PRCTICA 1.

OBTENCIN Y PURIFICACIN DE GAMMAGLOBULINAS

1. Constitucin proteica del suero.

Albmina. Se encarga del transporte de molculas; como cidos grasos, vitaminas, hormonas,
cationes, compuestos exgenos, regula la presin onctica, confiere proteccin sobre toxinas en el
cuerpo.

Inmunoglobulinas. Son protenas que actan como anticuerpos.

Ceruloplasmina. Transporta el Cu, une 6 tomos de Cu por molcula.

Transferrina. Protena de transporte de hierro.

2. Caractersticas y propiedades fisicoqumicas de las gammaglobulinas.

Protena monomrica, se produce en respuestas secundarias a antgenos. Se une a receptores Fc

en clulas fagocticas al opsonizar partculas, se une con macrfagos y neutrfilos porvocando la
destruccin de microorganismo. Puede atravesasr la barrera placentaria y se secreta en la leche
materna.

3. Mtodos de separacin de protenas.

- mtodos especficos.
- mtodos inespecficos.

Electroforesis.

Mtodo de Cohn o de Harvard. El mtodo de 6 de Harvard utiliza alcohol etlico, una

solucin salina diluida y una temperatura baja para separar las protenas del plasma en 6
fracciones para uso clnico, como albmina, fibiringeno, etc.

Precipitacin por sales (salting out). Precipitacin selectiva por: sulfato de sodio/amonio, y
sulfito de sodio.

Freacciones aisladas.

Mtodo de kjeldahl.

Mtodo de Greenberg. Mide la cantidad de cidos aminados por reaccin con el reactivo de
Folin y Ciocalteu.

Mtodo de Biuret. Se basa en la combinacin del enlace peptdico y el ion cobre, dando un
complejo color prpura. Dicha intensidad de ese color es proporcional al no. de enlaces
peptdicos y por lo tanto a la cantidad de protenas.

Mtodos nefelomtricos. Se utiliza suere aadido al cual se le aade cido sulfosaliclico, se

lee al fotmetro la turbidez debida al precipitado resultante.

Medicin de las protenas sricas.

(Tcnica de Gornall, Bardawill y David, utilizando el reactivo del Biuret de Weichselbaum.)

 PRECIPITAN LAS GLOBULINAS Y LA ALBUMINA SE QUEDA EN SOLUCION. EN
CONCENTRACIONES ADECUADAS.

4. Fundamento de la tcnica de precipitacin con sulfato de amonio.

Debido a que el sulfato de amonio es una sal divalente, son necesarias una mayor cantidad de
molculas de agua para solvatar los iones de sal presentes. De esta maneraexiste una menor
cantidad de molculas de agua disponibles para interactuar con la protena y las interacciones
protena-protena aumentan y la hacen precipitar.

5. En qu consiste el fenmeno de salting-out?

El salting out es una tcnica de extraccin de protenas que consiste en concentrar la fase liquida
tanto como sea requerido para que las protenas se precipiten, lo que se produce es que al
solubilizar la sal, esta se rodea de agua, limitando las moleculas que solubilizan a las protenas,
logrando que al final, no haya moleculas disponibles de agua precipitando las protenas. La
caracterstica que deben de tener la fase liquida es que sea polar para poder disolver la sal.

6. Factores que afectan la precipitacin salina.

Debido a que la protena contiene varios grupos cargados, la solubilidad es sensible a la

temperatura, el pH, la fuerza inica.

7. Ventajas y desventajas de la precipitacin con sulfato de amonio.

VENTAJAS. El peligro de desnaturalizacin de la protena es bajo, en comparacin a el mtodo de

precipitacin con alcohol, no requiere el ajuste exacto del pH.

DESVENTAJAS. Se debe de remover por dilisis y este proceso requiere de 1 a 3 das y se corre el
riesgo de contaminacin bacteriana y adems se recomienda que el sulfato de amonio sea puro;
sin contaminantes de metales, ya que estos iones pueden ser unidos firmemente por algunas
protenas y pueden catalizar reacciones de oxidacin.

8. Utilidad de los productos obtenidos por precipitacin con sulfato de amonio.

PRECIPITAN LAS GLOBULINAS Y LA ALBUMINA SE QUEDA EN SOLUCION. EN CONCENTRACIONES

ADECUADAS