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antigeno anticuerpo

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reacción antígeno anticuerpo
reacción antígeno anticuerpo

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REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO COMPONENTES

ANTIGENO
C. P

ANTICUERPO

L.T

CITOQUINAS
HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA

L-Memoria

SENSIBILIZACION

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
FASES DE LA REACCION 1.- F. Oculta… - unión Ag-ac estable pero imperceptible
- forman complejos inmunes circulantes - neutralización del antígeno - opsonización .

2.- F. Visible…. - exteriorizacion de la reaccion
- demostración del anticuerpo producido mediante pruebas serológicas Ag-ac - reacciones de hipersensibilidad inmediata o reacciones de hipersensibilidad tardía

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
DETERMINACION DE LA REACCION Ag-ac, EN LABORATORIO Pruebas serológicas ( Inmunoserologia ) 1.- Directas: Demostración del ac, mediante un Ag conocido Demostración del Ag, mediante un ac conocido 2.- Indirectas: Demostración del choque Ag-ac, mediante un anti-anticuerpo específico

Pruebas Serológicas Ag-ac
FACTORES MODULADORES
• FENOMENO DE ZONA (PROZONA): Una reacción Ag-ac , es perceptible si los dos componentes están en proporción similar. - exceso de cualquiera de los dos componentes puede inhibir la reaccion CONCENTRACION SALINA Y ph : cantidad minima de electrolitos para exteriorizar la reaccion Ag-Ac - soluc. Fisiológica(9ml de NaCl) optimo - ph ( 6 - 8.5 ). Optimo < o > concentracion inhibrn reacciones inmunologicas TEMPERATURA Y AGITACIÓN : - temperatura óptima ( 37- 40°C ) > mayor altera anticuerpos - permite una mayor expresión de determinantes antigénicos

TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS

PROPIEDADES
• • • • • Revelan generalmente determinados sistemas de reacción Antígeno-anticuerpo. El anticuerpo induce cambios en el Antígeno: ( aglutinación , precipitación, etc.) Técnicas simples detectan concentraciones altas de Ag o ac. Técnicas complejas detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac.

Clasificación
• Técnicas simples: - de precipitación, Aglutinación, - Fijación de Complemento, etc. • Técnicas con conjugados: - Inmunofluorescencia ( I-F ) - Radioinmunoensayo ( R.I.A ) - Inmunoenzimoensayo (ELISA)

TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS Técnicas simples Técnicas simples

Ventajas
Fácil implementación, técnicas sencillas No requieren mayor equipamiento. Bajo costo de operación Resultados reproducibles Fácilmente cuantificables Reactivos de fácil consecución y de caducidad manejable. -

Desventajas:
Detectan concentraciones altas de Ag o Ac. Posibilidad de fenómeno de Zona Menos sensibles y menos específicas. Cada técnica detecta un solo tipo de anticuerpo ( precipitinas, aglutininas)

REACCIONES DE PRECIPITACION
COMPONENTES • Antígeno: Reactivo
comercial soluble.

• Anticuerpo: Precipitinas (IgG) en el suero del pcte. • Reacción (+): formación de precipitados ( m.líquidos)
formación de halos de difusión (m.sólidos)

REACCIONES DE PRECIPITACION
TIPOS
• En medio líquido:
Halos de turbidez Precipitado granular fino Ej. Reacc . de V.D.R.L

En medios sólidos: en soporte de gel difunden los
componentes ( halos de difusión )

Difusión simple

Difusión doble
+

Ej. Reacc. De Oudin, Eleck y Outcherloni (difteria)

-

REACCIONES DE AGLUTINACION
COMPONENTES


Antígeno: Reactivo comercial adsorvido en soportes
Para glucósidos…. Como soporte utilizan Eritrocitos. Ej. Antígeno de Klebsiellas, Salmonellas, Tuberculina, etc.

11.

Para Lípidos…..

Como soporte…..cristales de colesterol y lecitina. Ej. Antígeno cardiolipínico, Reacc. De V.D.R.L.

17.

Para Proteínas…

Como soporte…..partículas de látex o eritrocitos Ej. Reacciones de PCR, FR, Tests de embarazo, otros.

( En ciertos casos se puede adsorver el ANTICUERPO en lugar del ANTIGENO ).

Anticuerpo: Generalmente presente en el suero del pcte

REACCIONES DE AGLUTINACION
Tipos de reacción
1.- Aglutinación Directa: El antígeno (aglutinogeno) forma parte
de una célula y es aglutinado por un anticuerpo comercial.(aglutinina) ej. Aglutinación de antígenos de eritrocitos ( sist. ABO, Rh ).

A

A
O

B

B

A-B

A B

O

RH +

RH A AB B RH + RH -

Reacciones de Aglutinación
2.- Aglutinación indirecta:
- Los Antígenos o los anticuerpos comerciales están fijados en SOPORTES:

a) partículas de LATEX, Ej. Reacciones de FR, PCR, GRAVINDEX, etc b) en ERITROCITOS ( R. de Hemaglutinación ).
Ej. Reacciones de DNA,Toxoplasma, etc.

- Los anticuerpos o antígenos que se buscan, están en el suero del paciente.
IgM Anti-PCR IgG

P.C.R

LATEX

F.R
Suero pcte….PCR

LATEX

Suero Pcte…Anti IgG ( F.R)

Reacciones de aglutinación
Ventajas
2. 3. 4. 5. 7. 8. Mas sensible y específica que la anterior. Sujeta con menos frecuencia a fenómeno de zona. Reactivos más variados Evaluación cualitativa y cuantitativa a simple vista

Desventajas
Falsas negativas en exceso de anticuerpo Problemas técnicos dependientes de los soportes

Otras Reacciones de Aglutinación
1. Reacciones de Hemaglutinación: - Utilizan Eritrocitos como soportes del antígeno o del anticuerpo
- La reacción positiva se expresa mediante aglutinación visible de los eritrocitos

2.

Reacciones de Hemólisis: - Utilizan al Eritrocito como soporte del antígeno o anticuerpo.
- La reacción positiva induce + permeabilidad de la membrana del eritrocito con liberación de hemoglobina al medio externo.

Otras Reacciones de Aglutinación
1. Reacciones de Inhibición de la Hemólisis:
Fundamento: Utilizan al eritrocito para demostrar en
pctes, infección por bacterias productoras de HEMOLISINAS ( estreptolisinas O ). La reacción positiva ( HEMOLISIS ) detecta ausencia de anti-estreptolisinas O …(ASTO NEGATIVO). La reacción negativa ( NO HEMOLISIS ) detecta presencia de antiestreptolisinas…(ASTO POSITIVO).

Reacción de inhibición de la hemólisis “ A.S.T.O ”
Suero A.S.T.O (+)
Paciente enfermo

Suero A.S.T.O (-)
Suero control

Eritrocitos O Estreptolisina

Eritrocitos O

Estreptolisina O Suero con antiestreptolisina Suero sin Antiestreptolisina O NO HEMOLISIS HEMOLISIS

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO
COMPONENTES 1.- Anticuerpo (IgG o IgM). (FIJADOR DE COMPLEMENTO) 2.- Antígeno: comercial 3.- U. de Complemento: 4.- Sistema Hemolítico: (Suero fresco de un animal)cobayo
( eritrocitos de conejo,sensibilizados) complejo ERITROCITO-anticuerpo

F de C +++ Lisis (----- )

F de C ------ Lisis (++++)

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO Propiedades
1.-Alta sensibilidad y especificidad ( + de 80%) 2.-Detecta pequeñas concent. de anticuerpo ( 1 mcgr. ). IgG-IgM 3.- Utiliza Antígenos solubles o particulados. 4.- Utilizado para titular anticuerpos o control de calidad de la técnicas anteriores. 5.- Técnica laboriosa., No utilizada de rutina
ej. Reacc. De Waserman…dx de sífilis Técnica para dosificar Complemento total o sus unidades

TECNICAS COMPLEJAS CON ANTICUERPOS o ANTIGENOS MARCADOS (“Conjugados”)

TECNICAS CON CONJUGADOS
.- VENTAJAS:
Altamente específicas y sensibles ( 90-96% ). Detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac. Pueden establecer cualquier tipo de Igs. ( IgD-IgE ). Reacciones tanto cualitativas como cuantitativas.

.- DESVENTAJAS:
Requieren implementación costosa. Reactivos de corta caducidad, costosos y en kits de multiples tests. Algunas pruebas son de manejo cuidadoso ( recíduos en el RIA ).

TIPOS DE REACCIONES
• 1.- Inmunofluorescencia ( I.F)..
fluoresceina(permite la visualizacion con luz ultravioleta)

marcador mas comun el Isotiocianato de

• 2.- Radioinmunoensayo ( R.I.A)..
anticuerpo esta marcado con sust radioactivas como el Yodo radiactivo ( Y125 - Y131 ).

• 3.- Enzimoinmunoensayo (E.L.I.S.A)..
Cutiliza como marcador substractos enzimaticos como fosfatasa alcalina o peroxidasas

METODOS PRINCIPALES
1.- Método Directo
En una sola etapa Técnica más simple…. Mas costosa….menos utilizada ..poca disponibilidad de conjugados

a.- Conjugado: Anticuerpo específico + Marcador de la reacción. b.- Antígeno: Muestra clínica del paciente cortes de tejido a estudiar obtenidos con crióstato y fijados a una placa de vidrio b b Positivo

a

METODOS PRINCIPALES
2.- Método Indirecto
• 1.- Etapa: Fase oculta.el antígeno comercial fijo en las paredes de un tubo se une al anticuerpo que está en la muestra del paciente.

2.- Etapa: Fase demostrativa.el conjugado: un segundo anticuerpo dirigido contra el Anticuerpo específico del paciente, se une al idiotipo de este. • 3.- La muestra positiva se detecta mediante captación de la substancia utilizada como marcador del conjugado, mediante aparatos adecuados que valoran la concentracion del Ac.

METODOS PRINCIPALES
2.- Método Indirecto
• 1.- Etapa: Fase oculta.-

2.- Etapa: Fase demostrativa.Fluorómetro

Contador gamma

Espectofotómetro

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