10/01/2018

Técnicas Serológicas para

Diagnóstico

Clases de Pruebas Serológicas

Pruebas Directas :
Se utilizan en la búsqueda del microorganismo o
alguno de sus componentes.

Pruebas Indirectas:
Se utilizan en la búsqueda de anticuerpos
formados en respuesta a la infección por un
microorganismo.

a).- Pruebas primarias.

b).- Pruebas secundarias.

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Pruebas Serológicas Indirectas

a).-Pruebas primarias: Son aquellas pruebas en las cuales la
reacción antígeno anticuerpo no se manifiesta de forma visible al
ojo humano, por lo cual para evidenciarse se requiere de técnicas
o procedimientos distintos.
•Fijación de complemento
•Inmunofluorescencia
•Radioinmunoensayo (RIA)
•Pruebas inmunoenzimáticas (ELISA)
•Inmunoeletrotransferencia (Western Blot)
•Inmunocromatografía

b).-Pruebas secundarias: Son aquellas en las cuales la reacción

antígeno-anticuerpo dá lugar a una manifestación visible,
permitiéndose detectar a simple vista.
•Precipitación
•Aglutinación

Respuesta Inmunológica y
Diagnóstico
• Contacto con un antígeno por primera vez...
• Aparición precoz de Acs clase IgM
• Persistencia corta
• En general: infección aguda
• Aparición más tardía de Acs clase IgG
• Persistencia prolongada
• Seroconversión

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Seroconversión
• Incremento (generalmente 4 veces) en la
concentración de anticuerpos específicos
(IgG) al comparar dos muestras separadas
en el tiempo, habitualmente 2 semanas

Infección

Estímulo antigénico

Selección de Pruebas Serológicas

La selección de una prueba serológica se

realiza en base a cuatro criterios:

• Sensibilidad
• Especificidad
• Valor Predictivo Positivo
• Valor predictivo Negativo

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Selección de Pruebas Serológicas

• Sensibilidad: probabilidad de que un individuo

enfermo de positivo en el test (% de (+) en grupo de
enfermos.

• Especificidad: probabilidad de que un individuo

sano de negativo en el test (% de (-) detectados en
grupos de sanos)

Selección de Pruebas Serológicas

• Valor Predictivo Positivo: Proporción de verdaderos

positivos entre aquellos que se han detectado
positivos por la prueba

• Valor Predictivo Negativo: Proporción de

verdaderos negativos entre aquellos que se han
detectado negativos por la prueba

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Tipos de Pruebas Serológicas

• Técnicas rápidas y automatizadas

• Técnicas cualitativas y cuantitativas
• Título de un suero: Tras diluciones seriadas
y crecientes de un suero, la última dilución
que da un resultado positivo
• Perfiles

Pruebas de Precipitación
Es una técnica desarrollada por Heidelberg en 1930 y se
caracteriza por contener el antígeno en dilución en una solución
amortiguadora y al ponerse en contacto antígeno y anticuerpo en
iguales concentraciones se precipitan.
Son técnicas muy versátiles que pueden ser utilizadas para
diagnosticar:

Klebsiella pneumoniae
Meningitis Haemophilus influenzae tipo b
Streptococcus pneumoniae
Cryptococcus neoformans

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Prueba de Precipitación

Antígeno soluble
Exceso de
antígeno

Anillo de
Equvalencia precipitación

Exceso de
anticuerpo
Anticuerpo

Prueba de Inmunodifusión

Ac Ag

Banda de precipitación

Ac Ag

Bandas de precipitación

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Electroforesis
Ag

Agar gel
Ag

anticuerpo

bandas
de precipitación

Pruebas de Aglutinación

Son técnicas en las cuales el antígeno y el anticuerpo se

encuentra suspendidos en un medio líquido. Para que ocurra es
necesario la presencia del antígeno en suspensión, un sistema
amortiguador y anticuerpos en dilución.

Utilidad en:
• Fiebres entéricas por Salmonella
• Brucelosis
• Tipificación sanguínea
• Prueba de Coombs

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Hemaglutinación

anticuerpo pocillo

células células sanguíneas no

sanguíneas aglutinadas (botón
aglutinadas rojo)

Prueba de Coombs

+ +

anticuerpos complejo anti Ig humana aglutinación

hematíes
anti Rh célula-Ac

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Fijación de Complemento

Prueba desarrollada por Bordet, tiene como fundamento la

utilización de complemento y eritrocitos de carnero sensibilizados
con anti ig-G.

Utilidad en:
• Chagas
• Histoplasmosis
• Coccidioidomicosis
• Paracoccidioidomicosis

Fijación de complemento
Añadir complemento Añadir hematíes-Ac.
Añadir antígeno
PRUEBA NEGATIVA

Suero sin
anticuerpos

No formación
de complejos Complemento Células rojas
libre lisadas

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Fijación de complemento
Añadir antígeno Añadir complemento Añadir hematíes-Ac.

PRUEBA POSITIVA

Suero con
anticuerpos

Formación Fijación del Células rojas

de complejos complemento íntegras

Inmunofluorescencia
En esta prueba se utilizan anticuerpos marcados con
fluoresceína y al ser visto bajo luz ultravioleta provocan la emisión
de radiación y así son detectados.

La prueba pueden ser…

a).-Directa: El anticuerpo marcado con fluoresceína detecta a
microorganismos o sus componentes:
•Rabia
•Virus sincicial respiratorio

b)Indirecta: Se detectan los anticuerpos formado en respuesta a

una infección y los anticuerpos marcados son anti-igG:
• Sífilis

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Inmunofluorescencia
Colorante
Anticuerpo
fluorescente
Colorante Anticuerpo anti
fluorescente Ac. original
Antígeno

Superficie celular

Anticuerpo

ELISA
Prueba en la cual los anticuerpos están marcados con una
enzima y al utilizar un sustrato específico la enzima detecta la
presencia de anticuerpos o antígenos específicos

Las pruebas pueden ser…

a).- Captura: Principalmente se detectan componentes de
microorganismos:
•Antígeno de superficie VHB
•Antígenos del virus del dengue (NS1)

b)Indirecta: se detectan los anticuerpos formado en respuesta a

una infección:
• VIH
• VHA
• VHC

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ELISA
Ag unido a fase sólida
+
Suero

Lavado

+
Anti-Ac*

Lavado

+
Sustrato

Enzimoinminoanálisis de absorción ELISA

Radioinmunoensayo
Es una prueba basada en la utilización de anticuerops
marcados con isótopos radiactivos (Yodo 125). Ésta es una técnica
directa que detecta bajísimas concentraciones de antígeno.

La prueba se utiliza en:

•Detección de Hormonas

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Radioinmunoensayo
Placa
Antígeno
Pocillo

Anticuerpo

Anticuerpo
marcado

Western Blot
Es una prueba en la cual se han separado las proteínas de
un microorganismo en base a su peso molecular por medio de
electroforesis y posteriormente transferidas a un papel de
nitrocelulosa y finalmente puestas en contacto con anticuerpos de
un paciente sospechoso de infección.

Prueba útil en el diagnóstico de:

•VIH
•VLTH
•Tifoidea
•Neurocisticercosis
•Paracoccidiodomicosis

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GEL DE SEPARACION TANQUE DE MANCHADO

A (-)
n
t (-)
í
g
e
n
o (+)
s (+)

Pépti dos separados Transferir pépt idos a la

lámina de Nitrocelulosa

Añadir anticuerpo, lavar Se revela y se

agregar conjugado
fija y se visualizan
radiomarcado las bandas
de antígenos.
AUTORRADIOGRAFÍA

Inmunocromatografía
Son pruebas serológicas que combinan el principio de
cromatografía con la reacción antígeno-anticuerpo, permitiendo
visualizar la reacción con marcadores de distinto tipo.

Prueba útil en el diagnóstico de:

•HGC
•Antígeno prostático
•Drogas

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Inmunocromatografía

Intradermoreacción
Es una prueba que consiste en inyectar antígenos a un organismo para
comprobar si se ha producido anticuerpos en respuesta a una infección
microbiana. Habitualmente se inyectan 0.1 mL de antígeno estandarizado y se
realiza la observación a la 24, 48 y 72 horas.

Técnica Reacción Positiva

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