- Enfoque de laboratorio, en - Definir los tratamientos que se
conjunto con las otras pruebas utilizarán para disminuir los
de monitoreo. niveles de Glucosa 2HPP En presencia de variables
- Lograr el objetivo de HbA1c biológicas que impiden el uso
de HbA1c para monitoreo,
usar Fructosamina.
• Se trata de la complicación mas común
en el diabético.
• El monitoreo del estado renal, esta
directamente relacionado con el estudio
de complicaciones por hipertensión
(también frecuente).
• Prueba de screening: Microalbuminuria
Dussol B. Nefropatías glomerulares: orientación diagnóstica y evolución. Tratado de Medicina. Science Direct. 2015.
Microalbuminuria: aumento subclínico de la excreción urinaria de
albúmina que requiere métodos más sensibles para su detección
(unión al colorante, inmunológicos). Un valor de 30-300 mg de
albúmina en muestra de orina se clasifica como microalbuminuria.
• 1ra orina de la mañana: evaluar microalbuminuria en conjunto

con creatinina (mg albúmina/g de creatinina)
• Orina de 24 h: mg albúmina/24 h.
Guías ALAD, 2018
Según la ADA, 2019:
• Hipoglicemia leve (Nivel I): 54-70
mg/dL
• Hipoglicemia moderada (Nivel II):
<54 mg/dL
• Hipoglicemia severa (nivel III) Valor
crítico: <45 mg/dL implica riesgo
para la vida del paciente.
Hipoglicemia
postprandial: por
absorción acelerada de
glucosa por liberación
excesiva de insulina,
hiperinsulinemia
reactivante. Por
desórdenes genéticos de
intolerancia a la
galactosa y fructosa.
En el diabético
• Determinación de glucosa en sangre
• Determinación de Insulina y Péptido C por inmunoensayo.
• Determinación de hipoglicemia postprandial:
Curvas de insulina y glucosa con sobrecarga de glucosa.
Gonzalez. Bioquímica Clínica y Patología Molecular.
• Complicación aguda de la DM por
déficit de insulina o de
hipoglucemiantes.
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Los cuerpos cetónicos son volátiles:

DEPTO. DE BIOANÁLISIS E INMUNOLOGÍA cetonemia genera aliento con olor frutal.
• Indicativos de cetoacidosis diabética.
• Generalmente se acompaña con alteración de electrolitos y disminución de pH
sanguíneo.
• Aumenta el riesgo de complicaciones agudas. Trastornos por hiperventilación,
nauseas, vómitos, coma diabético.

I-Clase - Metabolismo de CHOS-HC

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Bioquímica I– MB-159

Heidy Cabrera MSc. ; Olinda Núñez MSc.

Glucosa circulante en sangre

Díaz D. y Burgos L., 2002.

Fuente: Fernández Lorenzo JR et al.

Cerebro Fibroblastos Leucocitos…

Diagnóstico - monitoreo y control

• Cuantificación de glucosa sérica: método de glucosa oxidasa; método de

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Vida media del eritrocito = vida media de HbA1c

• Otras proteínas como fructosamina y albúmina

• Valor de referencia: <5.6%

• Valores <4% o >15% sospechar probable interferencia.

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Fuente: Vanegas M. 2018

Muy utilizado en HON.

Glucosa en ayunas en suero 70-99 mg/dL 100-125 mg/dL – Prediabetes.

>126 mg/dL – Diabetes mellitus

2da hora de la PTOG <140 mg/dL 140-199 mg/dL – Prediabetes.

>200 mg/dL – Diabetes mellitus

HbA1c <5.6% 5.7-6.4% - Prediabetes

>6.5% - Diabetes mellitus

Realizar tamizaje a las 24-28 semanas de gestación.

PTOG con 75 g de glucosa

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Al menos 2 resultados= Dx

Paciente consume • Principal aplicación actual: regulación de

• 1ra orina de la mañana: evaluar microalbuminuria en conjunto

Guías ALAD, 2018

• Determinación de hipoglicemia postprandial:

Curvas de insulina y glucosa con sobrecarga de glucosa.

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