INMUNOAGLUTINACIÓN (DETERMINAR PROCEDIMIENTO

Se utilizan 2 análisis:
FACTOR REUMATOIDEO FR Y PROTEINA C • Análisis Cualitativo
REACTICA (PCR) o Cualidades:
 Es positivo o negativo
Es una técnica que permite juntar o unir 2 o mas moléculas a fines al
 Aglutina o no aglutina
sistema inmunológico de las cuales van a reaccionar formando
 Tiene factores reumatoideos o no tiene
aglutinaciones.
o Necesitamos una muestra = Suero
Ejemplo: o Un Kit que tiene factores reumatoideos:
 Látex: Esferas de Látex + IgM
Tenemos proteínas y esas se unen  Control (+): IgG
específicamente a un anticuerpo, se  Control (-): Nada
juntan y pueden formar aglutinación.

FACTORES REUMATOIDEOS (FR)

• Técnica serológica, ayuda en diagnóstico artritis Reumatoide

• Se da por inmunoaglutinación, poco sensible y poco
específica
En el 1ero será POSITIVO, el 2do NEGATIVO y el ultimo será la
• Muchos falsos negativos
muestra de nuestro paciente.
• Cuando una persona tiene Artritis Reumatoide empieza a
producir Factores Reumatoideos. PROCEDIMIENTO
• Factores Reumatoideos son anticuerpos IgG  A los 3 se agrega 30ul de Reactivo Látex + (IgM)
 Al 1ero - positivo se agrega 30ul de control (+)
ESFÉRAS DE LATEX
 Al 2do – negativo se agrega 30ul de control (-)
• Son 6, conocidas como Moléculas Inertes (son sintéticas).  Al 3ero -paciente se agrega 30ul de suero.
• En la membrana de las moléculas se agrego IgM (activa a los
factores reumatoideos)
• Tiene que interactuar la IgM e IgG, cuando se juntan van a
aglutinarse.

FUNDAMENTO

Los anticuerpos de tipo IgG que son los Factores Reumatoideos

reaccionan con IgM que están adheridas a moléculas inertes y eso se RESULTADOS
llama AGLUTINACIÓN.  (+) = FR (+) o FR REACTIVO
 (-) = FR (-) o FR NO REACTIVO

• Análisis Semicuantitativo
o Dará un valor (IU/ml)
o Solo se hace si el análisis cualitativo es POSITIVO

Diluciones Seriadas (6 tubitos):

o A los 6 tubitos se les agrega 100ul de SF o PBS.

o Solo al 1ero tubito se agrega 100ul de suero (+).
o De la mezcla del 1er tubo se saca 100ul para el 2do.
PRUEBAS DE LABORATORIO o Luego del 2do para el 3ro y así sucesivamente.
o Luego se agrega a los 6 pocos 30ul de látex + IgM.
• FR (para identificar anticuerpos)
o No siempre aglutina en los 6, hasta donde aglutina.
• PCR (proteína de inflamación)
o El tubo más concentrado es el 1 va bajando.
• Velocidad sedimentación
o Pacientes con enfermedad recién Títulos menores
• Recuento Leucocitario
y con enfermedad crónica títulos mayores
• Hemograma Completo

La validez se da por la prueba:

• Anticuerpos contra el péptido cíclico citrulinado (Anti-

CCP), se utiliza la técnica de ELISA.
• Perfiles: Anticuerpos antinucleares y antimitocondriales
o ANA
o ANCA
o AMA
• El FR puede salir positivo por Lupus Eritematoso sistémico
(LES) o síndrome surf (SS)
PCR INMUNOPRECIPITACIÓN – DETECCIÓN DE
Proteína que se activa ante inflamación. REAGINAS PLASMÁTICAS EN SÍFILIS
 También se utiliza esferas de látex. • Falsos positivos – poco específica.
 Se agregan a las esferas anticuerpos específicos para una
proteína (PCR). INMUNOPRECIPITACIÓN (IPP)
 El anticuerpo específico = Anti-PCR contra proteína C, si la  En tubo de ensayo o vidrio
detecta esta se Aglutinará  Se colocan 2 moléculas diferentes
para que interactúen, estas
moléculas zona afines o específicas,
estas causan una densidad o peso
que estará al fondo del tubo.
 2fases (fase superficial y fase donde precipito el completo)
 El complejo puede ser: 2 proteínas afines o la reacción de un
antígeno con un anticuerpo.

SÍFILIS
Análisis Semicuantitativo (cambia unidades)  De trasmisión sexual (ETS)
PCR = Titulo x sensibilidad (mg/l)  Treponema Palladium (bacteria – espiroqueta)
 Cuando la bacteria infecta demora 20 – 30 días para
presentarse
 Se trata con Penicilina
 Hay 3 tipos de sífilis (primaria, secundaria y terciaria)
 El primer signo es el Chancro (como ampolla)
 El segundo signo es Exantema (la más contagiosa)
 El tercer signo pasa al Cerebro (Neuro sífilis)
 Comenzamos a producir una proteína (REAGINAS)

DETECCIÓN

1. Pruebas NO treponémicas
o Mas sencillas – poco específicas
o Detecta antígenos o sea Reaginas
o Hecha de moléculas afines a las reaginas (lípidos)
o Apoyan el Diagnóstico
o Si sale + confirmar con una prueba Treponémica

 Las pruebas más comunes tenemos:

o RPR (Prueba rápida reaginas)
 Utiliza plasma

o VDRL (enfermedades venéreas de investigación en

el laboratorio)
 Utiliza suero y liquido cefalorraquídeo
 RPR (Prueba rápida reaginas)
o Es la prueba más sencilla
o Detecta las reaginas
o Toman partículas de carbono y le añaden moléculas
colesterol (1era molécula afín a la reaginina),
también el carbono lecitinas (2da molécula afín) y
por último cardiolipinas (3era molécula afín).
o Si tenemos la muestra del paciente y la enfrentamos
con este reactivo de carbono, se unirán a las
moléculas afines y formarán un peso o densidad y
van a precipitar.
Procedimiento Prueba RPR ANTICUERPOS MONOCLONALES
 Sacar sangre (plasma)  Hablamos de cáncer reciben inmunoterapia, radioterapia,
 KIT de trabajo quimioterapia y estas son invasivos, lisa células buenas.
o Partículas de carbono (colesterol, cardiolipinas y  Buscar una proteína (anticuerpo específico) que se pueda unir
lecitinas) a una célula madre y bloquear su función
o Control (+) = Reaginas  Molécula dirigida contra el antígeno, contra una célula que
o Control (-) = Nada esta produciendo el cáncer
1. Prueba cualitativa TRANSTUZUMAB
o Se usa la misma placa con pocitos
o A los 3 pozos 30ul de carbono  Anticuerpo monoclonal
o Al 1ero pozo (+) 30ul de control (+)  Para cáncer de mama
o Al 2do pozo (-) 30ul de control (-)  Bloquea una vía de señalización molecular
o Al último pozo 30ul de suero o plasma
VIA FOSFATIDILINOSITOL – 3 - KINASA

 Estas se van activando poco a poco

 Resultado final a través del núcleo
 Solo se activen cuando son necesarias cuando nuestro
organismo las necesita, cuando no las necesitamos se
desactivan.
 Relacionada con varios tipos de cáncer.

 Para que esta vía se active necesitamos un ESTIMULO se da

 Resultados
o (+) = RPR (+) o RPR REACTIVO
o (-) = RPR (-) o RPR NO REACTIVO
2. Prueba Semicuantitativo
o Solo se realiza si la Cualitativa salió POSITIVA.
o Diluciones Seriadas
1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64
o Se agrega Carbono a los 6 tubitos
o No hay fórmula o unidad.
3. Pruebas Treponémicas
o Detectan el anticuerpo (IgM y IgG)
o Hecha de antígenos de Treponema Palladium
o Prueba netamente diagnóstica
o Altamente específica
 Las pruebas más comunes tenemos:
o WB
o ELISA para T. Pallidium
o FTA. Abs (inmunofluorescencia x absorción)
o MHA -TP (micro aglutinación de T. Pallidium)
fuera de la célula, se llama LIGANDO (proteína o hormona),
esos ligandos se unen a un RECEPTOR DE MEMBRANA se
llama HER2, este receptor presenta 3 partes en su estructura
(la primera es una parte externa que se conecta directamente
con el ligando, una parte media que se encuentra atravesando
el citoplasma y le permite anclarse al receptor en la
membrana y una parte interna que está hecha de
aminoácidos (tirosina, treonina y serina))
 Estas tirosinas internas se activan añadiendo un grupo fosfato
haciendo que se fosforile y haciendo que se convierte en
actividad Tirosina-Kinasa.
 Luego que ya esta prendiendo el receptor hasta su parte
interna, este empieza a prender a otros complejos y aparece
el SUSTRATO DEL RECEPTOR DE INSULINA este gana un
grupo fosfato y al ganar ese grupo se activa y gana 2
COMPLEJOS inactivos p85 y p110 y hace que se active por
otra fosforilación, en este caso la enzima que activa estos
complejos es P13K.
 Luego hay otra fosforilación en el complejo fosfatidil inositol
difosfato (PIP2) se convierte en fosfatidil inositol trifosfato
(PIP3) y esta ganando un grupo fosfato y hace que se
encienda el gen AKT.
 Cuando el gen AKT se activa regula la expresión de diferentes
genes.
 MDM2 se encarga de activar al gen P53 y este gen se encarga
de eliminar cualquier célula cancerosa (arresto del ciclo
celular, apoptosis y reparación de ADN)
 Los genes NF-kB, FKHR y BAD se activan y trabajan con
(Apoptosis).
La idea es bloquear ciertas proteínas o procesos que están desregulando
el buen funcionamiento de un ciclo o señalización celular con los
anticuerpos monoclonales.
 PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

Una célula cancerosa ha sido unida con una célula que produce un
anticuerpo específico.

El ratón tiene cáncer tiene la célula que presenta el anticuerpo contra

las células cancerosas del ratón, luego tenemos el linfocito B que esta
expresando el anticuerpo, luego estos anticuerpos se empezarán a
reproducir en grandes cantidades así es que lo unimos con una célula
de crecimiento delimitado, al unirlo con esa célula va a generar un
hibridoma, luego seleccionamos hibridomas (células que tengan
expresado el anticuerpo producido) y finalmente se hace la expansión
clonal y producción y eso se entra para el cáncer específico.

Anticuerpos dirigidos ante un solo tipo de células cancerosas

HER2 activo se fosforila en su parte interna, desencadena la
fosforilación de la vía P13-K donde AKT se fosforila y este se encarga
de dar ordenes a los diversos genes y finalmente al núcleo.

DESVENTAJA DE USAR ANTICUERPOS MONOCLONALES

 Puede haber un rechazo

 Anticuerpos humanos, anticuerpos quiméricos (mas
frecuentes) y anticuerpos.

El ligando se une a una célula normal, el receptor se activa, se fosforila

en su parte interna y hace que se active la vía PI3K esa vía activa AKT,
esta activa mTOR y mTOR da señales de crecimiento celular (o sea que
el ciclo celular empiece a funcionar desordenadamente y también hace
que active otros genes que ayudarán también) MALO

LO QUE SE HACE

Se coloca el Trastuzumab en la zona que pusieron el ligando, entonces

al unirse bloqueará todo y ya no habrá ciclo celular, estimula la
apoptosis)

El exceso de HER2 es degradado

 INMUNOCROMATOGRAFIA – DETECCIÓN DE ETAPA CRÓNICA DE LA HEPATITIS B

HBsAG, COVID-19 y HCGB • El Antígeno de superficie (HBsAg) perdura mucho tiempo,

no hay un decaimiento como en la Aguda.
• Muy usada o Causan daño hepático (Cirrosis o cáncer de hígado)
• Muy sencilla y rápida
• Poco sensible y poco especifica (no es certera)
• Prueba de apoyo en el diagnóstico
• Prueba de campo: En campañas

INMUNOCEROMATOGRAFÍA

Movilización de moléculas inmunitarias a través de una membrana

(silica o nitrocelulosa) en la cual se puede dar una reacción antígeno-
anticuerpo.

VIRUS DE LA HEPATITIS B

• De la familia Hepatovirus
• Su material genético es DNA circular
o Virus menos mutagénico
• Protección del Material genético
o Empleando proteínas
 Proteína Core = HBcAG
 Proteína de Envoltura = HBeAg
 Proteína de Superficie = HBsAg
• Ayuda en la endocitosis del
virus a la célula (hacen
contacto)
• Detección
o HBsAg (1era detectarse) = Detecta este virus
COVID-19
• Ocasionado por el Virus Sars CoV-2
• Familia Coronavirus
• Tiene Sars CoV 1 y MERS
• Tiene RNA = posibilidad de mutaciones (variantes)
• Proteína Spike (S): interacciona con un receptor ECA2 y se
hace más fácil la endocitosis del virus
• Proteína Hematoglutina esterasa (HE): Anclar al virus a la
célula.
• Proteína Spike tiene varias mutaciones o variantes.

COMPORTAMIENTO DE LOS ANTICUERPOS DE LOS ANTIGENOS

ETAPA AGUDA DEL HEPATITIS B
La hepatitis B tiene un tiempo de incubación.
• Suelen decir que el virus incuba 4-6 semanas (teórico)
• La verdad es que incuba de 10 – 15 semanas (práctica)
• Tenemos en Periodo Ventana (no hay síntomas, ni es
detectable por pruebas serológica, pero si moleculares) está
tratando de sobrevivir replicándose.
• IgG se activan y se prolongan por mucho tiempo.
Periodo de venta (5- 7 días) empiezan los síntomas, no se puede
detectar con ninguna prueba serológica en esos días, pero si PCR
entre las primeras (48-72 horas) detecta el RNA viral, Entre el 5-7 día
una Prueba antígena que detecta proteína S es eficaz.
• Cuando empieza a decaer el IgM y el IgG empieza a
aumentar quiere decir que el paciente esta llegando al final
de la enfermedad.
• Cuando hay mayor cantidad de IgG y menor de IgM el
paciente ya esta curado y no debería infectar.
FUNDAMENTO DE LA PRUEBA

• Se realiza a través de una membrana de silica.

• El casete tiene 3 zonas (Sample, Test y Control)
• Zona Sample (S): Esta zona S tiene moléculas Oro coloidal
adheridas a la membrana, si el paciente tiene antígenos
patógenos se unirán a las moléculas oro coloidal, luego migra
a la zona T.
o Sangre
o Suero
o Plasma
o Orina
o LCR
o Heces

• Zona Test (T): Adheridas a la membrana tenemos unos

anticuerpos específicos para antígeno y se le unirá el antígeno
y el oro coloidal. En esta zona se pintará rosada si es que se
encuentra el antígeno que se busca. El oro coloidal seguirá la
migración hasta la Zona Control (C).

• Zona Control (C): En esta zona habrá una proteína especifica

oro coloidal y el oro coloidal se unirá a esta proteína y se
coloreará rosada o rojiza (siempre se da esta coloración)

RESULTADOS