INTRODUCCIÓN.

➢ ¿Por quién está formado el Sistema Inmune?

Está formado por células y proteínas:

CÉLULAS:

➢ LINFOCITOS (Sistema adaptativo):

- B
- T:
• Helper
• Citotóxicas
• Reguladoras

➢ MACRÓFAGOS: Hay varios tipos:

- Células D
- Mastocitos
- Basófilos
- Neutrófilos

Los macrófagos presentan receptores del tipo IgG (FC) y fagocitan (oxonización) por medio de
la proteína oxinina.

• Natural Killer: Receptores que reconocen las IgG y provoca la muerte programada de
las células (apoptosis).

PROTEÍNAS:

➢ ANTICUERPOS, todos tienen características diferentes:

- IgA: Están presentes en la mucosa de los pulmones, garganta, en la leche materna, …
Reconocen el antígeno y lo marcan.
- IgM:

Los linfocitos B tienen receptores específicos, reconocen la “cosa”, la internaliza y actúa

parecido a los macrófagos. Lo rompe y lo enseña por medio de CMH2 a las THelper. Estas
les dan permiso a las células B para transferirla en la célula plasmática y fabrique
anticuerpos (que reconozcan al que fagocitó porque también las células B hacen
reordenamiento génico). ¿Pero qué isotipo de anticuerpos?

Depende de la señal que reciban las células en el momento de la señalización en el ganglio

linfático.

1. Primero siempre son IgM, mientras decide en cual se va a convertir.

2. Elige entre IgA/IgG/IgE.
- IgG:

Se encuentran en el tejido. Reconocen el antígeno y luego puede actuar de 3 formas:

• Oxonización.
• Apoptosis.
• Mediante la activación de las proteínas del complemento.

Al activarse se pega la C3B y si continúa el proceso, se abre un poro y …

Hay una activación por cascada: la C3B se queda pegada y la C3A se libera activando
mastocitos para inducir a la sangre e ir a la zona de infección. Produciéndose en ellos una
pérdida de líquido hacia la zona de la infección.

- IgE: Relacionados con las alergias. Si una alergia no está mediada por ellos, no es una
alergia. Sería una hipersensibilidad.

Los mastocitos o basófilos activados por la IgG presentan receptores IgE, que al pasar por ellos
se quedan pegados (activándolos). Se libera histamina a los vasos sanguíneos.

- IgD: Solo son receptores de membrana.

• Tener en cuenta que todos los antígenos presentan una parte que es constante, es
decir, igual para todos. Y luego, una región variable.

PRÁCTICA 1. DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO.

• ANTICUERPOS MONOCLONALES

Si necesito un anticuerpo específico, ¿qué hago?

Pincho una proteína al ratón, que se obtiene buscando al gen que la codifica. Lo meto en un
plásmido y este en una bacteria (induciendo un promotor y las características que me
interesen).

Al cabo de un tiempo el ratón comenzará a producir la proteína del gen y tendrá muchos
anticuerpos de los que indujimos.

Para fabricar anticuerpos contra la célula A, tenemos que:

Encontrar la célula B, aislarla e inducir que esta

fabrique los anticuerpos (añadiendo citoquinas).
TIPOS DE GRUPOS SANGUÍNEOS.

A+: Tiene receptores A y Rh.

B+: Tiene receptores B.

AB+: Tiene receptores A y B y Rh. (RECEPTOR UNIVERSAL)

O+: Tiene receptores Rh. (DONADOR UNIVERSAL)

O-: No tiene ningún receptor.

➔ Para el Rh se fabrica anticuerpos, pero necesita un tiempo → fabrica IgG y produce la

hemólisis inmediata.

CASO DE LA EMBARAZADA.

- La madre es O-.
- El niño es A+.

En el parto la madre genera IgG (para el +).

IgM se queda solo en la madre, nunca se
cederán al niño.

- Solo los IgG pasan a la placenta.

Pero hay un problema, en el primer

embarazo, si la madre es – y el niño +, en
el parto la sangre del niño y la madre se
ponen en contacto. Haciendo que la
madre genere anticuerpos IgG anti Rh.
 ➢ En el segundo embarazo sí hay que tener cuidado y tomar medidas.

En resumen, cuando la embarazada es O- hay que ver si tiene anticuerpos anti Rh.

PRÁCTICA 2. EL COMPLEMENTO, INMUNIDAD NATURAL.

Las proteínas del complemento son un conjunto de unas 30 proteínas que se encuentran en el
suero. Activan una CASCADA enzimática, que tiene como finalidad formar un complejo de
ataque de membrana (las últimas se unen a la célula para formar un poro y eliminarlas).

Existen 3 vías de activación:

- NORMAL: Detectan el antígeno-anticuerpo.

- ALTERNA: Detectan la sustancia en la superficie que no son nuestras, como pueden ser
los lipopolisacáridos que recubren las Gram +.
- LECTINAS: Detectan manosas de la superficie de las células. En nuestras células se
encuentran siempre en una distancia determinada, en otro ser vivo cambia.

Todas estas convergen en la proteína C3 que libera la C3B que, a su vez, va a marcar a la célula
que se va a lisar. Formando el complejo de ataque del poro nombrado anteriormente.

➔ C5B, …6, …7, ...8 y por último la C9B crea los poros y entra el líquido extracelular debido
a la diferencia de gradiente que producirá la LISIS.

Y, por otro lado, se encuentran las proteínas C3A y C5A que tienen una función anafiláctica, es
decir, que llaman a más células para limpiar los restos de las células.

Todas estas proteínas necesitan iones Ca2+ y Mg2+.

Este proceso nos ayuda a amplificar las respuestas humorales y está relacionado con la
inmunidad innata y con la adaptativa.

¿Cómo podemos comprobar que esto es verdad?

Con el ensayo de “ACTIVACIÓN VÍA ALTERNATIVA DEL COMPLEMENTO FRENTE A BACTERIAS”.

Se toman dos tubos de ensayo, en los cuales se pondrá:

 - TUBO 1: 100 μL de suspensión de E.coli + 200 μL suero
- TUBO 2: 100 μL de suspensión de E.coli + 200 μL suero + EDTA

El EDTA lo que hace es paralizar la cascada enzimática, debido a que para ello necesitan los iones
Ca2+ y Mg2+. Pero al añadir el EDTA, estos se quedan atrapados en el quelato.

- Las soluciones que hay en los tubos, se sembraran en una placa de Petri, dividida en 4
partes:

- Parte 0: Será el tiempo inicial, es decir, en el momento

que se juntan todos los reactivos.
- Parte 15: Será la muestra que se coge pasados unos 15
minutos.
- Parte 30: Después de 30 minutos.
- Parte 60: Después de 1 hora.

➔ La espera entre cada tiempo para la toma de muestra la

realiza en la estufa a unos 37ºC (temperatura normal en el
interior del humano), para su correcta proliferación.

RESULTADOS:

PRÁCTICA 3. DETECCIÓN DE ANTICUERPOS MEDIANTE UN TEST

DE AGLUTINACIÓN.

Cuando un antígeno particulado (por ejemplo, un

microorganismo, una bacteria o protozoo) reacciona con su
anticuerpo específico se observa la formación de grumos o
agregados de estas partículas, esto se conoce como
aglutinación.

En estas reacciones, el determinante antigénico está sobre la superficie de una partícula o de

una célula. Estas reacciones son más sensibles que las de precipitación para detectar pequeñas
cantidades de anticuerpos, debido a que pocas moléculas de anticuerpo pueden unir un gran
número de partículas de antígeno en grumos gruesos visibles a simple vista. Además, es más
sencillo de visualizar y de interpretar.

Para que la unión se produzca, es necesario que la interacción de los antígenos y anticuerpos
ocurra en presencia de electrolitos y a una temperatura y pH adecuados. Si el suero del paciente
posee anticuerpos específicos frente al organismo enfrentado, se formarán agregados visibles.

Para comprobarlo, se hará el siguiente ensayo.

1º. Se tomarán 3 tubos en los cuales se pondrá:

- TUBO 1 (C+): 250 µl de la suspensión de amebas + 250 µl de suero positivo.

- TUBO 2 (C-): 250 µl de la suspensión de amebas + 250 µl de PBS.
- TUBO 3 (Problema): 250 µl de la suspensión de amebas + 250 µl de suero problema.

En el tubo C+ se observarán pequeños grumos y además toma una aparecía de agua con gas.
Mientras, el tubo C-, simplemente estará un poco turbio sin presentar dichos grumos.
 ➢ Comparándolo se sabrá de que se trata la muestra problema. En nuestro caso, la
muestra fue negativa.
➔ Cabe destacar que el suero utilizado en el tubo 1 (C+), es un suero que contiene
anticuerpos frente al microorganismo (amebas).
Para la obtención del suero positivo, previamente se inyectaron proteínas de amebas a
un conejo. El inoculo que se le realizó al conejo estaba formado por un adyuvante, que
ayuda a potenciar la respuesta del sistema inmune, más un liofilizado de proteínas
totales de ameba. Después de varios inóculos se le extrajo sangre al conejo, y se obtuvo
el suero.
➔ Los anticuerpos conseguidos de esta manera se denominan policlonales. Esto se debe
a que son capaces de diferenciar no solo una parte de las amebas como son los
monoclonales, sino que diferencian diferentes partes.

Esta técnica se podrá utilizar para varios objetivos:

- Detectar infecciones (o descartarlas).

- Estudiar cuánta inmunidad presenta un individuo frente a un patógeno.
- Investigar problemas del sistema inmunológico.

PRÁCTICA 4. INMONUDIFUSIÓN RADIAL.

Se trata de un análisis inmunológico cuantitativo. Se utiliza para detectar la cantidad de

anticuerpos IgG, IgM e IgA que hay en el suero de un individuo.

La técnica de inmunodifusión radial es lenta y poco sensible ya que necesita mucha cantidad de
anticuerpos (o antígeno) para que se formen complejos.

• TÉCNICA.

Se embebe el agar de la placa con los antígenos contrarios a los anticuerpos que se van a
estudiar.

Esta placa presenta varios pocillos en los que se depositará con una micropipeta la cantidad
adecuada de suero. El diámetro de este círculo es un reflejo de la concentración de anticuerpos
que teníamos en la muestra de suero, de modo que, a mayor diámetro, mayor concentración de
anticuerpo.

Se puede cuantificar:

- IgG: Mayoritario (75%). Es el único que atraviesa la placenta.

- IgA: Secreciones (leche, mucosa, lágrimas, …).
- IgM: Aumenta la primera semana de la infección.

Los niveles de dichos anticuerpos

varían según la edad y el sexo.

➢ ROJO: IgA
➢ VERDE: IgG
➢ AZUL: IgM