UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CURSO: Biología General

PRACTICA Nº 2

DETERMINACIÓN DE BIOMOLÉCULAS EMPLEANDO PRUEBAS

CUALITATIVAS
SOLUBILIDAD DE LIPIDOS: FUNDAMENTO

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequeñísimas gotitas formando una "emulsión" de aspecto lechoso, que es transitoria, pues
desaparece en reposo, por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que por su menor

densidad se sitúa sobre la de agua. Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados

disolventes orgánicos como el éter, benceno, xilol, cloroformo, etc.

PROCEDIMIENTO

Tomar dos tubos de ensayo y poner en cada uno de ellos 2-3 cc de agua y en el otro 2-3cc de éter u

otro disolvente orgánico.

Añadir a cada tubo 1cc de aceite y agitar fuertemente. Observar la formación de gotitas o micelas y

dejar en reposo. Se verá como el aceite se ha disuelto en el éter y en cambio no lo hace en el agua, y

el aceite subirá debido a su menor densidad.

DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS O XANTOPROTEICA

FUNDAMENTO

Se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas

son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas

con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una

vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro.

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en un tubo de ensayo de 2 a 3 mL. de solución problema (clara de huevo ).

2. Añadir 1 mL de HNO3 concentrado.

3. Calentar al baño maría a 100º C.

4. Enfriar en agua fría

5. Añadir gota a gota una disolución de hidróxido de sodio al 40%.

DETERMINACIÓN DE AMINOACIDOS AZUFRADOS

FUNDAMENTO

La reacción se basa en la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se debe a la

separación del azufre de los aminoácido mediante un álcali o base,el cual al reaccionar con una

solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 mL. de albúmina de huevo (clara de huevo).

2. Añadir 2 mL. de solución de hidróxido sódico al 20%.

3. Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%.

4. Calentar el tubo hasta ebullición.

5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo.

IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS MEDIANTE LA REACCIÓN EL BIURET

FUNDAMENTO

La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea

(H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción

La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret. El

reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se

basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de

coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que

forma parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm.

MATERIALES Y REACTIVOS

 Tubos de ensayo
 Gradilla

 Mecheros.

 Vasos de precipitación

 Pipetas.

 Solución de SO4Cu al 1%

 NaOH al 20%

 Solución de albúmina al 1-2%.

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%.

2. Añadir 4-5 gotas de solución de CuSO4 al 1%.

3. Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%.

4. Agitar para que se mezcle bien.

5. Observar y anotar los resultados.

IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS O AZÚCARES MEDIANTE LA PRUEBA DEL

LUGOL

FUNDAMENTO
Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de

Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta

característico. La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las

espiras de la molécula de almidón.

No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión

que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta.

MATERIALES Y REA CTIVOS

 Muestras de azúcares (soluciones al 1%):

 glucosa
  maltosa

 fructosa

 sacarosa

 almidón.

 Tubos de ensayo, gradilla, vaso de precipitación, mechero.

 Lugol

PROCEDIMIENTO

 Colocar en un tubo de ensayo unos 3 mL del glúcido o carbohidrato a investigar.

 Añadir unas gotas de lugol.

 Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva.

IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES MEDIANTE LA PRUEBA

BENEDICT

FUNDAMENTO

Algunos azúcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves

como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta característica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre,

el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azúcares con un grupo

carbonilo libre son llamados azúcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se

encuentra combinado en unión glicosídica se conocen como azúcares no reductores. Existen

varias reacciones químicas que permiten determinar si se está en presencia de un azúcar

reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reacción o

no de un azúcar con el ion Cu 2+ . El reactivo de Benedict contiene soluciones de carbonato de

sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3 confiere a la solución un pH alcalino

necesario para que la reacción pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al ion
 Cu2+ en solución ya que tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco ionizados

con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul. Si se le

agrega al reactivo una solución de azúcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a

ebullición, el azúcar en solución alcalina a elevadas temperaturas se convertirá en D-

gluconato y su ene-diol, rompiéndose luego en dos fragmentos altamente reductores, los

cuales con sus electrones expuestos, reaccionarán con el Cu++. Se obtiene entonces un

azúcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones

OH- presentes en la solución para formar el hidróxido de cobre:

Cu + + OH - → Cu(OH) (precipitado amarillo)

El hidróxido pierde agua
2 Cu(OH) → Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O
La aparición de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia

de un azúcar reductor.

MATERIALES Y REACTIVOS

-Reactivo de Benedict: consta de 3 soluciones*:

 Pesar 100 g de NaCO3 anhidro y disolver en 200 ml de agua destilada hervida.

 Pesar 173 g citrato de sodio y disolverlo en 200 ml de agua destilada hervida.

 Pesar 17.3 g de CuSO4.5H2O y disolverlo en 300 ml de agua destilada hervida.

-Mezclar las tres soluciones cuando estén frías. Aforar a 1 l con agua destilada hervida.

-Soluciones de carbohidratos 0.1 mol/l. Pesar la cantidad requerida de cada uno de los

carbohidratos a ensayar y disolverlos en 100 ml de agua destilada. La solución de almidón se

prepara al 1%: pesar 1 g de almidón y llevar a 100 ml con agua destilada caliente.

-1 gradilla con tubos de ensayo

-pipetas de varios volúmenes

-baño maría en ebullición

* Reactivo preparado por personal técnico
PROCEDIMIENTO

 Seleccionar la pipeta más conveniente y depositar 2.5 ml de reactivo de Benedict en un

tubo de ensayo.

 Repetir esta operación en 5 tubos más. Luego, a cada tubo, añadir 6 gotas de una cada

una de las siguientes soluciones de carbohidratos: glucosa, fructosa, maltosa, sacarosa al

0.1M y almidón al 1% según la siguiente tabla:

SISTEMA REACTIVO DE AZUCAR

BENEDICT (mL) O CARBOHIDRATO (Nº de gotas)

Testigo 2,5 ------
Glucosa 2,5 6
Fructosa 2,5 6
Maltosa 2,5 6
sacarosa 2,5 6
Almidón 2,5 6

Colocar los tubos en un baño de agua hirviendo por 5 minutos.

Observar cualquier cambio de color durante el calentamiento.

Retirar el tubo y colocar en una gradilla y después de un corto tiempo observar si se ha

formado un precipitado, el cual puede ser rojo, anaranjado o verdoso.

RESULTADOS

1) Elaborar un cuadro resumen con los carbohidratos, lípidos aminoácidos y proteínas

que utilizó en las diferentes pruebas realizadas, si se formó un precipitado o no , si

se formaron fases y de qué color se presentaron las reacciones.

INVESTIGACIÓN ADICIONAL

1. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

2. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva

o negativa? ¿Por qué?

3. Tomando en cuenta la estructura helicoidal del almidón, explique qué tipo de

reacción se lleva a cabo cuando se mezcla el Lugol con el almidón?

4. ¿Cómo cree usted que daría el resultado de esta prueba (Lugol) si se utiliza

celulosa? Y por qué?