CÓDIGO: P-QB-GU-10.002.

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Actividad 2 y 2A. Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas.

El que se conoce como método de Bradford es un ensayo habitual para medir
la concentración de proteínas en una muestra. Se basa en que la unión del
colorante azul de Coomassie (Coomassie Brilliant Blue G250) a las proteínas
modifica el espectro visible de aquél.
Materiales: Se dispone de

 reactivo de Bradford (concentrado ×3), que contiene azul de Coomassie,

metanol o isopropanol, y ácido fosfórico

 proteínas disueltas en agua

Diseño del experimento: Todas las cubetas deben contener 1 mℓ del reactivo
de Bradford concentrado y un volumen total de 3 mℓ. En la primera cubeta no
se pondrá proteína, mientras que otras dos cubetas llevarán cantidades
diferentes de la disolución de proteína. Utiliza agua para completar el volumen.
Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente esta tabla (o mejor, una que
hagas en tu cuaderno de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en
cada cubeta:

Tabla de volumenes en las cubetas.

Calibración: Introduce la primera cubeta (que sólo contiene reactivo de Bradford)
en el espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 595 nm y pulsa el botón
“A=0”. Esta muestra se denomina el "tubo blanco" o "blanco de reactivos" y sirve
para que el color propio del reactivo no se considere en la determinación de
proteínas.

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Calibración.
Medida: A continuación, introduce el resto de las cubetas, de una en una, en el
espectrofotómetro y anota sus medidas de absorbancia.

Cubeta 1. Medidas de absorbancia

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Cubeta 2. Medidas de absorbancia

Cubeta 3. Medidas de absorbancia

Tabla registro de medidas en las cubetas.

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Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las

cubetas y el valor de absorbancia. Comparando entre sí las medidas, ¿observas
alguna dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de
proteínas en la cubeta?
R// entre mayor sea la concentración de proteínas dentro de la cubetas, la
coloración es de un tono morado más fuerte, y entre menor sea la concentración
de reactivo y proteínas la coloración es un poco más clara, así mismo vemos esto
en los valores de absorbancia pues entre más colorida y concentrada sea nuestra
sustancia en las cubetas su valor es mayor, a diferencia de las cubetas que
observamos las tonalidades más claras y sus medidas son menores.
Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la
mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de
800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?
R//

Tabla. Concentración de proteinas

Concentración * absorbancia de la concentración

Resultado de Medida de absorbancia
1.
800 x 0.004 = 3.2 / 0.655 = 4.88
2.
800 x 0.333 = 266.4 / 0.655 = 407
3.
800 x 0.655 = 524 / 0.655 = 800

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R// se pudo observar que a mayor concentración mayor la absorbancia y en el

gráfico al comparar A frente a C vemos que es directamente proporcional lo que
comprueba que entre más reactivo y proteína contenga nuestra cubeta las
medidas serán mayores en el dispositivo

CONCLUSIONES
En la actividad A2 se puede concluir que el método de Bradford es útil para saber
cuál es la concentración de proteínas en una muestra tras realizar ensayos que
prueban que entre más cantidad haya en una cubeta veremos las medidas
reflejadas en nuestros procesos matemáticos, de esta forma podemos llegar a un
valor aproximado para asegurarnos de que nuestras observaciones son válidas.

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