REACCIONES

ANTIGENO-ANTICUERPO
COMPONENTES
ANTIGENO
C. P ANTICUERPO

L.T
CITOQUINAS
HIPERSENSIBILIDAD
L-Memoria
RETARDADA

SENSIBILIZACION
 REACCIONES
ANTIGENO-ANTICUERPO
FASES DE LA REACCION
1.- F. Oculta… - unión Ag-ac estable pero imperceptible
- forman complejos inmunes circulantes
- neutralización del antígeno
- opsonización .

2.- F. Visible…. - exteriorizacion de la reaccion

- demostración del anticuerpo producido
mediante pruebas serológicas Ag-ac
- reacciones de hipersensibilidad inmediata
o reacciones de hipersensibilidad tardía
 REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO

DETERMINACION DE LA REACCION
Ag-ac, EN LABORATORIO
Pruebas serológicas ( Inmunoserologia )
1.- Directas:
Demostración del ac, mediante un Ag conocido

Demostración del Ag, mediante un ac conocido

2.- Indirectas:
Demostración del choque Ag-ac, mediante un
anti-anticuerpo específico
 Pruebas Serológicas Ag-ac
FACTORES MODULADORES

• FENOMENO DE ZONA (PROZONA):

Una reacción Ag-ac , es perceptible si los dos componentes están en
proporción similar.
- exceso de cualquiera de los dos componentes puede inhibir la
reaccion
• CONCENTRACION SALINA Y ph :
cantidad minima de electrolitos para exteriorizar la reaccion Ag-Ac
- soluc. Fisiológica(9ml de NaCl) optimo
- ph ( 6 - 8.5 ). Optimo < o > concentracion inhibrn reacciones
inmunologicas
• TEMPERATURA Y AGITACIÓN :
- temperatura óptima ( 37- 40°C ) > mayor altera anticuerpos
- permite una mayor expresión de determinantes antigénicos
 TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS
PROPIEDADES
• Revelan generalmente determinados sistemas de reacción
Antígeno-anticuerpo.
• El anticuerpo induce cambios en el Antígeno:
• ( aglutinación , precipitación, etc.)
• Técnicas simples detectan concentraciones altas de Ag o ac.
• Técnicas complejas detectan concentraciones muy bajas de Ag
o ac.

Clasificación
• Técnicas simples:
- de precipitación, Aglutinación,
- Fijación de Complemento, etc.
• Técnicas con conjugados:
- Inmunofluorescencia ( I-F )
- Radioinmunoensayo ( R.I.A )
- Inmunoenzimoensayo (ELISA)
 TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS
Técnicas simples
Ventajas
- Fácil implementación, técnicas
sencillas
- No requieren mayor
equipamiento.
- Bajo costo de operación
- Resultados reproducibles
- Fácilmente cuantificables
- Reactivos de fácil consecución
y de caducidad manejable.
Técnicas simples
Desventajas:
- Detectan concentraciones
altas de Ag o Ac.
- Posibilidad de fenómeno
de Zona
- Menos sensibles y menos
específicas.
- Cada técnica detecta un
solo tipo de anticuerpo
( precipitinas, aglutininas)
 REACCIONES DE PRECIPITACION

COMPONENTES

• Antígeno: Reactivo comercial soluble.

• Anticuerpo: Precipitinas (IgG) en el suero del pcte.

• Reacción (+): formación de precipitados ( m.líquidos)

formación de halos de difusión (m.sólidos)
 REACCIONES DE PRECIPITACION
TIPOS
• En medio líquido:
Halos de turbidez Precipitado

granular fino

Ej. Reacc . de V.D.R.L

• En medios sólidos: en soporte de gel difunden los
componentes ( halos de difusión )

Difusión simple Difusión doble

Ej. Reacc. De Oudin, Eleck y Outcherloni (difteria) -

 REACCIONES DE AGLUTINACION
COMPONENTES

• Antígeno: Reactivo comercial adsorvido en soportes

• Para glucósidos…. Como soporte utilizan Eritrocitos. Ej. Antígeno de Klebsiellas,

Salmonellas, Tuberculina, etc.

11. Para Lípidos….. Como soporte…..cristales de colesterol y lecitina.

Ej. Antígeno cardiolipínico, Reacc. De V.D.R.L.

17. Para Proteínas… Como soporte…..partículas de látex o eritrocitos

Ej. Reacciones de PCR, FR, Tests de embarazo, otros.

( En ciertos casos se puede adsorver el ANTICUERPO en lugar del ANTIGENO ).

Anticuerpo: Generalmente presente en el suero del pcte

 REACCIONES DE AGLUTINACION
Tipos de reacción

1.- Aglutinación Directa: El antígeno (aglutinogeno) forma parte

de una célula y es aglutinado por un anticuerpo comercial.(aglutinina)
ej. Aglutinación de antígenos de eritrocitos ( sist. ABO, Rh ).
A B A
A B A-B B
O RH +
O

RH -

A AB B RH + RH -
 Reacciones de Aglutinación

2.- Aglutinación indirecta:

- Los Antígenos o los anticuerpos comerciales están fijados en
SOPORTES:

a) partículas de LATEX, Ej. Reacciones de FR, PCR, GRAVINDEX, etc

b) en ERITROCITOS ( R. de Hemaglutinación ).
Ej. Reacciones de DNA,Toxoplasma, etc.
- Los anticuerpos o antígenos que se buscan, están en el suero del
paciente.

IgM Anti-PCR IgG

LATEX LATEX
P.C.R F.R

Suero pcte….PCR Suero Pcte…Anti IgG ( F.R)

 Reacciones de aglutinación

Ventajas
2. Mas sensible y específica que la anterior.
3. Sujeta con menos frecuencia a fenómeno de zona.
4. Reactivos más variados
5. Evaluación cualitativa y cuantitativa a simple vista
Desventajas
7. Falsas negativas en exceso de anticuerpo
8. Problemas técnicos dependientes de los soportes
 Otras Reacciones de Aglutinación

1. Reacciones de Hemaglutinación:
- Utilizan Eritrocitos como soportes del antígeno o del anticuerpo
- La reacción positiva se expresa mediante aglutinación visible de los
eritrocitos

2. Reacciones de Hemólisis:
- Utilizan al Eritrocito como soporte del antígeno o anticuerpo.
- La reacción positiva induce + permeabilidad de la membrana del
eritrocito
con liberación de hemoglobina al medio externo.
Otras Reacciones de Aglutinación

1. Reacciones de Inhibición de la
Hemólisis:
Fundamento: Utilizan al eritrocito para demostrar en
pctes, infección por bacterias productoras de
HEMOLISINAS ( estreptolisinas O ).

La reacción positiva ( HEMOLISIS ) detecta ausencia

de anti-estreptolisinas O …(ASTO NEGATIVO).

La reacción negativa ( NO HEMOLISIS ) detecta

presencia de antiestreptolisinas…(ASTO POSITIVO).
 Reacción de inhibición de la hemólisis
“ A.S.T.O ”
Suero A.S.T.O (+) Suero A.S.T.O (-)

Paciente enfermo Suero control

Eritrocitos O
Eritrocitos O
Estreptolisina
Estreptolisina O

Suero con
Suero sin
antiestreptolisina
Antiestreptolisina O

NO HEMOLISIS HEMOLISIS
REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO

COMPONENTES
1.- Anticuerpo (IgG o IgM). (FIJADOR DE COMPLEMENTO)

2.- Antígeno: comercial

3.- U. de Complemento: (Suero fresco de un animal)cobayo

4.- Sistema Hemolítico: ( eritrocitos de conejo,sensibilizados)

complejo ERITROCITO-anticuerpo

F de C +++ Lisis (----- ) F de C ------ Lisis (++++)

 REACCION DE FIJACION DEL
COMPLEMENTO
Propiedades
1.-Alta sensibilidad y especificidad ( + de 80%)
2.-Detecta pequeñas concent. de anticuerpo ( 1 mcgr. ).
IgG-IgM
3.- Utiliza Antígenos solubles o particulados.
4.- Utilizado para titular anticuerpos o control de calidad de
la técnicas anteriores.
5.- Técnica laboriosa., No utilizada de rutina
ej. Reacc. De Waserman…dx de sífilis
Técnica para dosificar Complemento total o sus unidades
 TECNICAS COMPLEJAS CON
ANTICUERPOS o ANTIGENOS MARCADOS
(“Conjugados”)

TECNICAS CON CONJUGADOS

.- VENTAJAS:

- Altamente específicas y sensibles ( 90-96% ).

- Detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac.
- Pueden establecer cualquier tipo de Igs. ( IgD-IgE ).
- Reacciones tanto cualitativas como cuantitativas.

.- DESVENTAJAS:

- Requieren implementación costosa.

- Reactivos de corta caducidad, costosos y en kits de multiples tests.
- Algunas pruebas son de manejo cuidadoso ( recíduos en el RIA ).
 TIPOS DE REACCIONES
• 1.- Inmunofluorescencia ( I.F)..
marcador mas comun el Isotiocianato de
fluoresceina(permite la visualizacion con luz ultravioleta)

• 2.- Radioinmunoensayo ( R.I.A)..

anticuerpo esta marcado con sust radioactivas como el Yodo
radiactivo ( Y125 - Y131 ).
• 3.- Enzimoinmunoensayo (E.L.I.S.A)..
Cutiliza como marcador substractos enzimaticos como
fosfatasa alcalina o peroxidasas
 METODOS PRINCIPALES
1.- Método Directo
- En una sola etapa
- Técnica más simple…. Mas costosa….menos utilizada ..poca disponibilidad de
conjugados

a.- Conjugado: Anticuerpo específico + Marcador de la reacción.

b.- Antígeno: Muestra clínica del paciente
cortes de tejido a estudiar obtenidos con crióstato y
fijados a una placa de vidrio

a b b

Positivo
 METODOS PRINCIPALES
2.- Método Indirecto
• 1.- Etapa: Fase oculta.-
el antígeno comercial fijo en las paredes de un tubo
se une al anticuerpo que está en la muestra del paciente.

• 2.- Etapa: Fase demostrativa.-

el conjugado: un segundo anticuerpo dirigido contra el
Anticuerpo específico del paciente, se une al idiotipo de
este.
• 3.- La muestra positiva se detecta mediante captación de la
substancia utilizada como marcador del conjugado, mediante
aparatos adecuados que valoran la concentracion del Ac.
 METODOS PRINCIPALES
2.- Método Indirecto
• 1.- Etapa: Fase oculta.-

• 2.- Etapa: Fase demostrativa.-

Fluorómetro

Contador gamma

Espectofotómetro