Reporte No.

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Preparacin de una curva patrn para
glucosa.

Centro de Ciencias Bsicas.

Departamento de Qumica.
Academia de Bioqumica.
Lic. Anlisis Qumicos Biolgicos.

Materia: Bioqumica I
Profesor: M.C. Javier Martnez Rodrguez.

Alumnas
Joselyn Georgina Flores Ibarra.
Dulce Mara Palos Dueas.
Alejandra Ramos Hernndez.

Fecha: 09/Noviembre/2017
OBJETIVO

INTRODUCCION

MATERIARES REACTIVOS
8 tubos de ensaye de 18*150mm Solucin patrn de glucosa (500
1 gradilla para tubos de ensaye g/mL).
1 pinzas para tubo de ensaye Reactivo de cobre estabilizado en
1 bao mara medio alcalino.
1 pipeta de 1mL Reactivo de fosfomolibdato.
1 pipeta de 10mL Solucin de glucosa de
1 celdilla de plstico de 3.5mL concentracin desconocida
1 espectrofotmetro a 540nm (problema).

PROCEDIMIENTO

RESULTADOS
 No. de Concentracin de
Absorbancia
Tubo Glucosa

1 0 mg 0

2 125 mg 0.403
3 250 mg 0.887

4 375 mg 1.152

5 500 mg 1.228

6 387 mg 0.951
Tabla 1 resultados de las concentraciones obtenidas de glucosa en cada tubo y las absorbancias
determinadas por el espectrofotmetro

Curva Patrn de Glucosa

1.6

1.4 y = 0.0026x + 0.093

R = 0.942
1.2
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 100 200 300 400 500 600
Concentracin de la protena (mg/ml)

Tabla 2 Curva patrn de Glucosa expresados a travs de una grfica de regresin lineal, el punto
naranja muestra en donde se encuentra el tubo problema.

Clculos para la obtencin de la concentracin de la protena de la solucin problema a

partir de la ecuacin de la recta.
Y=0.0026X+0.093
Y=Absorbancia=0.951

X= 0.951-0.0026 = 10.19

0.093
Imagen Observacin

En la imagen se observa el hidrolizado

neutro utilizado durante la prctica, el cual
presento una coloracin caf, y contena la
glucosa procedente del glucgeno del
hgado de rata.
Fig. 1

En la imagen se observan los tubos con

concentracin conocida de glucosa, as
como del tubo blanco y de la solucin
problema con el reactivo de cobre, los
cuales adquirieron una coloracin azul
claro.
Fig. 2

En la imagen se observan los tubos con la

glucosa y el reactivo de cobre despus de
calentar durante 20 minutos a ebullicin.
Los tubos adquirieron una coloracin rojiza
de diferentes tonalidades, con excepcin
del tubo blanco, el cual sigui azul.
Fig. 3

Al momento de agregar la solucin de

fosfomolibdato, los tubos pasaron de una
coloracin rojiza a una coloracin azul
intensa.

Fig. 4
 El mezclar los tubos, se obtuvieron distintas
tonalidades de azul marino, para medir
posteriormente la absorbancia de cada
tuvo con la ayuda del espectrofotmetro.

Fig. 5
Tabla 3 Observaciones

DISCUSIONES
FLORES IBARRA JOSELYN
La curva de calibracin es un mtodo muy utilizado en qumica analtica para determinar la
concentracin de una sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo en
disoluciones. El mtodo se basa en la relacin proporcional entre la concentracin y una
determinada seal analtica (propiedad). Conociendo esta relacin, ser posible conocer la
concentracin en una muestra dada mediante la medida de esa seal. La relacin
concentracin seal se suele representar en una grfica a la que se le conoce como curva
de calibracin o curva de calibrado. (Skoog, D. A., 2001)
Es imprescindible que la seal analtica utilizada mantenga una relacin proporcional con
la concentracin. Las seales ms utilizadas son aquellas cuya relacin con la
concentracin es lineal, al menos en el rango de trabajo. Por ejemplo, una de las
propiedades ms utilizadas es la absorbancia (absorcin lumnica) que suele mantener una
relacin lineal con la concentracin de solutos en disoluciones. Al ser una relacin lineal, se
puede representar mediante una recta, de ah que este tipo especfico de curva de
calibracin se conozca tambin como recta de calibracin. (Skoog, D. A., 2001)
Muchos compuestos absorben luz en las regin es visibles o ultravioleta del espectro y esta
propiedad puede utilizarse para determinar su concentracin. La capacidad de absorcin
(absorbencia) de la luz depender tanto del tipo de compuesto como de su concentracin
y de la longitud de onda empleada. Por eso se utiliza luz monocromtica, es decir luz con
una longitud de onda definida que puede aislarse a partir de luz blanca por medio de un
monocromador. La luz monocromtica de intensidad o pasa a travs de un recipiente
cuadrangular de vidrio o cuarzo que contiene una solucin material absorbente. La
intensidad de la luz que sale, atenuada, se mide en un detector. La absorcin de una
solucin se define como el logaritmo negativo del cociente, de acuerdo con la ley de Lmbert-
Beer, la Aes proporcional a la concentracin del material absorbente y al espero de la
solucin. El coeficiente de absorcin y depende, como se mencion anteriormente, del tipo
de sustancia y la longitud de onda. (Gamero-Inda, 1999)
La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene
fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el hgado,
el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre
(glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hgado sea
adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el pncreas.
La glucosa al someterse a la Reaccin de Benedict dan un resultado positivo debido a que
presentan un precipitado de color rojo ladrillo o anaranjado (xido cuproso) lo cual es la
evidencia de un azcar reductor. En las muestras de glucosa en la reaccin de Benedict
tienen la capacidad de reducir al cobre y formar un precipitado de color anaranjado o rojizo
por lo que podemos afirmar que son azcares reductores.
PALOS DUEAS DULCE MARA

RAMOS HERNNDEZ ALEJANDRA

La curva de calibracin se puede decir que es un mtodo que se utiliza comnmente en
qumica y bioqumica cuando se trabaja en el laboratorio, siguiendo la definicin de William
H. H. (1977), en su libro Mtodos instrumentales de anlisis menciona que determina las
concentraciones de alguna sustancia en una muestra desconocida, sobretodo en
disoluciones, en otras palabras, se puede presentar con una grfica de una seal que se
mide en la funcin de la concentracin del analtico esto mayormente se usa para conocer
resultados de concentracin de algn compuesto.
Una curva patrn sirve para comparar una propiedad del analito con la de estndares de
concentracin conocida del mismo analito (o de algn otro con propiedades muy similares
a ste), y para realizar la comparacin se requiere utilizar mtodos y equipos apropiados
para la resolucin del problema de acuerdo al analito que se desee determinar.
La importancia de adquirir estos conocimientos consiste en que con tales mtodos podemos
analizar x analito, ahora bien, a lo largo de la carrera y ms adelante en la industria es
importante aplicarlos ya que muchas veces en la industria se requiere la detencin de tales
concentraciones, pues bien, con esta prctica entendemos el comportamiento de las
funciones, as como la obtencin de resultados.
Se puede pensar que el anlisis de los analitos es algo sencillo de hacer, pero la realidad
es diferente, para poder obtener el resultado correcto se requiere de una serie de pasos a
seguir e donde con frecuencia llegamos a equivocarnos, como equipo podemos discutir que
la preparacin de nuestras habilidades antes de realizar cualquier experimento es
fundamental para obtener mejores resultados sim embargo muchas de las veces ya sea
por el tiempo o la disponibilidad del laboratorio no obtenemos o adquirimos esa experiencia,
por lo que nos lleva a cometer errores que arruinan nuestro experimento.

CONCLUSIONES
FLORES IBARRA JOSELYN
Existe una relacin entre intensidad de color y la concentracin de la sustancia, con base
en la Ley de Lambert-Beer podemos afirmar que la absorbancia de una solucin es
directamente proporcional a su concentracin a mayor nmero de molculas mayor
interaccin de la luz con ellas; tambin depende de la distancia que recorre la luz por la
solucin a igual concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra ms
molculas se encontrar; y por ltimo, depende de , una constante de proporcionalidad
denominada coeficiente de extincin que es especfica de cada cromforo.
Mediante la reaccin de Benedict podemos identificar azcares reductores y comprobar que
la reduccin que se lleva a cabo es por el efecto del grupo aldehdo del azcar (CHO) en
forma de Cu+ y el nuevo ion se observa a modo de precipitado de color rojo anaranjado o
amarillo ladrillo que corresponde al xido cuproso(Cu2O).
PALOS DUEAS DULCE MARA

RAMOS HERNANDEZ ALEJANDRA

El objetivo de la prctica se cumpli satisfactoriamente, debido a que se prepar una curva
patrn para glucosa, y a partir de esta curva, se determin la concentracin de glucosa de
una solucin problema proveniente de hgado de rata en ayuno o alimentada, mediante la
interpolacin de la curva patrn.
Al finalizar la prctica se aprendi que una curva patrn se construye al graficas valores
conocidos de concentracin de una sustancia de inters contra las unidades obtenidas al
aplicar a dicha sustancia un mtodo qumico, en este caso se grafic la concentracin de
glucosa conocida en diferentes tubos, contra la absorbancia medida con el
espectrofotmetro.
Durante la prctica se utiliz la reaccin entre la glucosa, el sulfato cprico y una solucin
de fosfomolibdato para producir productos coloridos, de diferente intensidad en base a la
concentracin de glucosa, es decir, se aplicaron tcnicas bioqumicas en las que se mide
la intensidad del color de una sustancia para conocer su concentracin.

CUESTIONARIO
1. Investigue y escriba con detalle todas las reacciones bioqumicas llevadas a cabo
en esta prctica.
La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidacin, que como conocemos, nos
ayuda al reconocimiento de azcares reductores, es decir, aquellos compuestos que
presentan su OH anomrico libre, como por ejemplo la glucosa, lactosa o maltosa o
celobiosa, en la reaccin de Benedict, se puede reducir el Cu2+ que presenta un color azul,
en un medio alcalino, el ion cprico (otorgado por el sulfato cprico) es capaz de reducirse
por efecto del grupo aldehdo del azcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se
observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al xido cuproso (Cu2O), que
precipita de la solucin alcalina con un color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera
como la evidencia de que existe un azcar reductor.
2. Qu es una curva patrn y qu utilidad tiene?
La curva de calibracin es un mtodo muy utilizado en qumica analtica para determinar la
concentracin de una sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo en
disoluciones. El mtodo se basa en la relacin proporcional entre la concentracin y una
determinada seal analtica (propiedad).
Un procedimiento analtico muy utilizado en anlisis cuantitativo es el llamado de calibracin
que implica la construccin de una curva de calibracin. Una curva de calibracin es la
representacin grfica de una seal que se mide en funcin de la concentracin de un
analito. La calibracin incluye la seleccin de un modelo para estimar los parmetros que
permitan determinar la linealidad de esa curva y, en consecuencia, la capacidad de un
mtodo analtico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la
concentracin de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de
trabajo. En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estndares de
concentracin conocida del mismo analito (o de algn otro con propiedades muy similares
a ste). Para realizar la comparacin se requiere utilizar mtodos y equipos apropiados para
la resolucin del problema de acuerdo al analito que se desee determinar.
3. Cmo se interpreta un valor de una curva patrn?
La curva de calibrado se construye midiendo la seal analtica en cada uno de los patrones
previamente elaborados. En el eje de ordenadas se asigna el valor de la seal medida y en
el eje de abscisas la concentracin del patrn. De esta forma podemos sealar puntos en
la grfica segn las coordenadas (concentracin (x), seal (y)).
A estos puntos podemos aplicar la regresin lineal, generalmente mediante el ajuste por
mnimos cuadrados, para obtener la recta que los relaciona y su funcin.
4. Investigue y explique los fundamentos de los siguientes mtodos de cuantificacin
de carbohidratos en muestras biolgicas: a) mtodos de Dubois, b) mtodo de
polarimetra, c) cromatografa de gases con derivatizacin y detector de ionizacin
de flama, d) cromatografa lquida de detector de ndice de refraccin y con detector
de amperometra. Describa las ventajas, desventajas, sensibilidades y aplicaciones
de cada uno de estos mtodos.
Mtodo de Dubois. Esta determinacin consiste en hacer reaccionar el azcar con fenol
utilizando cido sulfrico para generar un compuesto colorido.
Estructura del complejo generado a partir de la reaccin de fructosa con fenol en medio cido

Existiendo una estrecha relacin entre la intensidad de coloracin y la concentracin de

azcares reductores presentes en la muestra. Est tcnica determina concentraciones
bajas de azcar, teniendo como lmite mximo las 60 ppm.
Mtodo de Polarimetra. Es un mtodo de anlisis qumico que nos permite medir el
cambio que sufre el plano de luz polarizada cuando atraviesa un medio transparente
formado por sustancias pticamente activas Es una tcnica que se basa en la medicin
de la rotacin ptica producida sobre un haz de luz polarizada al pasar por una sustancia
ptimamente activa. La actividad ptica rotatoria de una sustancia, tiene su origen en la
asimetra estructural de las molculas.
El polarmetro permite medir la concentraciones de soluciones de sustancias pticamente
activas, esto es de sustancias que producen rotacin del plano de oscilacin de la luz que
la atraviesa.
Como la luz natural est compuesta por oscilaciones electromagnticas que oscilan en
todos los planos, debemos individualizar slo uno de esos planos y luego analizar la
direccin de oscilacin luego de que la luz atraves la muestra.
Cromatografa de gases con detector de ionizacin de llama o GC-FID: es una tcnica
analtica muy comn cuyo uso est muy extendido en los mercados petroqumicos,
farmacuticos y de gas natural. Un detector de ionizacin de llama suele utilizar una llama
de aire o hidrgeno por la cual se pasa la muestra para oxidar las molculas orgnicas y
que produce partculas con carga elctrica (iones). Los iones se recogen y se produce una
seal elctrica, que se mide a continuacin.
Como es habitual tambin en otras tcnicas de cromatografa de gases, se necesita un gas
portador con pocas impurezas de agua y oxgeno, ya que el agua y el oxgeno pueden
interactuar con la fase estacionaria y provocar problemas significativos, como un elevado
ruido de lnea base y purga de la columna en el cromatograma de gases de salida, lo que
reducira la sensibilidad del analizador y la vida til de la columna. El detector de ionizacin
de llama es adems extremadamente sensible a las impurezas de hidrocarburo del
suministro de hidrgeno y aire de la llama. Estas impurezas pueden aumentar el ruido de
lnea base y reducir la sensibilidad del detector.
Detector de ndice de refraccin El detector de ndice de refraccin, es el detector de uso
corriente de respuesta ms universal. El ndice de refraccin es una caracterstica fsica
definida de todos los compuestos. La deteccin se basa en equilibrar el detector, a caudal
constante, con fase mvil pura y medir el cambio de ndice de refraccin cuando aparece
la muestra eluida junto con la fase mvil. Resulta obvio que cuanto mayor sea la diferencia
entre los ndices de refraccin de la muestra y de la fase mvil, mayor ser el desequilibrio,
por tanto, la mxima sensibilidad se obtendr cuando exista una diferencia mxima entre
los respectivos ndices de refraccin. Sin embargo, aparecen ocasionalmente algunos
problemas al efectuar la eleccin de un sistema de fase mvil, que sea compatible con el
tipo de separacin y con los componentes del instrumento, para que su ndice de refraccin
sea diferente del de la muestra. Por otra parte, en mezclas complejas, los ndices de
refraccin de los componentes de la mezcla pueden cubrir un amplio intervalo de valores y
algunos de ellos pueden ser muy cercanos al de la fase mvil, con lo que resultarn
invisibles para el detector. Otro inconveniente de la deteccin por ndice de refraccin, es
la necesidad de reequilibrar el detector cada vez que se produce un pequeo cambio en la
composicin de la fase mvil. Este factor resulta muy limitativo, puesto que convierte al
detector de ndice de refraccin en inutilizable en las separaciones con elucin por
gradiente, en las que la composicin de la fase mvil cambia durante el anlisis; por
supuesto, es posible intentar la preparacin de mezclas de disolventes de alta y baja
polaridad, mezclados cuidadosamente para mantener igual el ndice de refraccin a lo largo
de todo el anlisis, pero resulta sumamente difcil de realizar a menos que se trabaje
solamente a baja sensibilidad.

BIBLIOGRAFAS
Skoog, D. A., Holler, F.J. & T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. 5ta
Edicin, Editorial McGrawHill.
Gamero-Inda, E.; Flores- Morfin, J.; Fuzzy control of a biotechnology process Fuzzy
Information Processing Society, 1999. NAFIPS.