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cada  pozo.  Después  del  lavado,  los  pocillos  se  incuban  con  un  sustrato  de  
CHIKjj  DetectTM  IgM  ELISA
tetrametilbencidina  (TMB).  Luego  se  agrega  una  solución  de  parada  ácida  y  
el  grado  de  recambio  enzimático  se  determina  mediante  la  medición  de  la  
absorbancia  (densidad  óptica)  a  450  nanómetros.  Si  están  presentes  
anticuerpos  IgM  humanos  dirigidos  a  las  glicoproteínas  de  la  cubierta  del  
CHIKV,  se  forma  un  complejo  que  consiste  en  la  IgM,  el  antígeno  y  el  

para  la  detección  de  anticuerpos  IgM  dirigidos  a  antígenos  virales   conjugado.  Si  los  anticuerpos  IgM  dirigidos  a  las  glicoproteínas  de  la  cubierta  
del  CHIKV  no  están  presentes,  el  complejo  del  antígeno  y  el  conjugado  se  
chikungunya
eliminan  por  lavado.

SÓLO  PARA  USO  DE  DIAGNÓSTICO  IN  VITRO
MATERIALES  SUMINISTRADOS

USO  PREVISTO
El  CHIKjj  DetectTM  IgM  ELISA  contiene  reactivos  suficientes  para  una  placa  
de  96  pocillos  (12  x  8  tiras)  para  IgM  humana  dirigida  a  CHIKV.  Esto  es  
El  ELISA  CHIKjj  DetectTM  IgM  está  diseñado  para  la  detección  cualitativa  de   suficiente  para  analizar  un  máximo  de  90  muestras  desconocidas  para  IgM  
anticuerpos  IgM  presentes  en  el  suero  humano  dirigidos  a  las  proteínas  E2/ humana,  con  controles  incluidos  por  duplicado.
E1  del  virus  chikungunya.  Esta  prueba  es  para  el  diagnóstico  de  laboratorio  
clínico  presuntivo  de  la  infección  por  el  virus  chikungunya.  Este  ensayo  está  
diseñado  para  usarse  solo  en  pacientes  con  síntomas  clínicos  compatibles   Advertencia:  No  utilice  ningún  reactivo  donde  se  haya  producido  daño  en  el  
con  la  infección  por  chikungunya. embalaje.
Los  resultados  positivos  deben  confirmarse  siguiendo  las  pautas  recomendadas  
por  los  CDC  para  esta  enfermedad. 1.  Tiras  de  prueba  de  microtitulación  recubiertas  para  IgM  (1  placa  que  
contiene  12,  1x8  tiras  para  IgM  humana):  soporte  de  tiras  de  placa  
No  se  han  establecido  las  características  de  rendimiento  del  ensayo  para   ELISA  con  96  (12x8  tiras)  pocillos  de  microtitulación  de  poliestireno  
analizar  la  sangre  del  cordón  umbilical,  para  evaluar  a  los  recién  nacidos,   recubiertos.  Conservar  a  2­8°C  hasta  la  fecha  de  caducidad.
para  la  detección  prenatal  o  para  la  detección  de  la  población  general.  Este  
ensayo  no  está  autorizado  ni  aprobado  por  la  FDA  para  analizar  donantes  de   2.  Control  negativo  Chikungunya  IgM  (1x50  µL):  El  control  negativo  
sangre  o  plasma.  Este  kit  es  solo  para  exportación.  No  para  la  venta  o   ayudará  a  verificar  la  validez  del  kit.  Conservar  a  2­8°C  hasta  la  
distribución  en  los  Estados  Unidos  de  América. fecha  de  caducidad.  Centrifugar  brevemente  antes  de  usar  para  
sedimentar  cualquier  precipitado.

RESUMEN  DE  LA  PRUEBA 3.  Control  positivo  Chikungunya  IgM  (1x50  µL):  El  control  positivo  
ayudará  a  verificar  la  validez  del  kit.  Conservar  a  2­8°C  hasta  la  
fecha  de  caducidad.  Centrifugar  brevemente  antes  de  usar  para  
El  virus  Chikungunya  (CHIKV)  es  un  alfavirus  transmitido  por  mosquitos  que   sedimentar  cualquier  precipitado.
se  aisló  por  primera  vez  durante  una  epidemia  en  Tanzania  en  1953  [1]  [2]. 4.  Control  de  corte  de  Chikungunya  IgM  (1x50  µL):  El  control  de  corte  
Los  síntomas  agudos  de  la  enfermedad  se  confunden  fácilmente  con  la  fiebre   ayudará  a  verificar  la  validez  del  kit  y  establecer  el  umbral  para  las  
del  dengue  e  incluyen  la  aparición  repentina  de  fiebre  alta  y  poliartralgia.  La   muestras  reactivas.
artralgia  puede  ser  debilitante  y  puede  durar  meses  o  incluso  años  después   Conservar  a  2­8°C  hasta  la  fecha  de  caducidad.  Centrifugar  brevemente  antes  
de  la  infección  inicial  [3] de  usar  para  sedimentar  cualquier  precipitado.
[4].  Como  el  chikungunya  puede  circular  junto  con  otras  enfermedades   5.  Tampón  de  dilución  de  muestras  para  Chikungunya  (2x25  ml):  esta  
propagadas  por  Aedes  spp.  mosquitos  (p.  ej.,  dengue  y  fiebre  amarilla),   solución  se  utiliza  para  diluir  todas  las  muestras  de  suero  y  los  
puede  ser  difícil  diagnosticar  la  enfermedad  de  forma  rápida  y  precisa.  CHIKV   controles  antes  de  analizarlos  en  ELISA.
ha  resurgido  en  los  últimos  años  en  varios  países,  provocando  brotes  en   Conservar  a  2­8°C  hasta  la  fecha  de  caducidad.

Kenia,  India,  Italia  y  las  Américas,  lo  que  ha  tenido  importantes  consecuencias   6.  Antígeno  chikungunya  para  IgM  (1x9mL):  Este  vial  contiene  antígeno  
para  la  atención  de  la  salud. chikungunya  listo  para  usar  que  comprende  las  glicoproteínas  de  
Brotes  en  poblaciones  insulares  (Lamu,  Unión  de  las  Comoras)  han  resultado   la  envoltura  chikungunya.
en  epidemias  que  han  infectado  a  más  del  50%  de  la  población  [3]. Conservar  a  2­8°C  hasta  la  fecha  de  caducidad.

7.  Diluyente  de  conjugado  para  Chikungunya  (1x9  ml):  esta  solución  se  
usa  para  agregar  el  conjugado  de  enzima  al  ensayo  ELISA.  No  lo  
El  CHIKjj  DetectTM  IgM  ELISA  es  un  inmunoensayo  de  tipo  sándwich  ligado   use  sin  agregar  primero  el  conjugado  100X,  como  se  describe  en  
a  enzimas  para  la  detección  de  anticuerpos  IgM  humanos  dirigidos  a  las   la  sección  Preparación  de  reactivos .  Conservar  a  2­8°C  hasta  la  
glicoproteínas  de  la  cubierta  E2/E1  del  CHIKV. fecha  de  caducidad.
Los  pocillos  de  microtitulación  de  poliestireno  están  recubiertos  previamente   8.  Conjugado  100X  para  Chikungunya  (1x150  µL):  contiene  un  
con  anticuerpos  de  captura  para  IgM  humana.  El  control  positivo,  el  control   anticuerpo  monoclonal  marcado  con  peroxidasa  de  rábano  picante  
de  corte,  el  control  negativo  y  las  muestras  de  prueba  desconocidas  se   contra  el  virus  chikungunya.  Mezcle  bien  antes  de  usar.  El  
diluyen  en  un  tampón  de  dilución  de  muestra  y  luego  se  agregan  a  la  placa   conjugado  100X  se  agrega  al  diluyente  de  conjugado  antes  de  su  
ELISA.  Después  de  la  incubación  y  el  lavado,  se  agrega  a  cada  pozo  un   uso.  Guarde  el  conjugado  100X  sin  diluir  a  2­8  °C  hasta  que  
antígeno  CHIKV  [5]  [6]  listo  para  usar.  Después  de  un  paso  posterior  de   caduque.
incubación  y  lavado,  se  agrega  un  anticuerpo  monoclonal  conjugado  con  
HRP  específico  para  el  complejo  CHIKV  E2/E1  [7]  a

CE  CHIKjj  DetectTM  IgM  ELISA Inserte  el  n.º  de  pieza  900186­08  Fecha  de  vigencia:  24/09/2019 Página  1  de  7

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9.  Tampón  de  lavado  10X  (1  x  120  ml):  una  botella  de  tampón  de  lavado   •  Evite  la  contaminación  de  la  solución  de  sustrato  TMB  con
concentrado  10X  para  usar  como  se  indica  en  el  Procedimiento  de   el  conjugado  enzimático­HRP.
prueba.  Conservar  a  2­8°C  hasta  la  fecha  de  caducidad. •  Use  ropa  protectora,  protección  para  los  ojos  y  guantes  desechables  
10.  Sustrato  TMB  líquido  (1x12mL):  Para  ser  utilizado  como  se  indica  en  el   mientras  realiza  el  ensayo.  Lávese  bien  las  manos  después.  •  Utilice  
Procedimiento  de  prueba.  Conservar  a  2­8°C  hasta  la  fecha  de  caducidad.
una  punta  de  

Nota:  Este  sustrato  es  sensible  a  la  luz  y  debe  almacenarse  en  la   pipeta  desechable  y  limpia  para  cada  reactivo,
botella  original. Estándar,  control  o  muestra.  •  Cubra  
11.  Solución  de  parada  (1x9mL):  Para  ser  utilizada  para  terminar  la  reacción   el  área  de  trabajo  con  papel  absorbente  desechable.
como  se  indica  en  el  Procedimiento  de  prueba.  Conservar  a  2­8°C  hasta  
ADVERTENCIA:  PELIGRO  BIOLÓGICO  POTENCIAL
la  fecha  de  caducidad.
MATERIAL
Precaución:  este  es  un  ácido  fuerte,  use  guantes  protectores,  
máscara  y  gafas  de  seguridad.  Deseche  todos  los  materiales  de   Este  kit  puede  contener  reactivos  elaborados  con  suero  o  plasma  humano.  
acuerdo  con  las  normas  y  reglamentos  de  seguridad. El  suero  o  plasma  utilizado  ha  sido  inactivado  por  calor  a  menos  que  se  
indique  lo  contrario.  Manipule  todos  los  sueros  y  kits  utilizados  como  si  
contuvieran  agentes  infecciosos.  Observe  las  precauciones  establecidas  
MATERIALES  NECESARIOS  PERO  NO  SUMINISTRADOS
contra  los  peligros  microbiológicos  mientras  realiza  todos  los  procedimientos  
•  Espectrofotómetro  ELISA  con  capacidad  de  absorbancia
y  siga  los  procedimientos  estándar  para  la  eliminación  adecuada  de  las  
medición  a  450  nm
muestras.
• Agua  biológica  o  de  alta  calidad  •  
Bomba  de  vacío  •   PELIGRO  QUÍMICO:  Las  hojas  
Lavador  de  placas  automático  •   de  datos  de  seguridad  (SDS)  están  disponibles  para  todos  los  componentes  
Incubador  a  37°C  sin  humidificación  ni  CO2 de  este  kit.  Revise  todas  las  SDS  correspondientes  antes  de  realizar  este  
• Pipetas  monocanal  de  1­10  µL,  pipetas  monocanal  de  50­200  µL ensayo.  Evite  todo  contacto  entre  las  manos  y  los  ojos  o  las  membranas  
Pipetas  multicanal mucosas  durante  la  prueba.  Si  se  produce  el  contacto,  consulte  la  SDS  
• Tubos  de  polipropileno  o  placas  de  dilución  de  96  pocillos correspondiente  para  el  tratamiento  adecuado.
• Parafilm  o  tapas  de  placas  similares  •  
Temporizador RECOGIDA  Y  PREPARACIÓN  DE  MUESTRAS
• Vórtice
•  Debe  utilizarse  suero  humano  con  este  ensayo.  Los  reactivos  no  se  
PRECAUCIONES
han  optimizado  ni  probado  con  sangre  total  o  plasma,  por  lo  que  
•  Sólo  para  uso  profesional  de  diagnóstico  in  vitro .  •  No   estas  formas  de  sangre  no  se  pueden  analizar  directamente.
para  la  venta  o  distribución  en  los  Estados  Unidos  de  América.  •  Todos  los  
materiales  de  origen  humano  utilizados  en  la  preparación  de  los  controles   •  Retire  el  suero  del  coágulo  de  glóbulos  rojos  tan  pronto
han  resultado  negativos  para  los  anticuerpos  contra  el  antígeno  de   como  sea  posible  para  evitar  la  hemólisis.
superficie  del  VIH  1  y  2,  la  hepatitis  C  y  la  hepatitis  B.  Sin  embargo,   •  Las  pruebas  deben  realizarse  lo  antes  posible  después  de  la  
ningún  método  de  prueba  puede  garantizar  una  eficiencia  o  sensibilidad  del  100  %. recolección.  No  deje  los  sueros  a  temperatura  ambiente  durante  
Por  lo  tanto,  todos  los  controles  y  antígenos  humanos  deben   períodos  prolongados.  
manipularse  como  material  potencialmente  infeccioso.  Los  Centros   •  Se  debe  utilizar  suero  y  observar  las  precauciones  habituales  para  la  
para  el  Control  y  la  Prevención  de  Enfermedades  y  los  Institutos  
venopunción.  Las  muestras  pueden  almacenarse  a  2­8  °C  durante  
Nacionales  de  Salud  recomiendan  que  los  agentes  potencialmente  
un  máximo  de  7  días  o  congelarse  a  ­20  °C  o  menos  durante  un  
infecciosos  se  manejen  en  el  Nivel  de  Bioseguridad  2.
máximo  de  30  días.  Para  mantener  la  longevidad  a  largo  plazo  
•  Es  necesario  comprender  a  fondo  este  prospecto  para  utilizar  el  producto  
del  suero,  guárdelo  a  ­70  °C.  Evite  congelar  y  descongelar  
con  éxito.  Solo  se  obtendrán  resultados  confiables  mediante  el  uso  de  
repetidamente  las  muestras.  •  Las  
técnicas  de  laboratorio  precisas  y  siguiendo  exactamente  el  prospecto.  
muestras  congeladas  deben  descongelarse  a  temperatura  ambiente  y  
•  No  mezcle  varios  lotes  de  cualquier  componente  del  kit  dentro  de  
mezclarse  completamente  mediante  agitación  suave  o  inversión  
un  ensayo  individual.  •  No  utilice  ningún  componente  más  allá  de  la  fecha  
antes  de  su  uso.  Siempre  centrifugado  rápido  antes  
de  caducidad
de  usar.  •  Si  se  van  a  enviar  sueros,  deben  embalarse  de  acuerdo  con  
que  se  muestra  en  su  etiqueta.
las  normas  federales  que  rigen  el  transporte  de  agentes  
infecciosos.  •  No  utilice  los  sueros  si  se  
•  Evite  la  exposición  de  los  reactivos  al  calor  excesivo  o  a  la
observa  algún  indicio  de  crecimiento.
luz  del  sol  durante  el  almacenamiento  y  la  incubación.
•  Algunos  reactivos  pueden  formar  un  ligero  precipitado,  mezcle  suavemente  
antes  de  
usar.  •  Un  lavado  incompleto  afectará  negativamente  el  resultado  y  la  
precisión  del  
ensayo.  •  Para  minimizar  la  desviación  potencial  del  ensayo  debido  a  la  
variación  en  el  tiempo  de  incubación  del  sustrato,  se  debe  tener  
cuidado  de  agregar  la  solución  de  parada  en  los  pozos  en  el  mismo  
orden  y  velocidad  que  se  usó  para  
agregar  la  solución  de  TMB.  •  Evitar  la  contaminación  microbiana  de  los  reactivos.

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3.  Añada  50  µL  de  los  controles  diluidos  1/100  y  las  muestras  de  suero  
PROCEDIMIENTO  DE  PRUEBA desconocidas  a  los  pocillos  de  las  placas  ELISA  correspondientes.
4.  Cubra  la  placa  con  parafilm,  como  se  muestra  a  continuación.
Lleve  todos  los  reactivos  y  muestras  del  kit  a  temperatura  ambiente  (~25  °C)  
Nota:  Esto  es  para  garantizar  una  distribución  uniforme  de  la  temperatura  en  todos  los  
antes  de  su  uso.  Mezcle  bien  los  reactivos  y  las  muestras  antes  de  su  uso  
pocillos  desde  el  fondo  y  los  lados;  cualquier  parafilm  adicional  se  puede  cortar  una  vez  
invirtiéndolos  suavemente.
que  se  sella  la  parte  superior  para  bloquear  la  evaporación.
PRECAUCIÓN:  ESTE  KIT  NO  HA  SIDO  OPTIMIZADO  POR  INBIOS  PARA  
SU  USO  CON  NINGÚN  SISTEMA  AUTOMATIZADO  DE  PROCESAMIENTO  
DE  ELISA  EN  PARTICULAR.  EL  USO  CON  UN  SISTEMA  AUTOMATIZADO  
DE  PROCESAMIENTO  ELISA  REQUIRIRÁ  UNA  VALIDACIÓN  ADECUADA  
PARA  ASEGURAR  QUE  LOS  RESULTADOS  SEAN  EQUIVALENTES  A  LAS  
EXPECTATIVAS  DESCRITAS  EN  ESTE  PROSPECTO.  PUEDEN  
REQUERIRSE  MODIFICACIONES  AL  PROTOCOLO  DE  ESTOS  SISTEMAS  
Y/O  DIFERENTES  VOLÚMENES  DE  REACTIVOS.
5.  Incube  a  37°C  durante  30  minutos  (±  1  minuto)  en  una  incubadora.  La  
incubadora  debe  calibrarse  correctamente  y  verificarse  para  mantener  
una  temperatura  de  37  °C  ±  2  °C  con  un  termómetro  de  referencia  
Preparación  de  reactivos:  •  
externo.
Preparación  de  tampón  de  lavado  1X  Diluya  
el  tampón  de  lavado  10X  a  1X  con  agua  biológica  o  de  alto  grado.  
Nota:  No  apile  las  placas  una  encima  de  la  otra.  Deben  extenderse  como  
Para  preparar  una  solución  de  tampón  de  lavado  1X,  mezcle  120  
una  sola  capa.  Esto  es  muy  importante  para  una  distribución  uniforme  
ml  de  tampón  de  lavado  10X  con  1080  ml  de  agua  destilada  (o  
de  la  temperatura.  No  use  CO2  u  otros  gases.  No  coloque  las  placas  en  
desionizada).  Mezcle  bien  para  asegurarse  de  que  cualquier  
contacto  con  sustancias  húmedas,  como  toallas  de  papel  húmedas,  etc.
precipitado  se  disuelva  y  que  la  solución  sea  uniforme.  Una  vez  
diluida  a  1X,  la  solución  se  puede  almacenar  a  temperatura  
ambiente  hasta  por  6  meses.
Compruebe  si  hay  contaminación  antes  de  su  uso.  Desechar  si  se  
sospecha  contaminación.  •  Pozos  
de  microtitulación
Seleccione  las  tiras  correspondientes  según  el  número  de  muestras  
a  analizar.  Evalúe  la  placa  para  asegurarse  de  que  las  tiras  estén  
planas  y  correctamente  alineadas  con  la  placa.  Los  pocillos  
restantes  sin  usar  deben  volver  a  empaquetarse  y  sellarse  
inmediatamente  con  el  desecante  suministrado  y  almacenarse  a  
2­8  °C  hasta  que  estén  listos  para  usar  o  caduquen.  •  
Preparación  del  Conjugado  Enzimático  de  Chikungunya  Listo  para  Usar  
Agregue  90  µL  de  
Conjugado  100X  para  Chikungunya  directamente  a  la  botella  de  9  
mL  de  Diluyente  de  Conjugado  para  Chikungunya  (1  parte:  100  
partes).  Mezclar  invirtiendo  la  solución  varias  veces.  Para  
MÉTODO  CORRECTO
volúmenes  más  pequeños,  divida  en  alícuotas  el  volumen  requerido  
de  diluyente  de  conjugado  en  un  tubo  de  ensayo  de  polipropileno  
limpio  y  separado  y  agregue  el  volumen  apropiado  de  100X  
Conjugate  for  Chikungunya  al  diluyente  en  el  tubo  de  ensayo.  
Prepare  solo  la  cantidad  necesaria  para  una  prueba  determinada.
6.  Después  de  la  incubación,  lave  la  placa  6  veces  con  un  lavador  de  placas  
automático  utilizando  tampón  de  lavado  1X.  Utilice  300  μl  por  pocillo  en  
PROCEDIMIENTO  DE  ENSAYO cada  ciclo  de  lavado.
7.  Agregue  50  µL  del  Antígeno  Chikungunya  para  IgM  a  cada
1.  Los  controles  positivo,  de  corte  y  negativo  deben  analizarse  por  duplicado   Placa  ELISA  bien.
(y  ejecutarse  cada  vez  que  se  realiza  el  análisis  en  cada  placa).  Las   8.  Cubrir  la  placa  con  parafilm.
muestras  de  suero  desconocidas  pueden  analizarse  en  singlete.  Sin   9.  Incube  a  37°C  durante  30  minutos  (±  1  minuto)  en  un
embargo,  se  recomienda  analizar  las  muestras  por  duplicado  hasta  que   incubadora.
el  operador  se  familiarice  con  el  ensayo. 10.  Durante  la  incubación,  prepare  un  volumen  nuevo  de  Conjugado  
2.  Diluya  los  controles  y  las  muestras  de  suero  desconocidas  en  el  tampón  de   enzimático  listo  para  usar  como  se  describe  en  la  sección  Preparación  
dilución  de  muestras  para  Chikungunya.  Las  muestras  deben  diluirse   de  reactivos  (p.  ej.,  agregue  90  µL  de  Conjugado  100X  para  Chikungunya  
1/100  en  un  pocillo  de  placa  de  dilución  limpio  o  en  un  tubo  de  ensayo   directamente  a  la  botella  de  9  mL  de  Diluyente  de  conjugado  para  
de  polipropileno  limpio  separado.  Por  ejemplo,  diluya  4  µL  de  muestra   Chikungunya,  1  parte:  100  partes).  Prepare  solo  la  cantidad  mínima  de  
en  396  µL  de  Tampón  de  dilución  de  muestra.  Mezcle  bien  pipeteando   conjugado  enzimático  listo  para  usar  necesaria  para  la  ejecución  del  
hacia  arriba  y  hacia  abajo  varias  veces. ensayo.

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11.  Después  de  la  incubación,  lave  la  placa  6  veces  con  un  lavador  de  placas   una  pipeta  multicanal.  Nota:  Liquid  TMB  es  sensible  a  la  luz.  Evite  la  
automático  utilizando  tampón  de  lavado  1X.  Utilice  300  μl  por  pocillo  en  cada   exposición  a  fuentes  de  luz  innecesarias.
ciclo  de  lavado. 17.  Incube  la  placa  en  la  oscuridad,  a  temperatura  ambiente  durante  10  minutos  
12.  Agregue  50  µl  del  conjugado  enzimático  listo  para  usar  a  cada (±  30  segundos).
Placa  ELISA  bien. 18.  Agregue  50  µL  de  solución  de  parada  en  todos  los  pocillos  con  una  pipeta  
13.  Cubrir  la  placa  con  parafilm. multicanal  y  deje  reposar  la  placa,  sin  tapar,  a  temperatura  ambiente  durante  
14.  Incubar  a  37°C  durante  30  minutos  (±  1  minuto)  en  un 1  minuto.
incubadora. 19.  Lea  el  valor  de  densidad  óptica  a  450  nm  (OD450)  con  un  lector  de  microplacas.  
15.  Después  de  la  incubación,  lave  la  placa  6  veces  con  un  lavador  de  placas   NO  RESTE  NI  NORMALICE  NINGÚN  POZO  O  VALORES  EN  BLANCO.
automático  utilizando  tampón  de  lavado  1X.  Utilice  300  μl  por  pocillo  en  cada  
ciclo  de  lavado. 20.  Analice  los  datos  como  se  muestra  en  la  sección  Control  de  calidad  y  la  
16.  Aplique  75  µL  de  sustrato  Liquid  TMB  en  todos  los  pozos  usando sección  Interpretación  de  los  resultados.

Guia  de  referencia  rapida

Diluya  los  controles  y  las  muestras  al  1/100  en  el  tampón  de  dilución  de  muestras  (4  
ul:396  ul).  Los  controles  deben  analizarse  por  duplicado.

Añada  50  ul  de  controles  y  muestras  diluidos  a  los  pocillos  
de  las  placas  ELISA  correspondientes.

Cubrir  con  parafilm,  incubar  30  minutos,  37°C.

Lava  platos  6x.  Agregue  50  µL  del  Antígeno  Chikungunya  para  IgM  a  cada  pocillo  de  la  
placa  ELISA.

Cubrir  con  parafilm,  incubar  30  minutos,  37°C.

Prepare  un  volumen  nuevo  de  conjugado  enzimático  listo  para  usar  (p.  ej.,  agregue  90  µl  
de  conjugado  100X  para  chikungunya  directamente  a  la  botella  de  9  ml  de  diluyente  de  
conjugado  para  chikungunya).  Prepare  solo  el  volumen  mínimo  necesario  para  la  
ejecución  del  ensayo.

Lava  platos  6x.  Agregue  50  µl  de  conjugado  enzimático  listo  para  usar  a  cada  pocillo  de  la  placa  
ELISA.

Cubrir  con  parafilm,  incubar  30  minutos,  37°C.

Lava  platos  6x.  Agregue  75  μL  de  TMB  a  todos  los  pocillos.  Evite  la  exposición  a  
la  luz.  Incubar  10  minutos  a  temperatura  ambiente.

Agregue  50  µL  de  solución  de  parada  a  cada  pocillo.
Mida  la  OD450  (NO  reste  las  longitudes  de  onda  
de  fondo  o  de  referencia).

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CONTROL  DE  CALIDAD Calcule  el  valor  medio  (promedio)  del  control  de  corte  de  Chikungunya  
IgM.

Cada  kit  contiene  sueros  de  control  positivo,  de  corte  y  negativo.
Se  deben  ejecutar  controles  positivos,  de  corte  y  negativos  en  cada  
placa  analizada.  Los  valores  aceptables  de  densidad  óptica  (OD)  para   Ejemplo  3:  control  de  corte  medio
estos  controles  se  encuentran  en  la  tabla  de  especificaciones  a  
continuación.  Los  controles  negativo  y  positivo  están  destinados  a   DO450
monitorear  la  falla  sustancial  del  reactivo.  La  prueba  no  es  válida  y   replicar  1 0.182
debe  repetirse  si  alguno  de  los  controles  no  cumple  con  las  especificaciones.
replicar  2 0.194
El  control  de  corte  se  proporciona  para  establecer  un  umbral  por  encima  
del  cual  una  muestra  se  considera  reactiva.  Los  procedimientos  de  control   Suma 0.376
de  calidad  (QC)  deben  realizarse  de  conformidad  con  las  reglamentaciones  
locales,  estatales  y/o  federales  o  los  requisitos  de  acreditación  y  los  
procedimientos  de  QC  estándar  del  propio  laboratorio  del  usuario.  Se   DO450  media  =  0,376  ÷  2  =  0,188  Valor  
recomienda  que  el  usuario  consulte  CLSI  C24  y  42  CFR  493.1256  para   de  control  de  corte  =  0,188
obtener  orientación  sobre  las  prácticas  de  control  de  calidad  adecuadas.  
Los  resultados  a  continuación  se  brindan  estrictamente  con  fines  de  
orientación  únicamente.  El  análisis  es  aplicable  cuando  se  utilizan  
únicamente  lecturas  espectrofotométricas  RAW  y  cuando  no  se  emplea  la  
sustracción  automática  de  agua  o  blancos  de  reactivos. Cálculo  de  la  Capacidad  de  Discriminación  de  Chikungunya  IgM:  La  
Capacidad  de  Discriminación  (RPC/NC)  para  ELISA  se  define  como  la  
Calcule  el  valor  medio  (promedio)  del  control  negativo  Chikungunya   relación  entre  el  Control  Positivo  y  el  Control  Negativo.
IgM.

Ejemplo  4:  Capacidad  de  Discriminación  (RPC/NC)
Ejemplo  1:  control  negativo  medio
DO450
DO450
Media  positiva  OD450 1.459
replicar  1 0.084
Media  negativa  OD450 0.089
replicar  2 0.094
Relación 16.39
Suma 0.178

RPC/CN  =  1,459  ÷  0,089  =  16,39
DO450  media  =  0,178  ÷  2  =  0,089

Requisitos  de  control  de  calidad:  Se  deben  cumplir  los  siguientes  
Calcule  el  valor  medio  (promedio)  del  control  positivo  Chikungunya  
IgM. criterios  para  que  el  ensayo  CHIKjj  DetectTM  IgM  ELISA  se  
considere  válido.

Ejemplo  2:  control  positivo  medio Requisitos  de  control  de  calidad

DO450 Requisito

replicar  1 1.540 Media  negativa  OD450 ≤  0.200

replicar  2 1.378 Media  positiva  OD450 ≥  0.500

Suma 2.918 >  Media  negativa

Corte  medio  OD450
Controlar  OD450
RPC/NC ≥  5,00
DO450  media  =  2,918  ÷  2  =  1,459

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Sitio  2:  un  estudio  retrospectivo  utilizó  muestras  archivadas  de  personas  que  
PARA  RESULTADOS  PRECISOS  NO
mostraban  signos  y  síntomas  de  infección  por  chikungunya.  Las  muestras  se  
RESTE  LOS  VALORES  DEL  POZO  “EN  BLANCO” analizaron  en  pruebas  de  referencia  compuestas  CHIKjj  Detect™  IgM  ELISA  
O  LONGITUDES  DE  ONDA  DE  REFERENCIA y  ELISA/IFA  en  un  laboratorio  en  el  oeste  de  los  Estados  Unidos.

INTERPRETACIÓN  DE  RESULTADOS compuesto  ELISA  e  IFA
Positivo  Negativo  Total  7  12  19
Cálculo  del  valor  de  la  relación  del  estado  inmunitario  (ISR)  de  IgM  contra   CHIKjj Positivo   7   0  
Chikungunya:  El  valor  de  ISR  para  cada  muestra  se  define  como  la  relación   IgM Negativo   0   12  
entre  la  muestra  de  prueba  OD450  y  el  valor  medio  del  control  de  corte. ELISA Total   7 12
Positivo  %  de  acuerdo:  100  %  [95  %  IC:  64,6­100  %]*  Negativo  %  de  
acuerdo:  100  %  [95  %  IC:  75,8­100  %]*  *  Método  de  puntuación  de  
Wilson  para  calcular  intervalos  de  confianza  del  95  %
Ejemplo  5:  Valor  ISR
Sitio  3:  un  estudio  retrospectivo  utilizó  muestras  archivadas  de  personas  que  
DO450 mostraban  signos  y  síntomas  de  infección  por  chikungunya.  Las  muestras  se  
0.876 analizaron  tanto  en  CHIKjj  Detect™  IgM  ELISA  como  en  IFA  en  un  laboratorio  
Muestra  de  prueba  media  OD450
en  el  este  de  los  Estados  Unidos.
Valor  de  control  de  corte 0.188
IFA
Positivo  Negativo  Total  23  0  23
TSI  =  0,876  ÷  0,188  =  4,66
CHIKjj Positivo   22  
IgM Negativo   0   1  

Las  muestras  con  valores  de  ISR  ≥  1,0  se  consideran  "reactivas"  y  las   ELISA Total   22 0  1

muestras  con  valores  de  ISR  <  1,0  se  consideran  "no  reactivas".
Positivo  %  de  concordancia:  100  %  [IC  95  %:  85,1­100  %]*  *Método  
Cualquier  muestra  en  el  rango  de  0.90  <  Valor  ISR  <  1.10,  se  debe  considerar  
de  puntuación  de  Wilson  para  calcular  intervalos  de  confianza  del  95  %
reanalizar  y  evaluar  la  muestra  por  duplicado  para  verificar  el  estado  de  la  
muestra. Estudio  de  reproducibilidad:  
el  estudio  de  reproducibilidad  se  realizó  en  InBios  International,  Inc.  3  personas  
Valor  ISR diferentes  realizaron  pruebas  en  5  días  diferentes  cada  una.
Interpretación
Los  operadores  analizaron  el  mismo  panel  de  muestras  por  triplicado  utilizando  
"No  reactivo".  Se  considera  que  la  muestra  no   el  mismo  lote  de  CHIKjj  Detect™  IgM  ELISA.  Todos  los  ensayos  se  realizaron  
<  1.0 tiene  anticuerpos  IgM  específicos  para  chikungunya   de  acuerdo  con  el  prospecto  del  kit.  El  panel  constaba  de  cuatro  especímenes  
“Reactiva”.  Se   de  suero  clínico  diluidos  en  una  matriz  de  analito  negativo  e  incluía  un  
espécimen  positivo,  dos  especímenes  positivos  débiles  y  un  espécimen  
considera  que  la  muestra  tiene  anticuerpos  IgM  
≥  1,0 negativo.  Las  diluciones  de  suero  seleccionadas  también  aseguraron  que  la  
específicos  para  chikungunya.  Repita  la  muestra  
concentración  del  analito  en  las  muestras  representara  un  rango  clínicamente  
de  prueba  por  duplicado  
relevante.  El  %  CV  de  precisión  total  (a  partir  de  la  desviación  estándar  "total"  
para  verificar  los  resultados.
0,90  <  RSI  <  1,10 de  los  resultados  por  triplicado)  para  los  valores  brutos  de  OD  e  ISR  se  
muestra  en  la  siguiente  tabla.  El  %  CV  de  precisión  total  de  CHIKjj  Detect™  
IgM  ELISA  (a  partir  de  la  desviación  estándar  "total"  de  los  resultados  por  
CARACTERÍSTICAS  DE  PRESENTACIÓN triplicado)  para  los  valores  de  OD  sin  procesar  varió  entre  15  y  28  %,  según  la  
muestra.  El  %  CV  de  precisión  total  de  ISR  varió  de  12  a  17,5  %,  según  la  
Estudios  de  sensibilidad  y  especificidad:   muestra.  Esta  medición  de  la  variabilidad  incluía  inherentemente  el  ruido  
Sitio  1:  un  estudio  retrospectivo  utilizó  muestras  archivadas  de  personas  que   debido  a  la  variación  de  operador  a  operador.
mostraban  signos  y  síntomas  de  infección  por  chikungunya.  Las  muestras  se  
analizaron  tanto  en  CHIKjj  Detect™  IgM  ELISA  como  en  una  prueba  de  
neutralización  en  un  laboratorio  en  Europa. %CVTotal  –  OD450  %CVTotal  ­  ISR  21.347  
Control  positivo 12.096  15.023  17.018  17.757  0.000
Prueba  de  neutralización
Control  negativo
Positivo  Negativo  Total  10  10  0  5  10  15 Control  de  corte
CHIKjj Positivo   0   panel  #1   17.231 11.828
IgM Negativo   5   panel  #2   27.328   17.143  
ELISA Total   5 panel  #3   26.591   15.610  
panel  #4 24.895 16.613
Positivo  %  de  acuerdo:  100  %  [95  %  IC:  72,2­100  %]*  Negativo  %  de  
acuerdo:  100  %  [95  %  IC:  56,6­100  %]*  *  Método  de  puntuación  de  

Wilson  para  calcular  intervalos  de  confianza  del  95  %

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Estudio  de  reactividad  
cruzada:  Los  sueros  que  dieron  positivo  para  otros  patógenos  con  reactividad   REFERENCIAS
cruzada  potencial  se  evaluaron  con  el  ELISA  CHIKjj  Detect™  IgM  para  
determinar  la  reactividad  cruzada. [1]  SC  Weaver,  JE  Osorio,  JA  Livengood,  R.  Chen  y  DT
Stinchcomb,  "Virus  chikungunya  y  perspectivas  de  una  vacuna",
Número  de   Número  de   %  Especificidad Experto  Rev.  Vacunas,  vol.  11,  núm.  9,  págs.  1087­1101,  2012.
Enfermedad [95%  de  confianza [2]  BL  Tang,  "La  biología  celular  de  la  infección  por  el  virus  Chikungunya",
muestras positivos Intervalo]*
Microbiología  celular,  vol.  14,  núm.  9,  págs.  1354­1363,  2012.
66,7%  
3 1 [3]  JE  Staples,  RF  Breiman  y  AM  Powers,  "Chikungunya
Virus  de  Epstein  Barr
[20,8­93,9%]   Fiebre:  una  revisión  epidemiológica  de  una  enfermedad  infecciosa  reemergente",  
Anticuerpo   100%   Infecciones  emergentes,  vol.  49,  págs.  942­948,  2009.
3 0
antinuclear [43,9­100%]   [4]  SC  Weaver,  "Llegada  del  virus  chikungunya  al  nuevo  mundo:  
100%   perspectivas  de  propagación  e  impacto  en  la  salud  pública"
factor  reumatoide 3 0
[43,9­100%] PLOST  Enfermedades  tropicales  desatendidas,  vol.  8,  núm.  6,  pág.  e2921,  
2014.
Virus  del  herpes   100  %  
3 0
simple [43,9­100  %]   [5]  F.  Nasar,  G.  Palacios,  RV  Gorchakov,  H.  Guzmán,  AP
100  %   Travassos  Da  Rosa,  N.  Savji,  VL  Popov,  MB  Sherman,  WI
Virus  de  
Lipkin,  RB  Tesh  y  SC  Weaver,  "Virus  de  Eilat,  un  alfavirus  único  con  
inmunodeficiencia   3 0 [43,9­100  %]
rango  de  huéspedes  restringido  a  insectos  por  replicación  de  ARN",  
humana
PNAS,  vol.  109,  núm.  36,  págs.  14622­14627,  2012.
100  %  
virus  de  la  hepatitis  C 3 0 [6]  Nasar  F,  Gorchakov  RV,  Tesh  RB,  Weaver  SC.  La  restricción  del  rango  de  
[43,9­100  %]  
huéspedes  del  virus  de  Eilat  está  presente  en  múltiples  niveles  del  ciclo  de  vida  
100  %   del  virus.  J  Virol.  2015;89(2):1404­18.
Virus  del  Nilo  Occidental dieciséis 0
[80,6­100  %] [7]  Pal  P,  Dowd  KA,  Brien  JD,  Edeling  MA,  Gorlatov  S,  Johnson  S,  Lee  I,  Akahata  
100  %   W,  Nabel  GJ,  Richter  MK,  Smit  JM,  Fremont  DH,  Pierson  TC,  Heise  MT,  
virus  del  dengue 30 0
[88,6­100  %] Diamond  MS.  Desarrollo  de  una  terapia  combinada  de  anticuerpos  

100  %   monoclonales  altamente  protectora  contra  el  virus  Chikungunya.  Patog  
Virus  de  la  
14 0 de  PLoS.  2013;9(4):e1003312.
encefalitis  japonesa   [78,5­100  %]  
Virus  de  la   100  %  
dieciséis 0
encefalitis  de  St.  Louis [80,6­100  %]
Virus  de  la   100%   InBios  Internacional,  Inc.
3 0
encefalitis  de  La  Crosse [43,9­100%]  0%   307  Westlake  Ave  N,  Suite  300  Seattle,  
Virus  de  la  encefalitis   WA  98109  EE.  UU .  www.inbios.com
3 3
equina  del  este [0­56,1%]

Número  gratuito  en  EE.  UU.:  1­866­INBIOS1
Estudio  de  interferencia:   206­344­5821  (Internacional)
Se  analizó  el  efecto  de  cuatro  sustancias  potencialmente  interferentes  que  se  
encuentran  comúnmente  en  el  suero  en  la  prueba  ELISA  CHIKjj  Detect™   N.º  de  pieza  del  inserto:  900186­08
IgM.  Además  de  los  controles  positivo,  negativo  y  de  corte  del  kit,  se  analizó   Fecha  de  vigencia:  24/09/2019
un  panel  de  cuatro  especímenes  clínicos  simulados,  cuya  intensidad  varió  de   CHKM­C
negativo  a  débilmente  positivo  a  fuertemente  positivo.  Las  cinco  sustancias  
potencialmente  interferentes  fueron  bilirrubina  (0,2  mg/ml),  colesterol  (5  mg/
ml),  triglicéridos  (30  mg/ml)  y  hemoglobina  (160  mg/ml).

No  hubo  efectos  estadísticamente  significativos  de  ninguna  de  las  sustancias  
en  las  concentraciones  probadas.  Todas  las  sustancias  se  probaron  en  
concentraciones  por  encima  de  los  niveles  fisiológicos  normales. Representante  autorizado  europeo  CEpartner4U,  
Esdoornlaan  13,  3951DB  Maarn.
Los  países  bajos
LIMITACIONES
•  Sólo  para  uso  diagnóstico  in  vitro.  No  para  la  venta  o  distribución
en  los  Estados  Unidos  de  América.
•  Se  debe  considerar  la  reactividad  serológica  cruzada  con  otras  muestras  de  
alfavirus.  Ciertos  sueros  (p.  ej.,  EEE­positivo,  HAMA­positivo,  etc.)  
pueden  dar  resultados  falsos  positivos.
Por  lo  tanto,  cualquier  suero  positivo  debe  confirmarse  con  otras  pruebas.

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